1细胞生物学实验技术

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第一章 显微镜技术
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普通显微镜的构造及使用方法 相差显微镜的构造及使用方法 荧光显微镜的构造及使用方法 激光扫描共聚焦显微镜的构造
及使用方法 透射电子显微镜与超薄切片技
术 扫描电子显微镜与样品制备
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显微镜分类：
➢ 光学 显微镜：
可把物体放大1500倍，分辨的最小 极限为0.2μm。
Robert Hooke （1636～1702）， 1665年，他在《显 微图谱》中第一次 使用“细胞”一词。
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Hooke使用的显微镜 Hooke观察到的软木结构
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第二阶段
从19世纪30年代到20世纪初期，细胞学说形成后，开始了在显微水 平研究细胞的结构与功能。形态学、胚胎学和染色体知识的积累， 使人们认识了细胞在生命活动中的重要作用。 • 1893年Hertwig的专著《细胞与组织》（Die Zelle und die Gewebe） 出版，标志着细胞学的诞生。 • 1896年哥伦比亚大学Wilson编著的《细胞发育与遗传》（The Cell in Development and Heredity）、1920年墨尔本大学Agar编著的《细胞 学》（Cytology ）都是这一领域最早的教科书。
物镜的焦距（F1）短，目镜的焦距（F2） 略长。物体AB位于物镜的2倍焦距和1倍焦距 之间，所以在物镜的像方形成一个倒立的放大 的实像A’B’；A’B’位于目镜的1倍焦距以内， 经目镜放大为虚像A’’B’’，A’’B’’位于人眼的明 视距离内。A’’B’’的视角比眼睛直接看AB时视 角大得多，所以用显微镜可以看清微小的东西， 但人眼通过目镜所看到的是被放大了2次的倒 立的像。
细胞生物学实验技术
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前言
➢ 细胞生物学
英文名称：cell biology
定义：从细胞整体、显微、亚显微 和分子等各级水平上研究细胞结构、
功能及生命活动规律的学科。
发展：细胞生物学由Cytology发展而来，它是关于细胞结 构与功能(特别是染色体)的研究。现代细胞生物学从显微 水平，超微水平和分子水平等不同层次研究细胞的结构、
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线粒体超微结构
线粒体结构示意图
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第四阶段
从20世纪70年代基因重组技术的出现到当前，细胞生物学与分子生 物学的结合愈来愈紧密，研究细胞的分子结构及其在生命活动中的作用 成为主要任务，基因调控、信号转导、肿瘤生物学、细胞分化和凋亡是 当代的研究热点。
细胞信号转导途径 细胞凋亡示意图
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第三阶段
从20世纪30年代到70年代，电子显微镜技术出现后，把细胞学带入 了第三大发展时期，这短短40年间不仅发现了细胞的各类超微结构，而 且也认识了细胞膜、线粒体、叶绿体等不同结构的功能，使细胞学发展 为细胞生物学。De Robertis等人1924年出版的《普通细胞学》 （General Cytology）在1965年第四版的时候定名为《细胞生物学》 （Cell Biology），这是最早的细胞生物学教材之一。
• 双层油镜瓶
• 擦镜纸
（2）设备：普通光学显微镜
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四、实验操作
1、低倍镜子的使用方法：
• 取镜和放置 • 对光 • 放置标本片 • 调节焦距
看不到物象的可能原因： • 物镜未对正通光孔，对正后再观察； • 标本未放到视野内，移动标本至通
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镜头 低倍镜 高倍镜
油镜
表1-1 不同倍数物镜的比较
放大倍数 10× 40× 100×
镜身 短 较长 长
数值孔径 0.3 0.5 1.3
工作距离/mm 7 0.5 0.2
不同放大倍数物镜 的工作距离
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三、实验用品
（1）材料：
• “a”字片、
• 红绿羊毛交叉片
• 人血涂片
功能及生命活动。
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➢ 细胞生物学发展简史：
三个层次：
洋葱表皮细胞显微结构
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骨骼肌超微结构
脱氧核苷酸结构模型
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四个阶段：
第一阶段
从16世纪后期到19世纪30年代，是细胞发现和细胞知识的积累阶段。 通过对大量动植物的观察，人们逐渐意识到不同的生物都是由形形色色 的细胞构成的。
➢ 电子 显微镜：
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➢ 电子
用高速电子束代替光束，放大倍数达80
显微镜： 万倍，分辨率最小极限达0.1~0.2nm。
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第一节 普通显微镜 的构造及使用方法
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一、原理与应用
➢ 显微镜的主要部分是物镜和目镜，
为两组焦距较短的凸透镜。
细胞分化示意图
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➢ 细胞生物学学科的发展， 正是基于新的研究技术方 法的建立。技术方法与科 研思路是学科发展的双翼， 二者缺一不可。
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➢ 《细胞生物学实验技术》学习内容
显微镜技术
细胞结构与成分的显示技术
细胞生理生化研究
细胞周期分析
细胞培养和分析
细胞成分的分离与分析
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F2
B’
A’
F1镜机座械部分
•
➢
镜照柱明部分
• 镜臂
➢• 镜光筒学部分
• 物镜转换器
• 镜台
• 调节器
粗准焦螺旋
细准焦螺旋
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机械部分
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• 反光镜 • 聚光器 • 光圈
照明部分
光学部分
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• 目镜 • 物镜
细胞膜技术
细胞工程基础技术
细胞凋亡的测定
染色体技术
分子细胞生物学技术
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➢ 《细胞生物学实验技术》参考书目
章静波, 黄东阳, 方瑾主编.《细胞生物学实验技 术》. 化学工业出版社. 2006年出版.
李芬主编.《细胞生物学实验技术》. 科学出版社. 2007年出版.
印莉萍, 祁小廷主编.《细胞分子生物学技术教 程》. 科学出版社. 2001年出版.
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（1）目镜
➢ 通常备有2~3个，上面刻有5×、10×或15×符号 ，表示放大倍数，一般用10×目镜。
（2）物镜
➢ 一般有3~4个，上面标有放大倍数和数值孔径（镜 口率），如10/0.25、40/0.65和100/1.3；镜筒长度 和所要求的盖玻片厚度，如160（mm）/0.17（ mm）。
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