HPLC_DAD波长切换法同时测定白术中白术内酯_和苍术酮的含量

AU
取 上 述 对照品适 量，配 成一定 浓 度的 混 合对照品溶 液，
备用。
1.2 供试品溶液的制备 取过100目筛的白术粉末约0.5g，
置50mL具塞锥形瓶中，精密称定，加入甲醇20mL，称定重量，
浸泡30min，超声30min，冷却至室温，加甲醇补足减失的重量，
过滤，取续滤液，加甲醇定容至25mL，过0.45μm微孔滤膜，取
通讯作者：尹华，杭州市滨江区滨文路548号浙江中医药大学药学院中药标准化研究实验室，邮编：310053，电话：0571-86613604 传真：0571-86613606，E-mail：maryyinhua@163.com
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中华中医药杂志(原中国医药学报)2013年 1月第28卷第1期 CJTCMP , January 2013, Vol . 28, No. 1
样量：10μL；检测波长：220nm（白术内酯Ⅰ、Ⅲ及苍术酮），
276nm（白术内酯Ⅱ）；对照品及样品色谱图见图1，各成分均达
到基线分析，以白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及苍术酮的理论塔板数均大
于10 000。
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关键词：白术；含量测定；波长切换；白术内酯Ⅰ；白术内酯Ⅱ；白术内酯Ⅲ；苍术酮 基金资助：浙江省科技厅科技计划项目分析测试科技计划（No.2008F70027），浙江中医药大学2011年校级课题
Simultaneous determination of Atractylone, AtractylenolideⅠ,Ⅱ,Ⅲ in Atractylodes macrocephala by HPLC-wavelength switching method
YIN Hua, WANG Zhi-qing, WANG Ling, ZHOU Ai-zhen, LI Qing-lin, CHENG Zhen
( Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China )
Abstract: Objective: To establish a method of simultaneously determining Atractylone, AtractylenolideⅠ,Ⅱ,Ⅲ in
Key words: Atractylodes macrocephala; Content determination; Wavelength shifts technique; AtractylenolideⅠ;
AtractylenolideⅡ; AtractylenolideⅢ; Atractylone
中华中医药杂志(原中国医药学报)2013年 1月第28卷第1期 CJTCMP , January 2013, Vol . 28, No. 1
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YAN Bai-qin,LU Rui-fang,NIE Ji-hong,et al.Validation test of microbial limit determination for Shuang-huang-jie-du Cream. China Journal of TCM and Pharmacy,2007,22(8):552-553 [8] 崔向微,张贵君,李慧.葛根芩连汤中七种药效组分分析.天津 中医药,2008,25(5):417-418 CUI Xiang-wei,ZHANG Gui-jun,LI Hui.Analysis of seven drug active compositions in puerariae decoctions.Tianjin Journal of
2. 药物及试剂 白术药材系本实验室成员亲赴产地（浙 江 磐 安），于不同乡镇收 集 近 2 0 批 药材，由浙江中医 药大学中 药 饮 片厂加 工切 制成饮 片，经本 校 药 学 院 张如 松 教 授 鉴 定为 正 品，符 合 2 010 年版《中华人 民 共和国 药典·一部》规 定。白 术内酯Ⅰ对照品（安徽芜湖甙尔塔医药科技有限公司，批号： 100423，纯度>98%）；白术内酯Ⅱ对照品（中国固体制剂制造技 术国家工程中心，批号：1018-090908，纯度>98%）；白术内酯 Ⅲ对照品（安徽芜湖甙尔塔医药科技有限公司，批号：100315， 纯度>98%）；苍术酮对照品（浙江省中医药研究院提供，批号： 101128，纯度>98%）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国Merck）；水为 过0.45μm滤膜的纯水；其余试剂均为分析纯。
TCM,2008,25(5):417-418 [9] 徐蓓蕾,张贵君,崔向微,等.葛芩粉的药效学研究.辽宁中医药
大学学报,2011,13(5):99-100 XU Bei-lei,ZHANG Gui-jun,CUI Xiang-wei,et al.Study on pharmacodynamics of Geqinfen.Journal of Liaoning University of TCM,2011,13(5):99-100
Fund assistance: Sci-tech Planning Project (Analysis and test Sci-tech Plan) of Science and Technology Department
of Zhejiang (No.2008F70027), 2011 School Project of Zhejiang Chinese Medical University
Atractylodes macrocephala by using HPLC-DAD with Changing Ultraviolet-visible Wavelength. Methods: HPLC-DAD and the gradient elution wavelength shifts technique. Column was Waters Sunfire C18 (4.6mm×250mm, 5μm), the mobile phase consisted of acetonitrile-water, the detection wavelength were set at 220(Atractylone, AtractylenolideⅠ,Ⅲ) and 276 (Atractylenolide II) by using wavelength shifts technique. Results: The quantitative evaluation of Atractylone and AtractylenolideⅠ,Ⅱ,Ⅲ had good linear range, and the recovery were 98.48-102.80%, 96.72-102.40%, 95.19-100.70%, 97.15-100.90% respectively, the average recovery were 100.40%(RSD=1.7%), 99.48%(RSD=1.8%), 97.47%(RSD=1.8%), 98.90%(RSD=1.3%). Conclusion: The method was simple, scientificly, rapid and reliable for quality control of the Atractylodes macrocephala.
