黄瓜根系分泌物对枯萎病菌菌丝生长的影响!
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吴凤芝， 女， 教授， 博士， 东北农业大学园艺学院， 哈尔滨 !"##$#， 电 话： #%"!&"$’#()* 孟立君， 文景芝， 通讯地址同第 ! 作者 收稿日期： 修回日期： (##(&#!&#)； (##(&#+&#" 、 国家基金（ 、 国家“ 十五” ,’*#$） $##)#%$#） !黑龙江省自然基金项目（ 攻关项目资助。本项研究得到中国农业大学资源环境学院申建波 博士的指导， 深表感谢
对黄瓜枯萎病菌菌丝生长影响的初步研究结果。 ! 材料与方法 供试病 ! < ! 试验材料 供试黄瓜品种为津绿 $ 号， 菌为 !"#$%$& ’()#*’%"& = < >? < +"+"&$%,-"& @ABC， 采 集并分离自东北农业大学园艺试验站大棚内黄瓜枯 萎病病株。 !<( 试验方法 ! < ( < ! 植物培养 试验于 (### 年在东北农业大学 园艺试验站进行。供试土壤分别来自于大棚〔 黄瓜 年） ， 前茬是黄瓜〕 和温室〔 黄瓜 D D 番茄连作 !* E（ 番茄连作 !( E（ 年） ， 前茬黄瓜施生物肥〕 ， 并以露地 菜田（ 前茬是甘蓝， 一直没有种植过黄瓜） 土壤为对 照。为了便于根系处理， 掺入 ! F $ 细砂。两个处理 与对照各为 $# 个营养钵， 每钵保留 ! 株幼苗， 正常 管理， 第 ( 片真叶展开时， 开始收集根系分泌物。 !<(<( 根系分泌物的收集及培养基的制作 滤纸片采用国 0 滤纸片的准备： 产定量滤纸， 用打孔器制成直径为 # < " GH 的圆片， 用甲醇和去离子水分别清洗 $ 次， 高压灭菌， 滤纸片 干燥后保存在棕色瓶中。 5 收集试验： 待黄瓜的第 ( 片真叶展开时， 分别取不同处理的黄瓜苗各 " 株， 去 土， 用水仔细冲洗黄瓜苗根部， 再用蒸馏水冲洗 $ 遍， 最后用去离子水冲洗 $ 遍， 冲洗后将黄瓜苗平放 在铺有湿滤纸的白色瓷盘中， 将根小心分开， 下面垫
表!
处 () 1+ 1!" 1!0 理 第!天 # * +# , # * !" , # * "" , # * !+ , 滤 纸 片 法 第"天 $ * "- , $ * #" , $ * .# 2 $ * 0+ & 第#天 . * ## , . * $" , . * 3" 2 / * "# & 第!天 # * ++ , # * !0 , # * !3 , # * $# 2
! ; $〕 系的研究较少〔 ， 本文是笔者就黄瓜根系分泌物
一层塑料膜， 以防根系分泌物扩散。根系用 (# ; %# 片直径为 # < " GH 的滤纸片覆盖， 然后用黑色塑料膜 轻轻覆盖 % I（ 小时） ， 防止水分损失， 将滤纸片提取 液迅速转移到储存瓶中放在 D (# J 低温冰柜中备 用。 , 培养基的制作： 在滤纸片收集液中直接加入 土豆煮沸， 过滤， 然后制成培养基， 高压灭菌 $# HKC （ 分） ， 在超净工作台上将灭菌后的培养基倒入直径 为 ’# HH 的培养皿中。用蒸馏水代替黄瓜培养液 。 加 ! L 琼脂制成培养基为对照（ ,M） 分别取 "直接收集法 0 根系分泌物的收集： 去 ( 片真叶展开的不同土壤处理的黄瓜苗各 " 株， 冲洗 土， 洗净， 然后用蒸馏水、 去离子水各冲洗 $ 遍， 后将黄瓜苗置于 $## H6 去离子水中， 通气培养 % I （ 小时） ， 培养液用真空旋转蒸发仪浓缩至 !## H6 备 用。 5 培养基的制作： 以浓缩的黄瓜苗培养液为营 养源， 黄瓜苗培养液 !## H6 加 ! L 的琼脂制成培养 基， 其它同滤纸片法。 当黄瓜 #土壤浸提法 0 根系分泌物的收集： 苗第 ( 片真叶展开时， 分别取不同土壤的黄瓜苗各 去钵底后直接放在盛有去离子水的培养皿中 " 株， 收集， 小时） 后， 将收集液过滤后倒入三角瓶 !( I （ 中， 在 D %# J 条件下冷冻浓缩至干备用。 5 培养基 的制作： 同直接收集法。 ! <( < $ 接菌培养 将黄瓜枯萎病病菌在无菌条件 下分别按不同土壤处理（ 0!* 代表大棚土壤， 0!( 代 表温室土壤， 接种于根系分泌物 0# 代表露地土壤） 为营养源的培养基中， 每个处理 $ 次重复， 于 (" J 恒温培养 (% I（ 小时） ， 每隔 (% I（ 小时） 测量 ! 次不 同处理中菌落的直径。 " ( <! 影响 结果与分析 根系分泌物对黄瓜枯萎病病原菌菌丝生长的 分别采用滤纸片法、 直接收集法和土壤浸提
