4实验动物学的基本技术操作

(3) 氨基甲酸乙酯(乌拉坦)：
此药是比较温和的麻醉药，安全度大。多数实 验动物都可使用，更适用于小动物。一般用作基础 麻醉，如实验全部过程都用此药麻醉时，动物保温 尤为重要。使用时常配成20％-25％水溶液。
2） 局部麻醉剂(local Anaesthetics) (1) 普鲁卡因：
为对氨苯甲酸酯，是无刺激性的快速局部麻醉 药。皮下注射后1-3min内产生麻醉，可维持3045min。它可使血管轻度舒张，易被吸收入血而失 去药效。在溶液中加入少量肾上腺素(每100ml加 入0.1％肾上腺素0.2-0.5ml) 能使局麻醉时间延长至 1-2h。常用1％-2％盐酸普鲁卡因溶液阻断神经纤 维传导，剂量应根据手术范围和麻醉深度而定
(1) 戊巴比妥钠： 为中效巴比妥类药物。戊巴比妥钠是最常用的麻醉剂， 有兽用、人兽共用的产品，使用时应注意药品质量。 (2) 硫喷妥钠： 硫喷妥钠为超速效巴比妥类药物，为淡黄色粉末，有硫 臭，易吸水，装在安瓿中保存。其水溶液不稳定，故必须 临时配制，常配浓度为1％～5％，在4℃冰箱中保存，在室 温中则只能保存24h。 该药麻醉诱导和苏醒时间短，一次用药仅可维持数分钟 。因此，一般用作为诱导麻醉或基础麻醉。其副作用：对 呼吸系统有明显的抑制作用，不宜与吗啡合用。
实验动物被毛的去除方法 (depilation )
动物被毛常影响实验操作和结果的观察，因此实验中 常需去除或剪短动物的被毛。方法有四种：
1．剪毛法 动物急性实验中常用此法。
2．拔毛法 兔耳缘静脉注射或取血时以及给大、小白鼠作 尾静脉注射时常用此法（液体石蜡,凡士林 ）
3．剃毛法 大动物作慢性手术时常用此法。
1.临时性标记(temporary markers) （1）染色法(Staining)
染色法是用化学剂在动物身体明显部位如 被毛、四肢等处进行涂染，或用不同颜色等来 区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握 的方法。 常用的标记溶液有：①3％-5％苦味酸溶液 （黄色）；②0.5％中性红或品红溶液（红色） ；③2％硝酸银溶液，(咖啡色，涂后需光照 10min)；④煤焦油酒精溶液（黑色）；⑤龙胆 紫溶液（紫色）。
2．麻醉方法的选择 (electing the method)
(1) 动物种类与麻醉方法的选择：
动物的种类不同，选择麻醉方法也不尽相同
，比如鼠类动物一般都选择腹腔麻醉、吸入性麻
醉；而兔、犬、羊、猴等都比较适合静脉麻醉。
(2) 实验类型与麻醉方法的选择：
实验时间短，就可以考虑给予吸入性麻醉
或短效静脉麻醉等。如果实验时间很长，选择静
大鼠的抓取方法
大鼠的尾静脉采血和手术操作就需固定大 鼠。麻醉后置于大鼠实验板上(仰卧位)，先用 线固定好四肢，然后用棉线将大鼠两上门齿固 定于实验板上。如做大鼠尾静脉注射，可将大 鼠置于固定器内，使鼠尾留在外面进行操作。
固定板固定大鼠
3、豚鼠(Guine pig )的抓取与固定
豚鼠性情温和，胆小易惊，一般不易伤人， 抓取时，先用手掌扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上 方，拇、食指环握颈部，另一只手托住臀部。 如果在实验时豚鼠频繁挣扎，不宜采用此方 法，因为操作者的拇、食指会随动物的挣扎越抓 越紧而引起豚鼠窒息。 另外，有时可用纱布将豚鼠头部轻轻盖住，操 作人员轻扶住其背部或者让其头部钻到实验人员 的臂下，然后进行实验操作。
脉输液连续麻醉比选择肌肉和腹腔注射麻醉更好 。因为静脉麻醉可以根据实验时间的长短继续给 药，延长麻醉时间。
（二）常用的麻醉剂(common
anesthetics)
