大鼠心脏移植模型制作

大鼠心脏移植模型制作

大鼠心脏移植模型是研究移植排斥反应、器官保存和药物筛选的常用动物模型。由于此模型操作简单、能直接观察到移植物的状况，通过观测移植心是否搏动和/或心电图可以鉴别移植物的存活情况，耐受和排斥、成功和失败的标准明确。因而应用十分广泛。自20世纪60年代Abboll等创立心脏移植模型依赖，经过多次修改，目前受鼠操作、存活率均较以

前有很大的提高。

一、手术器械：显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。

二、供、受者大鼠的选择

根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠，小鼠－大鼠等不同品系的

动物。

三、麻醉

麻醉采用戊巴比妥钠50mg/kg体重腹腔麻醉的方法，可以以采用5%水合氯醛3ml/kg

体重，麻醉过浅时加乙醚吸入辅助、

四、供心切取手术

大鼠麻醉后仰卧位固定，用酒精消毒胸腹部，正中切口1次剪开胸腹部皮肤，暴露胸部，沿腹白线开腹，暴露腹主动脉和下腔静脉，并从下腔静脉缓慢注入2ml 含肝素的无菌生理盐水（25IU/L）全身肝素化，然后横断腹主动脉和下腔静脉放血，迅速打开胸腔，0℃～4℃预冷的平衡液不断淋浇心脏表面，并向胸腔加入少量冰屑，分别在靠近右心房处结扎并

切断下腔静脉和右上腔静脉，结扎右上腔动脉时将右心耳一起结扎。游离升主动脉、肺动脉和无名动脉，实施腹部心脏移植模型则在无名动脉分叉处剪断，如果是颈部心脏移植模型，于主动脉分出无名动脉的远端结扎切断主动脉，于靠近主动脉约1mm处切断无名动脉，

再在左右肺动脉分叉处剪断肺动脉，提起心脏，1次结扎左上腔、左肺和右肺静脉以及周围

组织，并在远心端剪断，取下供心，放入0℃～4℃平衡液内保存。

五、受者手术

（一）大鼠心脏腹部异位移植术：

从腹正中线开腹，自制S型拉钩将腹壁牵向两侧，充分暴露手术野，进入腹腔后将肠袢推

向右侧，以温盐水纱布盖好。打开后腹膜，在肾静脉水平以下将腹主动脉和下腔静脉在血管稍外和两侧软组织游离。在肾血管和髂血管分叉以上分离结扎两侧的腰静脉，并将下腔静脉背侧2～3条分支结扎，用2只哈巴狗夹分别在肾血管下方和髂血管分叉上方约5mm处阻断腹主动脉和下腔静脉，用尖刀在腹主动脉前壁挑开一小口，然后用显微弹簧剪延长切口大约与供心的升主动脉口径相当，用含肝素（25IU/L）的盐水冲洗吻合口内血块，于下腔静脉前壁同样挑开一个小口，由于下腔静脉壁薄，预防将其后壁同时挑开，然后同样的用显微弹簧剪将其切口扩大，与供心肺动脉口径相当即可，同样用肝素盐水冲洗血管腔，将血管腔内的凝血块冲出。下腔静脉开口一般在腹主动脉开口的下方，位置稍有一定的偏移，避免

在一个平面上。

从0℃～4℃的保存液中取出心脏，以冰盐水棉片保护供心，棉片周围覆以冰屑以防在受者腹腔移植心复温。用8－0的无创缝合线先将供心的主动脉和受者的肺动脉切口对角缝合2针，然后先内侧壁，后外侧壁，从右向左进行连续缝合，针距和边距均为0.3～0.5mm。同样，用8－0无创缝合线将供心主肺动脉与下腔静脉切口对角缝合两针，然后在下腔静脉腔内从右向左连续缝合内侧壁，继而从左向右在下腔静脉强外连续缝合外侧壁，针距和边距均为0.3～0.5mm。缝合静脉吻合口时，注意勿过度用力拉紧缝线，以免造成流出道狭窄。缝合最后2针前，用钝性弯针头向吻合口腔内注入25IU/L肝素盐水，排除残留空气，以

防气栓形成。

吻合完毕，先松开远心端哈巴狗，然后再缓慢松开近心端哈巴狗，同时观察动脉吻合口有无喷射状出血，如果有喷射状出血可再次阻断血管后给予修补，如有渗血，用棉球压迫止血，循环开放后心脏颜色立即变为鲜红，2～3分钟后心脏由室颤变为有力收缩。检查吻合口有无出血，如无出血将肠管推回腹腔，缝合关闭腹腔。

图1 供心主动脉与受者腹主动脉端侧吻合图2 供心肺动脉与受者下腔静脉端侧吻合

（二）大鼠心脏颈部异位移植术：

受者腹侧向上，头对术者，其上门齿用一橡皮筋拉伸固定，剃毛后自下颏中点至右锁骨中点作一皮肤切口，自锁骨处游离右外静脉直至其分叉处，沿途各细小属支均结扎切断或用笔式电灼器离断，切断右胸锁乳突肌以暴露右颈总动脉，于气管食管沟右侧可以找到右颈总动脉，打开颈总动脉鞘，游离右颈总动脉后，于其近端上一无创性显微血管夹，远端结扎切断，取出供心，在吻合过程中要不断以0℃～4℃冰平衡液淋浇，避免复温。在10倍镜下用10

－0的无损伤显微缝线行供心无名动脉与受者颈总动脉单线连续或间断缝合，先行前壁腔外连续缝合，缝至血管后壁时可将心脏向右扭转以获良好暴露，然后行后壁腔外连续缝合，间距0.5mm，边距0.4mm。180g大鼠颈总动脉直径约1.5mm，约需缝6～8针，于右颈外静脉靠近锁骨处上一无创性显微血管夹，之后结扎切断颈外静脉远心端分叉处，用8－0无损伤血管缝线行供心主肺动脉与受者右颈外静脉单线连续端端缝合，先行后壁腔内连续缝合，缝至前壁时转为腔外连续缝合，间距0.6mm，边距0.5mm。180g大鼠颈外静脉中段直径约2.5mm，约需缝8～10针。缝合完毕后，依次开放静脉和动脉血流，1 min

内即可见到供心由纤颤变为规律复跳，摆正移植心位置，注意勿使血管扭曲。单层缝合关闭

切口。

图3 大鼠颈部心脏移植示意图

六、围手术期注意事项以及并发症的防治

无论腹部还是颈部心脏移植移植心的循环途径为：受者动脉－供者心脏升主动脉－冠状动脉－心肌－冠状静脉－右心室－肺动脉－受者静脉。左心不参与血液循环，无射血功能。合格移植模型的制备，需在统一和标准手术操作下进行，达到稳定的手术成功率和很高的重复性，基于这一要求，如何预防围手术期并发症的发生，成为手术成功和稳定性提高关键因素

1.选择健康大鼠作为供者和受者。

在移植术前严格选择健康个体进行实验，是保证手术成功的基本条件。

2.防止麻醉意外。

戊巴比妥钠用量稍大即可能造成呼吸抑制或骤停，用量应谨慎，如出现呼吸抑制，可术中给