肿瘤相关抗原CA125测定操作规程

肿瘤相关抗原CA125测定操作规程
1 检验申请
单独检验项目申请：肿瘤相关抗原CA125测定；组合项目申请：肿瘤标志物检查。

临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理
2.1标本采集
2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。

或采用含分离胶的真空
采血管。

也可采集血浆标本，用肝或EDTA抗凝。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本
2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存
2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血浆, 避免溶血。

离心必须达到4000rpm×15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定2d，在-20℃最多可保存4周。

避免反复冻融。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项
2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

3 方法原理肿瘤相关抗原CA125
测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：
第一步：将标本与包被着CA125抗体的超顺磁性磁珠和第二种CA125抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵化，样本内CA125与固定在磁珠上的CA125抗体结合，第二种的CA125抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CA125抗原上的另一位点结合，产生双抗体夹心抗原复合物。

在反应管内孵化完成后，结合在磁珠上的复合物在磁场内被吸住，洗去未结合的物质。

第二步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。

所产生光子数与样本内的CA125浓度成正比。

4 试剂及其他用品
4.1试剂：CA125测定试剂包，由深圳迈瑞公司出品。

未打开的试剂包保存于2～
4.2试剂盒组分
4.2.1试剂1（Ra）组分
包被着抗4.2.1试剂1（Ra）组分
包被着抗CA125抗体（小鼠单抗，IgG）的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：包被着抗CA125抗体（小鼠单抗，IgG）的超顺磁性微粒，0.3g/L;Tris缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L；叠氮钠,<1g/L。

4.2.2试剂2（Rb）
组分：抗CA125抗体（小鼠单抗，IgG）-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：抗CA125抗体（小鼠单抗，IgG）-碱性磷酸酶标记物，31g/L；磷酸缓冲液，10mmol/l；Proclin300,0.5g/L；叠氮钠,<1g/L。

抗体（小鼠单抗C192，IgG）的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：包被着抗糖类抗原CA19-9抗体（小鼠单抗C192，IgG）的超顺磁性微粒，>0.1g/L；Tris缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/l,叠氮钠,<1g/L。

4.2.3 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次，无须特殊准备。

4.3其他试剂与用品
4.3.1发光剂：用发光剂底物液。

4.3.2清洗缓冲液等。

5 校准品与校准模式
5.1校准品: 采用CA125专用配套校准液。

校准品需在2～8℃贮存。

5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。

仪器根据校准曲线卡片数据(6参数对数拟合曲线)自动建立校准曲线。

5.3校准周期：在同一批号试剂使用期间校准曲线有效，但在间隔28d后需要重新校准。

每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；
③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。

5.4校准液重建方法：冻干校准液，用1mL蒸馏水复溶，复溶后的校准液于2～8℃保存最长不超过5周，或于-20℃最长保存10周。

避免反复冻融。

6 质控品与室内质控规则
6.1质控品采用CA125。

6.2质控液重建方法：液态质控液，即开即用，充分颠倒混匀，无需特殊准备。

6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。

6.4质控规则：采用L-J质控图，以±3s为失控限。

标准差由本室实验数据得出。

6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。

7 适用仪器
深圳迈瑞CL-1200i自动发光免疫分析仪。

装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。

9 主要分析参数
无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。

标本10µl。

10 结果计算
仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。

测定结果单位以ng/mL表示。

11 检验结果的报告及范围
11.1结果的报告
11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2报告范围：0.1 ~ 1果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本重新稀释后重复测定的结果。

12 操作性能
12.1精密度：批内CV＜3％；批间CV＜5%。

12.2分析范围： 0.1 ~ 1000 ng/ml。

12.3 分析灵敏度：0.1 ng/ml。

12.4 方法的有限性及干扰因素：轻度溶血、黄疸、脂血、Rh因子对本试验无明显干扰。

甘油三脂（≤1800mg/dL）、血红蛋白（≤500mg/dL）或胆红素（≤20mg/dL）,高总蛋白（≤10/dl）,类风湿因子（≤800IU/ml）或抗核抗体（≤2000U/L）的样本，人抗鼠抗体阳性标本，对试验的结果干扰偏差±10%范围内。

当CA125浓度100000 U/ml以内没有hook效应。

13参考范围及医学决定水平
参考范围：0 ~ 35.0 ng/ml
14临床意义
14.1 卵巢癌病人血清CA125水平明显升高，其阳性率可达97%，故对诊断卵巢癌有较大临床价值，尤其对观察治疗效果和判断复发较为灵敏。

其他癌症，如宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆道癌、肝癌、胃癌、结肠直肠癌、肺癌等也有一定的阳性反应。

此外，3%~6%的良性卵巢瘤、子宫肌瘤病人血清CA125有时也会增高，但多数不超10万u/L。

肝硬化失代偿期血清CA125明显增高。

14.2不推荐将CA125检测作为对普通人群或对无症状患者的癌症筛查项目，也不应当作为判断是否存在恶性疾病的一个绝对性依据。

连续的监测CA125水平对于评价化疗与放疗的效果，观察疾病的进程是有意义的。

15 结果审核以及分析与相关项目的联系
15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。

告单的审核者处签名。

15.3相关项目：审核与其他肿瘤标志物的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。

16 有关引用程序与文件
16.1 CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。

16.2免疫检验室内质控标准操作程序。

16.3 检验结果审核程序。

16.4标本送检和接收程序。

17 参考文献
17.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.
17.2 CA125测定试剂说明书。

17.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2006.
18本SOP变动程序
任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目50000 U/ml，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。

19 本SOP涉及的记录与表单
19.1 剂装载记录表
19.2 质控记录
19.3 失控及失控处理记录
19.4 检验结果审校核记录。