丙型肝炎病毒抗体酶法弱反应性分析

丙型肝炎病毒抗体酶法弱反应性分析

摘要：目的分析抗HCV ELISA法弱反应性结果，减少漏诊误诊。方法采用ELISA法检测抗HCV，对吸光度值/临界值(S/CO)比值在0.72～3.40之间的标本再采用聚合酶链反应(PCR)进行确认。结果在抗HCV呈弱反应性即S/CO在0.72～3.40之间的20标本份中，0.72≤S/CO<1.0的标本7份，S/CO≥1.0的标本13份；经PCR确认，有5份阳性，其余15为阴性，其中4份阳性样本的S/CO<1.0，14份阴性样本的S/CO≥1.0。结论对于弱反应性样本，应进一步做确认检测。

关键词丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验聚合酶链反应弱反应性

丙型肝炎病毒(HCV))是1989年被发现的，1990年美国第一代抗HCV酶联免疫吸附试剂(EIA))获得美国食品管理局(FDA))批准。我国的抗HCV诊断试剂自1993年面世以来，经广大科技工作者和生产单位努力，经过国家“㈧㈤，“㈨㈤”功关，其质量不断改进。对于丙型肝炎病毒的检测已建立了各种方法，较为普遍应用于筛查和临床诊断的检测方法是丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)酶联免疫吸附试验(ELISA)。ELISA测定是一种定性方法，在临床样本中，除了明显的“阳性”与“阴性”结果之外，还有弱反应性结果.。美国疾病预防控制中心曾对美国Ortho的抗HCV检测ELISA试剂盒进行研究发现，只有检测结果S/CO≥

3.0者才有90%以上的初筛检测为反应性标本是真正的阳性，S/CO<3.0者则有较高的假阳性率。对于S/CO比值在1.0左右的样本，我们应用聚合酶链反应(PCR)进行了确诊，发现以S/CO是否大于或小于1.0作为判定阳性或阴性的依据，会导致假阳性或假阴性。现将结果报道。

1 资料与方法

1.1 标本来源2007年以来在我院住院及门诊的患者样本，采用ELISA法检测抗HCV，共发现弱反应性即S/CO在0.72～

3.40之间的标本共20份，其中0.72≤S/CO<1.0的标7份，S/CO≥1.0的标本13份；男性12份，女性8份；平均年龄(36.0±13.8)岁。收集样本，-20 ℃低温保存。

1.2 仪器与试剂BIORAD550型酶标仪，BIOCELLAW1型全自动洗板机，Roche Light Cycler 荧光PCR仪。ELISA试剂购自中山生物工程有限公司。PCR 荧光定量检测试剂购自上海实业科华生物技术有限公司。

1.3 方法ELISA法：采用双抗原夹心原理间接法，即于包被微孔中加入100μL样品稀释液，再加入10μL样品，充分混匀，放37 ℃水浴箱30 min，取出依法反复洗涤5次，拍干，再加酶标记物50μL，放37 ℃水浴箱20 min，取出同上法洗涤5次，拍干，再加显色液A1滴和显色液B1滴放37℃水浴箱10min 待显色。cut off 值=0.14+阴性对照OD值均值。PCR荧光定量检测：采用RTPCR 一步法，测定结果≥500 拷贝/mL 为HCV RNA阳性。

2 结果

ELISA法弱反应性样本20份S/CO最低为0.72，最高为

3.40，0.72≤S/CO<1.0的标本7份，S/CO≥1.0的标本13份。PCR确认结果为5份阳性，分别为5号=0.75×103 拷贝/mL、8号=3.25×103 拷贝/mL、11号=7.02×103 拷贝/mL、16号=

1.6×104 拷贝/mL、17号=

2.65×103 拷贝/mL，其余15份为阴性，其中4份阳性样本的S/CO<

1.0，14份阴性样本S/CO≥1.0。

3 讨论

ELISA是一种定性测定，通常用“阳性”与或“阴性”方式报告结果，在阳性与阴性之间必须有一个明确的分界线，即阳性判断值(Cutoff值)。Cutoff值的或高或低均可直接导致假阳性或假阴性结果的出现。在临床测定所有标本中均要分出明显的阳性和阴性是不可能的，在它们之间还有弱反应性或称弱阳性，即“灰区”。显然，在ELISA测定中，确定合适的Cutoff值对减少假阳性或假阴性率非常重要。临床通常以样本OD≥Cutoff判定为阳性，OD

现、出现的时间、持续时间长短均有不同，因此ELISA测定时所使用的包被抗原必须全面，才能有效检出所存在的抗体[2]。

在本研究中，患者标本含有某些干扰酶免疫测定的因素时会导致假阳性结果，较常见的有类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、交叉反应物质等。如在类风湿患者血清中常含有较高浓度的类风湿因子，其可与固相上包被的特异性抗体以及后加入的酶标特异性抗体结合，从而出现假阳性结果。标本长时间室温放存被细菌污染也可造成抗HCV假阳性[3]。

因此，仅仅是以S/CO是否大于或小于1来判断阴阳性结果会造成假阴性或假阳性，对临床患者可能引起错诊或漏诊，对于献血员就会引起输血后感染HCV，导致一些医疗纠纷。美国疾病预防控制中心曾对美国Ortho的抗HCV检测ELISA试剂盒进行一个多中心研究发现只有检测结果S/CO≥3.0者才有90%以上的初筛检测为反应性标本是真正的阳性，S/CO<3.0者则有较高的假阳性率，国内也有相同的发现[1]。在工作中，我们发现抗HCV阳性样本的S/CO均大于4以上，因此，我们持与邢文革等[4]基本一致的观点，认为抗HCV ELISA法S/CO 比值在0.5～3.5以内的弱反应者有必要进行确认试验。在实际工作中，可以选择在测定不同HCV蛋白抗体上有互补性的试剂作为初检和复检试剂，从而最大程度的避免漏检；病毒感染后有一个“窗口期”，对于S/CO比较接近1者，应连续追踪观察。

参考文献

[1] 谷金莲，祁白柏，王尊文，等.丙型肝炎病毒抗体试剂检测结果的可信度分析[J].中华检验医学杂志，2005，28(6)：580583.

[2] PAWLOTSKY J e and iterpretation of virological tests for hepatitis C[J].Hepatology，2002，36(Suppll)：S6573.

[3] 邢文革，郑怀竞.必须提高丙型肝炎病毒实验室检验结果的可信度[J].中华肝脏病杂志，2004，12(3)：170171.