注： 新复极差显著测验， 不同小写字母表示差异显著（ 5 6 + * +.）
均存在显著差异； 第 " 天大棚、 温室与对照有显著差 异， 露地、 温室与对照有显著差异， 大棚与温室有显 著差异。 " 结论与讨论 !大棚土培与温室土培幼苗的根系分泌物对病 原菌菌丝的生长有促进作用， 与露地相比均达到差 异显著水平， 说明连作土壤的黄瓜根系分泌物有促 进黄瓜枯萎病病原菌菌丝生长的作用。 "不同土培条件下的黄瓜幼苗的根系分泌物对 黄瓜枯萎病病原菌的助长作用是不同的， 在连作土 培条件下随着连作年限的增加助长作用有增加的趋 势。直接收集法、 滤纸片法和土壤浸提法均表现出 同样的结论， 可能是逆境条件迫使植物自身产生更 多的有毒物质。一方面， 随着连作年限的增加， 某些 有毒物质积累， 当积累到一定量时， 就会对该作物产 生自毒作用， 首先破坏根系细胞膜结构， 使病菌侵 入， 其结果表现为发病率高， 土传病害严重。另一方 面， 根系分泌物是微生物的营养源， 可能是随着连作 年限的增加， 根系分泌物中的某些有毒物质提供了 病原微生物的营养， 促进了病原微生物的繁殖， 减弱 或消除了某些有益菌的拮抗作用， 使有害菌增殖， 造 成病害严重这一外观上的表现。根系分泌物的种类 繁多， 是哪种物质在起作用， 是否是酚酸类物质？助 长作用的机理是什么？有待于进一步研究。 滤纸 #本试验采用 # 种收集根系分泌物方法， 片法和直接收集法是在脱离植物正常土培条件下进
系分泌物既含有土壤中多年积累的， 也含有新分泌 的， 更能说明土壤不同连作年限积累根系分泌物的 量， 进而表现出对病原菌菌丝增长的作用不同。从 表 ! 中可以看出， 土壤浸提法较好， 滤纸片法次之， — "- —
!滤纸片法
法对不同土培下黄瓜根系分泌物进行收集， 其分泌 物对黄瓜枯萎病病原菌菌落的影响情况见表 !。
— (+ —
随着连作年限的增加， 菌落直径增加。滤纸片 法接种后第 ! 天各处理与对照间均无显著差异； 第 第 # 天露地与对照无显著差异， 大棚与温室有 " 天、 显著差异， 两者均与对照、 露地存在显著差异。 露地、 温 直接收集法接种后第 ! 天大棚与对照、
$〕 行收集的， 收集的量较小〔 。土壤浸提法收集的根
直接收集法最差。
参考文献
! " 薛继澄 * 保护地栽培蔬菜障碍的 土 壤 因子 与 对 策 * 土 壤肥 料， ： !33$（ !） $73 吴凤芝， 刘德， 王东凯， 等 * 大棚连作土壤对土壤主要理化性状影 响的研究 * 中国蔬菜， ： !330（ $） .73 ： # 李洪连 * 棉花抗黄萎病生化机制研究 * 化学生态学， !330（ "） !-7 !0+ $ 申建波 * 根系分泌物中低分子量有机酸和酚酸的分离与测定： 中国农业大学， 〔 博士学位论文〕 * 北京： !330
温室、 大棚均与对 室均存在显著差异； 第 " 天露地、 照有显著差异； 第 # 天露地与对照无显著差异， 大棚 与温室无显著差异， 但温室与对照， 大棚与对照、 露 地均存在显著差异。 土壤 浸 提 法 接 种 后 第 ! 天 、 第#天$个处理间
根系分泌物接种黄瓜枯萎病病原菌后菌落发展情况
接 种 后 菌 落 直 径 % &’ 土 壤 浸 提 法 第!天 # * ++ , # * /+ 2 # * 0+ & $ * "+ 4 第"天 $ * !+ , $ * .+ 2 $ * 0+ 2 . * !+ & 第#天 0 * 0+ , . * !- 2 . * -0 & / * "! 4 直 接 收 集 法 第"天 $ * ## , $ * /" 2 $ * .. 2 $ * /. 2 第#天 . * /# , . * -" ,2 . * 0- 2 / * ++ 2&
"研究简报"
中 国 蔬 菜 ,-./0 1232405627
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源自文库
黄瓜根系分泌物对枯萎病菌菌丝生长的影响 !
