葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中原花青素成分研究

葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中原花青素

成分研究

杨清山1，2

，张燕1，连运河2，高伟2，周丽2

（1.天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457；2.晨光生物科技集团股份有限公司，

河北邯郸057250）

摘

要：建立葡萄籽提取物中7种原花青素成分的高效液相色谱测定方法。以该方法对不同品种的葡萄籽、松树皮

和花生衣提取物进行测定分析。结果表明：葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中的原花青素成分种类和含量水平差异较大。不同品种的葡萄籽提取物中原花青素成分种类水平一致，不同品种的花生衣提取物中原花青素成分种类水平也一致，而不同品种的松树皮提取物中原花青素成分种类差距较大。该方法可以用于简单快速地区分葡萄籽提取物、松树皮提取物和花生衣提取物。

关键词：葡萄籽；松树皮；花生衣；原花青素

Research of Procyanidins in Grape Seed ，Pine Bark and Peanut Coat Extract

YANG Qing-shan 1，2

，ZHANG Yan 1，LIAN Yun-he 2，GAO Wei 2，ZHOU Li 2

（1.College of Food Engineering and Biotechnology ，Tianjin University of Science &Technology ，Tianjin

300457，China ；2.Chenguang Biotech Group Co.，Ltd.，Handan 057250，Hebei ，China ）

Abstract ：A high performance liquid chromatographic method was established for determining 7kinds of pro －cyanidins component in grape seed extract.Based on this method ，different varieties of grape seed extract ，pine bark and peanuts coat extract were analyzed.The results showed that ：there was great difference in procyanidins omponent types and levels among grape seed extract ，pine bark and peanuts coat extract.Different varieties of grape seed extract had similar procyanidins component types ，and different varieties of peanuts coat extract had similar procyanidins component types too.But different varieties of pine bark extract had different procyanidins component types.Due to this method ，it can be distinguished grape seed extract ，pine bark and peanuts coat ex －tract easily and quickly.

Key words ：grape seed ；pine bark ；peanut coat ；procyanidins

食品研究与开发

F ood Research And Development

2017年5月

第38卷第10期

DOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2017.10.037

作者简介：杨清山（1985—），男（汉），工程师，学士，研究方向：食品分析和检测。

原花色素是一大类多酚化合物的总称，其主要有黄烷醇单体及其聚合体组成，该化合物的共同点均是能够在酸性条件下加热分解产生花青素（cyanidins ），故将这类多酚化合物命名为原花青素（Proanthocyani －

dins ，简称PC ）[1]

。原花青素在葡萄籽和皮、松树皮、花生

衣、

山楂果、刺葵、银杏叶、荔枝和草莓中广泛存在[2-7]，但目前研究最多的来源是葡萄籽和葡萄皮中的原花青素[8]。原花青素是由儿茶素或表儿茶素单体按照不

同的方式和数量缩合而成，最简单的原花青素二聚体是由儿茶素或表儿茶素自身缩合，或者由进行缩合，此外单体间还可以再形成三聚体、

四聚体、五聚体等直至更多聚体[9]。原花青素具有较高的生理和药理活性，包括抗氧化、保护心血管和调节免疫活性等，此外还有具有抑制酶活性、

抗病毒、抗真菌活性、抗溃疡、促进毛发生长、保护皮肤、保护肝脏、抗腹泻活性、抗致突变作用和抗抑郁等功效[10]。

松树皮和花生衣作为原花青素的重要来源，其提取物具有相似的结构，同样也具备一定的生理和药理活性，但其功效远不及葡萄籽提取物[11-12]。由于松树皮

标准与检测

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和花生衣提取物的生产成本较低，近些年来一些不法商贩在葡萄籽提取物中以掺入或者以直接代替的方式，以次充好来获取利益，严重扰乱了葡萄籽提取物的市场。本文建立了一种能够同时测定葡萄籽提取物中7种原花青素的高效液相色谱方法，并对不同品种的葡萄籽、松树皮和花生衣提取物进行检测分析。通过对比不同来源提取物中原花青素各个组分及含量情况，可以简单快速的区分这3类提取物。该方法为规范葡萄籽提取物市场及真伪鉴别提供了技术手段。

