第十三章酶类药物的分析

N 第一节概述

■在生物体内，酶能降低生化反应活化能，加快可逆 反应的进行速度，使之尽快达到平衡。

酶的催化反应机制 酶催化反应动力学

酶的特性

酶的分类

酶的化学组成

五

X —、酶的特性

2.酶对底物的结构具有严格的选择性。

(1) 相对专一性： (2) 绝对专一性：

(3) 立体异构专一性： 3・酶催化反应的反应条件温和。

4・

酶的催化活性在生物体内受多种因素的调节。

1.

二、酶的分类

氧化还原酶

转移酶

水解酶

裂合酶

异构酶

合成酶（或称连接酶）

三、酶的化学组成

■分为简单酶和结合酶两大类。

■结合酶类中除含有蛋白外，还含有某种热稳定的非蛋白质的小分子物质，二者结合起来，称为“全酶”，才呈现生物催化活性。

■结合酶=酶蛋白+辅助因子

四、酶的催化反应机制

■ 1.酶-底物复合物的形成在酶促反应中，反应底物首先与酶分子上活性部位结合，形成酶■底

髓洛物，降低反应的活性能，使酶促反应顺

■2.酶■底物复合物加速反应速率的原因

■(1)定向作用与底物浓缩

■(2)酶使底物分子变形

■(3)酸碱催化

■(4)共价催化。

五、酶催化反应动力学

-酶的活力单位酶活性单位（U）是酶活性高低的一种量度，用U/g或U/ml表示。

■酶活力单位定义：在规定的条件下，每分钟底物亦需委葩险畫，称一个WKJiS力童位。

-酶的比活力每毫克酶蛋白所含酶活力,

U/mg。

Mi chae li s-Ment en 快速平衡学说

在低底物浓度时，反应 速度呈直线上升，表现 为一级反应。

;、一级

动力学状态I

■在高浓度时，反应速度 达到一个极限值，呈现 零级反血。

蠶册魏反应

最大速度(Vm)

III

<2 零级动力学 / 状态n 零级和一级

动力学混合

底物浓度

j米氏方程

.酶反应动力学方程式:

■ V—反应初速度

■ 米氏常数，K=K_J心表示酶与底

物的亲和力。

■用为反应速度堤最大反应速度如一半时所需底物浓度，即1^1/2 畑时，/fe=[S]o

1=1

Vm——最大反应速度

心为£5的解离常数,

Briggs-Haldane 稳态学说

■ £3的形成速度与£3的解离速度相等，达到动态平衡，即“稳态”，反应方程式：

~ Km+ [S\

-1

■ 畑取代了心当k^l/2如时，Km=[S\. ■如也可表示为底物与酶的亲和力。

第二节酶类药物的鉴别与检查

■鉴别方法常用蛋白质鉴别方法，如在碱性条件下的双缩腺反应。

-专用于酶的鉴别方法：

■酶活性试验：与特异性底物反应（胰蛋白酶）O

沉淀试验: 胃蛋白酶

动物试验：透明质酸酶水解粘多糖。

酶类药物的检查

■酶类药物是生化产品和微生物发酵产品，在生产过程中可能带入微量的脂肪类物质、其他的酶类和大分子杂质，影响酶质量，需有含量限度。

酶类药物的检查

i （一）脂肪含量限度检查

■检查方法，乙醯浸提，干燥,精密称定，脂肪不得过规定的含量。

■（二）其他酶类含量限度检查

■胰蛋白酶、糜蛋白酶均是从牛、猪的胰脏中提取的蛋白分解酶。提取胰蛋白酶时又易带入微量的糜蛋白酶。

■（三）大分子活性物质含量限度检查

胰蛋白酶制品中糜蛋白酶的含量

:每2500U胰蛋白酶中不得多于50U的糜蛋白酶。

■糜蛋白酶专属水解芳香氨基酸(厶酪氨酸、厶苯丙氨酸)的按基形成的肽键、酰胺键和酯键。

■用/V■乙酰酪氨酸乙酯("Acety卜厶Tyrosine Ethylester, ATEE)作底物，通过

分光光度法测定此酶对底物的水解速率来检查

该酶的含量限度。

第三节酶活力测定方法

■固定时间法

■连续监测法

■（一）、需NAD+或NADP+作指示的连续监测法:

■直接测定法

偶联法

三联酶活测定

（二）、不需NAD+或NADP+作指示的连续监测法:

■固定浓度法

、固定时间法

-在适宜的条件下，使酶和底物共同保温一定 时间，然后测定产物生成的量或底物消耗的 量从而间接推算出酶的含量（或活力）。

-［E ］表示酶浓度，［P ］为反应产物浓度，t 表 示酶作用时间，K 为常数。

[P]

[E]=K ——

占注意事项

缺点:无法了解整个反应过

程是否都是零级反应。

注意事项:

1、底物饱和

2、时间m g

二、连续监测法

■在酶反应过程中，连续记录不同时间的底物消耗量 或产物生成量。

（二）、不需NAD+或NADP+作指示的连续监测法

（一）、需NAD+或NADP+作指示的连续监测法

=J

（一）、需NAD+或NADP+作指示的连续监测法:还原型辅酶（NADH和NADPH）在340nm处有紫外吸收，

氧化型辅酶（NAD+和NADP+）在340nm处无蠻》卜吸皈. ■利用340mn处每分钟吸收度升高或降低的速率与酶活性成正比的关系，推算出酶的活力单位。

■包括：

［直接测定法偶联法

〔三联酶活测定

生直接测定法

■大多数需NADH (NADPH)参加的脱氢酶，可利用紫外分光光度法直接测定反应体系在340nm处吸收度的变化，计算