吴凤芝 孟立君 文景芝
黄瓜枯萎病是分布较广、 危害较重、 防治困难的 一种典型的根际土传病害， 致病病原菌属尖镰孢菌 黄瓜专化型。国内外关于根系分泌物与土传病害关
对黄瓜枯萎病菌菌丝生长影响的初步研究结果。 ! 材料与方法 供试病 ! < ! 试验材料 供试黄瓜品种为津绿 $ 号， 菌为 !"#$%$& ’()#*’%"& = < >? < +"+"&$%,-"& @ABC， 采 集并分离自东北农业大学园艺试验站大棚内黄瓜枯 萎病病株。 !<( 试验方法 ! < ( < ! 植物培养 试验于 (### 年在东北农业大学 园艺试验站进行。供试土壤分别来自于大棚〔 黄瓜 年） ， 前茬是黄瓜〕 和温室〔 黄瓜 D D 番茄连作 !* E（ 番茄连作 !( E（ 年） ， 前茬黄瓜施生物肥〕 ， 并以露地 菜田（ 前茬是甘蓝， 一直没有种植过黄瓜） 土壤为对 照。为了便于根系处理， 掺入 ! F $ 细砂。两个处理 与对照各为 $# 个营养钵， 每钵保留 ! 株幼苗， 正常 管理， 第 ( 片真叶展开时， 开始收集根系分泌物。 !<(<( 根系分泌物的收集及培养基的制作 滤纸片采用国 0 滤纸片的准备： 产定量滤纸， 用打孔器制成直径为 # < " GH 的圆片， 用甲醇和去离子水分别清洗 $ 次， 高压灭菌， 滤纸片 干燥后保存在棕色瓶中。 5 收集试验： 待黄瓜的第 ( 片真叶展开时， 分别取不同处理的黄瓜苗各 " 株， 去 土， 用水仔细冲洗黄瓜苗根部， 再用蒸馏水冲洗 $ 遍， 最后用去离子水冲洗 $ 遍， 冲洗后将黄瓜苗平放 在铺有湿滤纸的白色瓷盘中， 将根小心分开， 下面垫
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一层塑料膜， 以防根系分泌物扩散。根系用 (# ; %# 片直径为 # < " GH 的滤纸片覆盖， 然后用黑色塑料膜 轻轻覆盖 % I（ 小时） ， 防止水分损失， 将滤纸片提取 液迅速转移到储存瓶中放在 D (# J 低温冰柜中备 用。 , 培养基的制作： 在滤纸片收集液中直接加入 土豆煮沸， 过滤， 然后制成培养基， 高压灭菌 $# HKC （ 分） ， 在超净工作台上将灭菌后的培养基倒入直径 为 ’# HH 的培养皿中。用蒸馏水代替黄瓜培养液 。 加 ! L 琼脂制成培养基为对照（ ,M） 分别取 "直接收集法 0 根系分泌物的收集： 去 ( 片真叶展开的不同土壤处理的黄瓜苗各 " 株， 冲洗 土， 洗净， 然后用蒸馏水、 去离子水各冲洗 $ 遍， 后将黄瓜苗置于 $## H6 去离子水中， 通气培养 % I （ 小时） ， 培养液用真空旋转蒸发仪浓缩至 !## H6 备 用。 5 培养基的制作： 以浓缩的黄瓜苗培养液为营 养源， 黄瓜苗培养液 !## H6 加 ! L 的琼脂制成培养 基， 其它同滤纸片法。 当黄瓜 #土壤浸提法 0 根系分泌物的收集： 苗第 ( 片真叶展开时， 分别取不同土壤的黄瓜苗各 去钵底后直接放在盛有去离子水的培养皿中 " 株， 收集， 小时） 后， 将收集液过滤后倒入三角瓶 !( I （ 中， 在 D %# J 条件下冷冻浓缩至干备用。 5 培养基 的制作： 同直接收集法。 ! <( < $ 接菌培养 将黄瓜枯萎病病菌在无菌条件 下分别按不同土壤处理（ 0!* 代表大棚土壤， 0!( 代 表温室土壤， 接种于根系分泌物 0# 代表露地土壤） 为营养源的培养基中， 每个处理 $ 次重复， 于 (" J 恒温培养 (% I（ 小时） ， 每隔 (% I（ 小时） 测量 ! 次不 同处理中菌落的直径。 " ( <! 影响 结果与分析 根系分泌物对黄瓜枯萎病病原菌菌丝生长的 分别采用滤纸片法、 直接收集法和土壤浸提
注： 新复极差显著测验， 不同小写字母表示差异显著（ 5 6 + * +.）