1材料和方法

1.1仪器和试剂

Agilent1260液相色谱仪，配四元泵和紫外检测器：美国安捷伦科技有限公司；JJ300电子天平：常熟市双杰测试仪器厂；AUW220D电子天平：河北汇博云海科技发展有限公司；DK-S24电子恒温水浴锅：上海森信实验仪器有限公司；R213B旋转蒸发仪：上海申生科技有限公司；FW100高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；101-0N电热鼓风干燥箱：天津华北试验仪器有限公司；TG16-WS台式高速离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；TH-300BQ数控超声清洗器：济宁天华超声电子仪器有限公司。

没食子酸（纯度89.9%）：购自中国食品药品检定研究院；原花青素B1（纯度95%）、原花青素B2（纯度98%）、EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯）（纯度98%）、ECG（表儿茶素没食子酸酯）（纯度99%）：购自天津一方科技有限公司；儿茶素（纯度98%）：购自上海源叶生物科技有限公司；表儿茶素（纯度98%）：购自中国药品生物制品鉴定所。

乙腈、甲醇（色谱纯）：购自安徽时联特种溶剂股份有限公司；乙醇、磷酸（分析纯）：购自天津市光复科技发展有限公司。

葡萄籽（7种）：法国、新疆、河北昌黎、山东、甘肃莫高、新疆白葡萄和西部牧业，均从市场购买；松树皮（7种）：樟子松、落叶松、马尾松、红松、外国松、沐阳样品和杭州样品，均从市场购买；花生（9种）：黑花生8#、鲁花11#、豫花C-3000、花育22、四粒红、小白沙、丰花1#、山东样品和亳州样品，均从市场购买。

树脂：大孔吸附树脂（型号LXA-8），由西安蓝晓科技有限公司提供。

1.2色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6×150mm，5μm）；波长：278nm；色谱柱温度：40℃；进样量：5μL；运行时间：29min；流速：1.2mL/min。

流动相：乙腈（A）-0.3%磷酸水（B）。梯度条件：0min：10%A；15min：18%A；23min：60%A；24min：10%A；29min：10%A。

1.3标准品溶液的配制

1.3.1标准储备液

分别准确称取没食子酸、原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素、EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯）和ECG（表儿茶素没食子酸酯）对照品10mg左右，置于同一个25mL棕色容量瓶中，用色谱级甲醇定容，超声溶解，摇匀，转移至专用标准液瓶中，作为储备液，浓度为0.4mg/mL。

1.3.2标准工作液

将储备液做2倍梯度稀释，得到5个浓度水平的工作液，分别为0.2、0.1、0.05、0.025mg/mL，做标准曲线，确定线性范围。移取5mL储备溶液至于25mL棕色容量瓶中，用色谱级甲醇定容，摇匀，转移至专用标准液瓶中，作为工作液，浓度为0.08mg/mL。

1.4样品溶液的制备

1.4.1样品预处理

1）葡萄籽：用万能粉碎机将样品粉碎，粉碎细度为20目通过率80%以上。最后将葡萄籽粉混合均匀，备用。

2）松树皮：将样品用剪刀剪成1cm左右小块，置于40℃干燥箱中进行干燥处理。最终烘至水分在15%以下，然后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎细度为20目通过率80%以上。最后将松树皮粉混合均匀，备用。

3）花生：先将花生进行去壳处理，再将花生果实置于40℃干燥箱中进行干燥处理。烘至可以脱皮为止。用手进行揉搓脱皮处理，将脱下的皮（花生衣）用万能粉碎机进行粉碎，粉碎细度为20目通过率80%以上。最后将花生衣粉混合均匀，备用。

1.4.2提取物制备

1）萃取：取1.4.1制备好的各个样品150g，用纱布包好后置于1000mL烧杯中，用含有0.5g/100mL磷酸的50%乙醇（体积分数）溶液进行萃取。萃取温度65℃，萃取3遍，萃取溶剂料液比分别为1∶5、1∶3和1∶2（g/mL），时间分别为3、2、1h，合并萃取液。

2）纯化：将萃取液浓缩至干，加入2.5L纯净水溶解，冷却至室温，离心（4000r/min，10min），取离心上清液上大孔吸附树脂柱（LXA-8）进行吸附，流速1BV/h。使用0.5L纯净水清洗，流速1.5BV/h～2BV/h。最后用0.5L70%乙醇（体积分数）溶剂进行解吸，流速1BV/h。

杨清山，等：葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中原花青素成分研究标准与检测160