动物实验中常用的麻醉剂分为三类，即 挥发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂 。 1. 挥发性麻醉剂 (the volatile anesthetics) 这类麻药包括乙醚、氯仿等。乙醚是常 用的吸入麻醉剂，乙醚挥发性很强，有特殊的 气味，为易燃品，适用于各种动物(鸡除外)， 乙醚的作用是抑制中枢神经系统。
乙醚的特点是安全范围大，肌肉能完全松弛
，对肝和肾的毒性较小，麻醉的诱导期和苏醒 较短，动物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后苏
醒较快。其副作用是对呼吸道和结膜刺激性强
，胃肠道反应强，局部刺激作用大，可引起上
呼吸道粘膜液体分泌增多，易发生呼吸道阻塞
，使用时应小心。
2.非挥发性麻醉剂(the
anesthetics)
4．脱毛法 一般大动物作无菌手术的术野准备或观察动物 皮肤血液循环和病理变化时常采用此法。
三、实验动物的麻醉方法(anesthesia
)
在一些动物实验，特别是手术等实验，为了实
验的顺利进行，减少动物的挣扎和保持安静，便 于操作，常对动物采用必要的麻醉。此外，从人 道主义角度，麻醉也是动物保护所必须采取的措 施。
6、猪(pig)的抓取固定方法
抓取猪时，一人从背后紧抓猪的两耳将其 提起，使其臀部着地，两腿膝部合拢将其躯干 夹住。 实验中如需分离猪股静脉取血、注射 或输液时，或要在猪腹部或颈部操作时，可将 猪仰放在“v字型槽内进行固定，也可用木制 三角固定架和帆布吊兜来固定小型猪。
三角架固定
固定带悬吊固定
（1）染色法(Staining)
标记时，用标记笔蘸取上述溶液，在动物体表不同部位 涂上斑点，以示不同号码。编号的原则是：先左后右，从 前到后。
一般把涂在左前肢上的记为1号，左侧腹部为2号 ，左后肢为3号，头顶部为4号，腰背部为5号，尾基 部为6号，右前肢为7号，右侧腰部为8号，右后肢为 9号。 NO. 9
基本的操作技术方法 The basic of operating techniques ： 动物的抓取、固定、标号、脱毛、麻醉、给 药、采集血及尿样、处死、尸检等
一、实验动物的抓取和固定 (snatching and fixing )
1、小鼠(mouse)的抓取与固定
实验时从笼盒将小鼠尾部抓住并提起，放 在笼盖(或表面粗糙的物体)上，轻轻向后拉鼠 尾，在小鼠向前挣脱时，用左手(熟练者也可 用同一只手)拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤 ，无名指、小指和手掌心夹住背部皮肤和尾部 ，并调整好动物在手中的姿势。
的犬抓取时，要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部
，使犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。急性实
验用犬，可用犬夹夹住犬颈部后,将它压倒在地
，由助手将其四肢固定好。
犬嘴的捆绑方法
实验需要麻醉时，把麻醉完善后的犬固定在手
术台或实验台上，固定的姿势，依手术或实验的 种类而定。一般采用仰卧位或俯卧位，前者便于 进行颈、胸、腹、股等部位的实验，后者便于进 行背、脑、脊髓实验。用犬头固定器固定犬头。
3．针刺法 人工针刺号常用于兔的标记，先用手拔 去兔耳的被毛，人工针刺号码，刺后涂以酒精黑 墨即可。目前有市售的兔用打号器，原理与此相 同，附带有不同数字和符号的针刺字号。可根据 需要选用。字号安装在打号器上打号后，用黑墨 涂在打号局部，数天后黑墨浸入皮下，显示出蓝 黑色字号。
一般来说，小型动物适宜用打耳孔法和染 色法，中型动物适用挂牌法、针刺法和烙印法。
豚鼠的抓取方法
4、家兔(rabbit)的抓取与固定
抓取家兔时，轻轻打开兔笼门，勿使兔受惊 ，然后将手伸入笼内，从兔头前部把两耳轻轻压 于手掌内，兔便卧伏不动，此时将颈背部的被毛 和皮肤一起抓住提起，再以另一手托住臀部，使 兔身的重量大部分落在该手掌上。
Which is wrong or right?