均存在显著差异； 第 " 天大棚、 温室与对照有显著差 异， 露地、 温室与对照有显著差异， 大棚与温室有显 著差异。 " 结论与讨论 !大棚土培与温室土培幼苗的根系分泌物对病 原菌菌丝的生长有促进作用， 与露地相比均达到差 异显著水平， 说明连作土壤的黄瓜根系分泌物有促 进黄瓜枯萎病病原菌菌丝生长的作用。 "不同土培条件下的黄瓜幼苗的根系分泌物对 黄瓜枯萎病病原菌的助长作用是不同的， 在连作土 培条件下随着连作年限的增加助长作用有增加的趋 势。直接收集法、 滤纸片法和土壤浸提法均表现出 同样的结论， 可能是逆境条件迫使植物自身产生更 多的有毒物质。一方面， 随着连作年限的增加， 某些 有毒物质积累， 当积累到一定量时， 就会对该作物产 生自毒作用， 首先破坏根系细胞膜结构， 使病菌侵 入， 其结果表现为发病率高， 土传病害严重。另一方 面， 根系分泌物是微生物的营养源， 可能是随着连作 年限的增加， 根系分泌物中的某些有毒物质提供了 病原微生物的营养， 促进了病原微生物的繁殖， 减弱 或消除了某些有益菌的拮抗作用， 使有害菌增殖， 造 成病害严重这一外观上的表现。根系分泌物的种类 繁多， 是哪种物质在起作用， 是否是酚酸类物质？助 长作用的机理是什么？有待于进一步研究。 滤纸 #本试验采用 # 种收集根系分泌物方法， 片法和直接收集法是在脱离植物正常土培条件下进
系分泌物既含有土壤中多年积累的， 也含有新分泌 的， 更能说明土壤不同连作年限积累根系分泌物的 量， 进而表现出对病原菌菌丝增长的作用不同。从 表 ! 中可以看出， 土壤浸提法较好， 滤纸片法次之， — "- —
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法对不同土培下黄瓜根系分泌物进行收集， 其分泌 物对黄瓜枯萎病病原菌菌落的影响情况见表 !。
— (+ —
随着连作年限的增加， 菌落直径增加。滤纸片 法接种后第 ! 天各处理与对照间均无显著差异； 第 第 # 天露地与对照无显著差异， 大棚与温室有 " 天、 显著差异， 两者均与对照、 露地存在显著差异。 露地、 温 直接收集法接种后第 ! 天大棚与对照、
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参考文献
! " 薛继澄 * 保护地栽培蔬菜障碍的 土 壤 因子 与 对 策 * 土 壤肥 料， ： !33$（ !） $73 吴凤芝， 刘德， 王东凯， 等 * 大棚连作土壤对土壤主要理化性状影 响的研究 * 中国蔬菜， ： !330（ $） .73 ： # 李洪连 * 棉花抗黄萎病生化机制研究 * 化学生态学， !330（ "） !-7 !0+ $ 申建波 * 根系分泌物中低分子量有机酸和酚酸的分离与测定： 中国农业大学， 〔 博士学位论文〕 * 北京： !330
温室、 大棚均与对 室均存在显著差异； 第 " 天露地、 照有显著差异； 第 # 天露地与对照无显著差异， 大棚 与温室无显著差异， 但温室与对照， 大棚与对照、 露 地均存在显著差异。 土壤 浸 提 法 接 种 后 第 ! 天 、 第#天$个处理间
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接 种 后 菌 落 直 径 % &’ 土 壤 浸 提 法 第!天 # * ++ , # * /+ 2 # * 0+ & $ * "+ 4 第"天 $ * !+ , $ * .+ 2 $ * 0+ 2 . * !+ & 第#天 0 * 0+ , . * !- 2 . * -0 & / * "! 4 直 接 收 集 法 第"天 $ * ## , $ * /" 2 $ * .. 2 $ * /. 2 第#天 . * /# , . * -" ,2 . * 0- 2 / * ++ 2&
"研究简报"
中 国 蔬 菜 ,-./0 1232405627
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源自文库
黄瓜根系分泌物对枯萎病菌菌丝生长的影响 !
吴凤芝 孟立君 文景芝
黄瓜枯萎病是分布较广、 危害较重、 防治困难的 一种典型的根际土传病害， 致病病原菌属尖镰孢菌 黄瓜专化型。国内外关于根系分泌物与土传病害关