紫外分光光度法检测荷叶中荷叶生物碱..

3.5 加样回收率实验
•
称取已知生物碱含量0.85%的同批荷叶2.0g，共5份，分别精密加入荷叶碱标准品溶液浓度为
0.42mg/mL各1mL，分别加入浓度为80%乙醇80mL，在80℃下的恒温浴冷凝回流提取。趁热过滤，
用80%乙醇定容至80mL，即为样品液。吸取1mL样品液按最佳含量测定条件操作，计算生物碱含量
3.2 荷叶生物碱最大吸收波长的确定
• 荷叶碱标准品及标准品经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长 称取4.2mg荷叶碱标准品于10mL容量瓶中，用氯仿溶解定容，以氯仿为空白，用紫外分光光度计在 190～800nm 下扫描，测得荷叶碱的紫外最大吸收波长。 荷叶碱标准品染色后的最大吸收波长。精密称取4.2mg荷叶碱标准品于10mL容量瓶中，用氯仿定 容，混匀，吸取1mL于10mL分液漏斗中，加入邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL，溴甲酚绿溶液1mL，振 荡，加入5mL氯仿，振荡30s，静置30min。取下层氯仿液4mL，以标准品空白为对照，在紫外分光 光度计的190～800nm下扫描，测得荷叶碱标准品经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长。
• 3. 3 荷叶碱标准曲线制备
分别精密吸取荷叶碱标准品溶液0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mL于5mL容量瓶中，氯仿定容，以 试验得出的最佳含量测定条件操作，以试剂氯仿空白为参比液，在最大吸收波长处测定吸光度，制 作标准曲线。
• 3. 4 重现性实验
按制备荷叶碱标准曲线的方法，取2mL浓度为0.02mg/mL的标准品溶液5份，在415nm下测定吸光 度值。
灵敏度高。
基本结构
• 1 绪论 • 2 材料与仪器 • 3 方法 • 4 结果与分析 • 5 结论
1 绪论
• 荷叶：荷叶为睡莲科植物莲的干燥叶，具有清暑化湿、升发清阳、减肥降脂、升发清阳、凉血止血 之功效，主要用于暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻、血热吐衄、便血崩漏等症状。因此，测定总生 物碱的含量对于控制其质量、确保疗效有重要意义。
2 材料与仪器
• 材料：1.标准品，荷叶碱、含0.85%生物碱的干荷叶、干荷叶； 2.供试品，氯仿、溴甲酚绿、邻苯二甲酸氢钾；
• 主要仪器与设备：紫外分光光度计、电子天平、数显恒温水浴锅、粉碎机；
3源自文库方法
• 3.1 溶液配制：（1）溴甲酚绿溶液，称取溴甲酚绿0.10g，加入7.2ml的0.02mol/LNaOH溶液溶解， 蒸馏水定容至250mL；（2）0.02mol/l NaOH，称取0.08gNaOH于100ml的容量瓶中，加蒸馏水稀释 至刻度；（3）邻苯二甲酸氢钾缓冲液，将邻苯二甲酸氢钾粉末倒入250mL容量瓶中，用少量蒸馏 水冲塑料袋内壁并稀释至刻度；（4）80%乙醇，称取80ml食品学院提供的无水乙醇再加20ml的水； （5）0.42mg/ml荷叶标准品溶液，电子天平称取4.2mg荷叶标准品于10mL容量瓶中，加水至刻度线 定溶。
样品荷叶生物碱经溴甲酚绿染色后
•
经测量得知溴甲酚绿染色后的样品在415nm处有最大吸收波长，故本实验以415nm为含量测定
最大波长。
4.2 荷叶碱标准曲线制备 • 不同浓度的荷叶碱标准品溶液在415nm处的吸光值标准曲线如图4所示
在最大吸收波长415nm处测定吸光度及其浓度对照图可得标准曲线图方程为y=14.12x0.013,R=0.9998（n=5），表明荷叶碱在0.02～0.10mg/mL 范围内线性关系良好。
• 荷叶生物碱：多属于阿扑啡类生物碱，此类化合物具有显著的降脂减肥、抗病毒、抑菌、抗惊厥等 药理作用。
• 紫外分光光度法:由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的 情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某 些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
紫外分光光度法检测荷叶中荷叶生物碱..
• 为了较准确的检测荷叶中荷叶生物碱含量,采用了紫外分光光度法，以荷叶碱为对照，溴甲酚绿为 显色剂，在荷叶生物碱最大吸收波长415nm处进行测定。可得线性回归方程为y=14.12x-0.013， R=0.9998（n=5），说明了荷叶生物碱在0.02～0.10mg/mL 范围内线性关系良好，平均回收率达 98.31%，RSD为2.10 %，回收率为98.31%，RSD%为2.10%。此实验表明紫外分光光度法操作简便、
5 结论
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以荷叶碱为标准品，采用UV检测法检测荷叶碱波长为273nm，确定了经溴甲酚绿染色后荷叶生
物碱的波长为415nm，通过分析，确定了简单易行的紫外分光光度法对其荷叶生物碱进行测定，建
，分析加样回收率。
4 结果与分析 4.1 荷叶生物碱最大吸收波长的确定
荷叶碱标准品用紫外分光光度计在190～800nm下扫描后在245 ～325nm处出现了波峰，经测量得知荷叶碱标准品的紫外最大吸收 波长为273nm。
荷叶碱标准品经溴甲酚绿染色后
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溴甲酚绿染色后的荷叶碱标准品在415nm处有最大吸收波长。
• 样品荷叶生物碱经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长
样品经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长。称取荷叶2.0g，加入浓度为80%的乙醇80mL，于80℃ 的恒温水 浴加热。趁热过滤，用80%乙醇定容至80mL，即为样品液。吸取1mL样品液于10mL分液漏斗中，挥去乙醇， 加入邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL，溴甲酚绿溶液1mL，振荡，加入5mL氯仿，振荡30s，静置30min。取下层 氯仿液4mL，以未加样品液的乙醇试剂空白为对照，在紫外分光光度计的190～800nm下扫描，测出样品液 经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长。
4.3 重现性实验
采用UV法测定5份0.02mg/mL的标准品溶液荷叶碱含量，在415nm下测定吸光度值相近，平均值 、标准偏差和相对标准偏差均较小，实验结果重现性好，采集到的数据较准确。
4.4 加样回收率实验
采用UV法测定收集液中的荷叶生物碱含量的加样回收率较高，为98.31%，相对标 准偏差为2.10%，较小；应此该方法准确度较高