关于白术的含量测定，以白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、苍术酮多见， 多为采用GC法测定白术中苍术酮、苍术醇等挥发性成分的含 量，或以HPLC法测定白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内 酯Ⅲ等内酯类成分及苍术酮等的含量，未见有同时测定白术中 苍术酮及白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量的分析方法[2-4]。本文采用梯 度洗脱、波长切换技术建立了同时测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ、苍术酮含量的HPLC-DAD分析方法（苍术酮、白术内酯Ⅰ、 Ⅲ 220nm，白术内酯Ⅱ 276nm），使得4种成分在各自的最大吸 收波长下进行含量测定，提高了检测灵敏度高，缩短分析周期、 节约成本。实现了白术中多指标、多成分的质量评价，从而为白 术饮片的质量评价及临床合理应用提供科学依据。
续滤液作为供试品溶液。
2. 色谱条件及系统适应性试验[4-7] 色谱柱：Waters Sunfire
C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯 度洗脱，0-34min，48% A，35-46min，61%A，46.5-56.5min，
8 8%A，57- 6 5m i n，10 0 %A；柱 温：3 0℃；流 速：1. 0 m L /m in；进
材料
1. 仪器 Waters alliance e2695高效液相色谱仪（美国 Waters公司，配备e2695分离模块，柱温箱，2998 PDA检测器， Empower色谱工作站）；Mettler XS105十万分之一天平（梅特勒 公司）；Sartorius BS110S万分之一电子天平（德国塞多利斯）； C L AU V F M 纯 水机（英国E L GA）；KQ 52 0 0 B 型 超 声波 清洗 器 （昆山市超 声仪器 有限 公司）；L D -2 0 0 型高速 多 功 能 粉碎 机 （天津市泰斯特仪器有限公司）。
白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的 干 燥 根 茎，其性 味 苦、甘，温，归脾、胃经；健 脾 益气，燥 湿 利 水，止汗，安胎，用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自 汗，胎动不安[1]，主要产于浙江、安徽、淮北、皖南等地，为道地 药材“浙八味”之一，更是临床大宗药材之一。其主要有效成分 为挥发性成分、内酯类、多糖等。
（收稿日期：2011年9月22日）
·研究报告·
HPLC-DAD波长切换法同时测定白术中白术内酯 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮的含量
尹华，王知青，王玲，周爱珍，李清林，程臻
（浙江中医药大学，杭州 310053）
摘要：目的：建立波长切换技术同时测定白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮等 多成分含量的HPLC-DAD分析方法。方法：HPLC-DAD梯度洗脱-波长切换法；色谱柱：Waters Sunfire C18柱 （4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水梯度洗脱；检测波长：220nm（白术内酯Ⅰ、Ⅲ及苍术酮），276nm （白术内酯Ⅱ）；进样量：10μL；流速：1.0mL/min；柱温：30℃。结果：白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术 内酯Ⅲ和苍术酮线性关系良好，加样回收率分别在98.48%-102.80%、96.72%-102.40%、95.19%-100.70%、97.15%100.90%，平均加样回收率分别为100.40%（RSD=1.7%）、99.48%（RSD=1.8%）、97.47%（RSD=1.8%）、98.90% （RSD=1.3%）。结论：本方法简单、准确，灵敏度高，重复性好，可用于白术的质量评价。
方法与结果
1. 供试品溶液的制备 1.1 对照品溶液的制备 分别取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、 白术内酯Ⅲ对照品约20mg，精密称定，加甲醇溶解，制成浓度 为2.026、1.737、1.988mg/mL的对照品溶液，作为母液；分别精 密吸取各母液0.5mL定容至5mL，得202.6、173.7、198.8μg/mL 的储备液，备用。取苍术酮对照品约5mg，精密称定，加甲醇溶 解，配制成1.196mg/mL的对照品溶液，作为母液，备用。