（一）动物麻醉前的准备与处理
(Preparation and processing)
1．麻醉前的准备(Preparation) ①实验前动物禁食，一般在麻醉前12h禁食 较好； ②大动物(犬、羊、猪、猴)实验前，必要时可 给予一定量的安定剂和阿托品类药物，以减轻动 物的过度紧张和减少唾液的分泌，利于气管插管 的操作； ③需要时，在试验的部位进行备皮等。
实验动物学的 基本操作技术方法
The basic of operating techniques of animal experiments
主讲教师：白静
动物实验的操作技术方法已成为医学科研 和教学工作不可缺少的手段。动物实验方法多 种多样，在不同的研究领域有其不同的目的和 应用，但是一些基本的操作技术方法是一样的 ，对于实验研究者来说无论从事哪一类研究的 项目，都会不同程度地应用这些技术，动物实 验操作的正确与否，会直接影响实验结果，这 是科学实验工作者必须熟练掌握的基本功。
non-volatile
这类麻醉剂种类较多，分为全身麻醉剂和 局部麻醉剂。全身麻醉剂包括苯巴比妥钠、戊 巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，氨 基甲酸乙酯和水合氯醛。这些麻醉剂使用方便 ，一次给药可维持较长的麻醉时间，麻醉过程 较平稳，动物无明显挣扎现象。但缺点是苏醒 较慢。
1）全身麻醉剂(Systemic anesthetics)
(2) 利多卡因： 常用于表面、浸润、传导麻醉和硬脊膜 外腔麻醉。利多卡因的化学结构与普鲁卡因不同 ，其作用效力和穿透力均比普鲁卡因强两倍，作 用时间也较长。阻断神经纤维传导及粘膜表面麻 醉浓度为1％～2％。通常用0.5％～1％的浓度。
（ 三 ） 常 用 麻 醉 药 物 的 用 法 与 用 量 (usage and dose)
常用实验动物全身麻醉药的用法与用量见下表。
3.永久性标记 (permanent marker)
1．烙印法 烙印法是用刺号钳或烧红的铁烙将号码烙压在 动物无体毛或明显部位，如耳、面鼻部和四肢部位等。 然后用以酒精为溶剂的染料涂布。此类方法应注意烙号 部位的污染和预防感染。 2．打耳孔法 打耳孔法是专用于动物编号而直接在动物耳朵 上打孔或打成缺口编号的方法，用剪刀将耳缘剪缺口也 可代替此方法。由打孔的位置和孔的数量来标记。打孔 法应注意防止孔口愈合，可使用滑石粉涂抹在打孔局部 。
若动物编号超过10或更大数字时，可使用上述两种不同 颜色的溶液，即把一种颜色作为个位数，另一种颜色作为 十位数。这种交互使用可编到99号。(如红色为十位，黄色
为个位)
NO.12
染色法多用于实验周期较短，动物数 量不多的情况。这种方法标号简单，动物无疼痛 和损伤，但由于动物之间互相摩擦、舔毛，尿、 水浸渍被毛或脱毛，或因日久颜色自行消退等原 因，不宜用于长期的实验。此法主要用于大、小 鼠、豚鼠和白色家兔。
家兔的固定方法可根据需要而采用：①盒式 固定，常用作兔耳血管注射、采血或观察兔耳血 管变化，兔脑内接种等操作固定；②台式固定， 常用作兔静脉采血或测量血压、呼吸等实验和技 术操作时的固定；③架式固定，常用于作热原试 验时固定。
兔头固定
固定台固定兔方法
5、犬(dog)的抓取与固定
经过驯服的犬抓取是Байду номын сангаас方便的，而未经驯服
2）涂漆或贴胶布 (painting or taping) 用油漆在动物角或体表涂漆进行标记， 或用胶布贴在动物腿或翅上进行标记，也都是效 果较好的临时性标记方法。
2.半永久性标记(half
a permanent marker)
1) 挂牌法 挂牌法可用来标记多种动物，并多数将塑料、铝或 钢片制成的牌固定在实验动物耳朵内侧面上作为标记。 一般用于兔、豚鼠标记。犬、猴、猫等动物有时可挂在 颈部或笼箱或链条上。 2) 戴项圈法 先将号码冲压在圆形或方形铝或不锈钢制作的金属牌上 ，长期使用不生锈。然后，将标有号码的金属薄片固定 在拴动物的皮带圈上，将此圈固定在动物颈部。
小鼠的抓取方法
小鼠固定架固定方法
2、大鼠(rat)的抓取与固定
大鼠抓取方法基本同小鼠，抓大鼠时若操 作者不熟练，或者大鼠特别凶猛，操作者最好 戴上防护手套(帆布或硬皮质均可)。如若是灌 胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射时，可采用与 小鼠相同的手法，即拇、食指捏住鼠的耳朵及 头颈皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤，置于掌 心中，调整大鼠在手中的姿势后即可操作。
猪固定带
二、实验动物的编号、标记和 去毛方法(number 、 marking and depilation )
（一）编号和标记方法 在动物实验中，为了使实验动物个体间或组 间区别开来，便于对每个实验动物的反应情况进 行观察，必须对实验动物进行编号、标记。标记 的方法很多，但基本原则是： 号码清楚、耐久、简便、易认和适用。