转录基本知识

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A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度,A230表 示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯净 的核酸A260/A230的比值大于2.0 。
二,转录的分子事件 1,转录概念
Fra Baidu bibliotek
在 RNA 聚 合 酶 的 催 化 下 , 以 一 段 DNA 链 为 模 板 合 成 RNA,从而将DNA所携带的遗传信息传递给RNA的过 程称为转录(transcription)。
3, RNA 种类及功能
RNA按功能不同分为三类,即 信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)及核蛋白 体RNA(rRNA)。 在大多数细胞中RNA的含量比DNA多5~8倍。
RNA理化特点
RNA与DNA最重要的区别一是RNA只有一条链,二是它的碱基组 成与DNA的不同,RNA没有碱基T(胸腺嘧啶),而有碱基U (尿嘧啶)。所以导致他们有以下性质上的不同。 1.两性解离:DNA无,只有酸解离,碱基被屏蔽(在分子内部形 成了H键)。RNA有,有PI。 2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状 分子,RNA为线团。
子代细胞的生长发育过程中,这些遗传信息通过转录传递给RNA,再由 RNA通过翻译转变成相应的蛋白质多肽链上的氨基酸排列顺序,由蛋白质执 行各种各样的生物学功能,使后代表现出与亲代相似的遗传特征。
一些RNA病毒能以自己的RNA为模板A为合成DNA,称为逆转录这是中 心法则的补充。
RNA 生物 合成主要内容
3.碱的作用:DNA耐碱RNA易被碱水解。 4.显色反应: 鉴别DNA和RNA+浓HCl RNA ------→ 绿色化合物 DNA ------→ 蓝紫色化合物苔黑酚 二苯胺啡啶溴红(荧光染料)和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是 卡在分子中,DNA的离心和电泳显色可用它们。
5.溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙 醇来沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而 RNA不溶,故可用苯酚来沉淀RNA。 6.紫外吸收:核酸的λm=260nm,碱基展开程度越 大,紫外吸收就越厉害。当A=1时,DNA: 50ug/ml,RNA和单链DNA:40ug/ml,寡核苷酸: 20ug/ml。用A260/A280还可来表示核酸的纯度。
rRNA不单独存在,它与蛋白质结合为核蛋白体,分为 大小亚基,存在于粗面内质网与胞浆中。核蛋白体是 蛋白质生物合成的场所。
snRNA 参与RNA 剪辑
经转录生成的RNA有多种,主要的是rRNA,tRNA, mRNA,snRNA(small nuclear RNA和HnRNA等。
转录
DNA
RNA
mRNA携带了DNA的遗传信息,在蛋白质合成中作为 合成蛋白质的模板起传递遗传信息的作用。
tRNA的二级结构最具特色,呈三叶草型。其主要功能 部位有二个,一是氨基酸臂的 3’末端为-CCA-OH,起 特异结合氨基酸作用;二是有一个反密码环,环上有 反密码子,与mRNA上的密码子反向互补,于是由 tRNA携带的氨基酸可被转运到与密码子对应的部位, 因此tRNA具有携带转运氨基酸的作用。tRNA的三级 结构为倒“L”型,是天然状态下的构象。
第三章 转录基本知识
RNA的生物合成
RNA Biosynthesis, Transcription
遗传信息传递的 中心法则
复制
DNA
转录 逆转录
RNA 复制
翻译
蛋白质
生 物 的 遗 传 信 息 以 密 码 的 形 式 储 存 在 DNA 分 子 上 。 细 胞 分 裂 过 程 中 , DNA复制把亲代细胞所含的遗传信息忠实地传递给子细胞。
A230nm ,是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样 品纯度评估:纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于 2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要 纯化样品。
A260/A280和A260/A230 :是核酸纯度的指示值,纯度好的DNA,在 pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5,A260 / A280的比值, 用于评 估样品的纯度, 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大 于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示 存在蛋白质或者酚类物质的影响。
8.电泳:核苷酸、核酸均可以进行电泳,泳动速度 主要由分子大小来决定,因此,电泳是测定核酸分 子量的好方法。
紫外分光光度计 A260/A280和 A260/A230的含义
A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至 1.0。
A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸 样品纯度评估:纯DNA的A260/A280比值为1.8,纯RNA为2.0。如 果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质的污染,需要纯化 样品。比值=1.5相当于50%蛋白质/DNA溶液
一, RNA 基本性质 1,RNA 化学结构 2,RNA 分子结构 3,RNA 种类 及功能 二,转录的分子事件 1,转录概念 2,转录基本特点 3,转录发生过程(原核生物真核生物差异): (1)转录的酶与蛋白因子 (2)转录启动区域:启动子 (3)转录的起始,延伸及结束 4,真核转录后加工
三:RNA降解 四:RNA转录应用
1,RNA 化学结构 RNA /DNA Structure
RNA含有四种基本碱 基,即腺嘌呤、鸟嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶。 此外还有几十种稀有 碱基。
2 RNA的分子结构
RNA的一级结构主要是由AMP、GMP、CMP和 UMP四种核糖核苷酸通过3‘,5’磷酸二酯键相连而成 的多聚核苷酸链。 天然RNA的二级结构,一般并不像DNA那样都是双螺 旋结构,只有在许多区段可发生自身回折,使部分A-U、 G-C碱基配对,从而形成短的不规则的螺旋区。不配 对的碱基区膨出形成环,被排斥在双螺旋之外。RNA 中双螺旋结构的稳定因素,也主要是碱基的堆砌力, 其次才是氢键。每一段双螺旋区至少需要4~6对碱基 对才能保持稳定。在不同的RNA中,双螺旋区所占比 例不同。 构。
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