6 2014氧化酶活性测定
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么？
下周实验
实验七 植物组织中可溶性总糖 含量测定
酶活力=
△A470nm
0.5
t•W
×
VT Vs
（△A470nm/gFW· min）
W：马铃薯鲜重（g） t：反应时间（min） VT：酶液总体积（ml） VS：测定时用去酶液体积（ml）
思考题
1、本实验要取得精确的结果，需注意控制哪些方
面的误差？
2、酶活性单位可用克鲜重、克干重及毫克蛋白三
种方式表示，你认为哪种方式表示更好些？为什
实 验 六
氧化酶活性测定
实验目的
• 在植物生长发育过程中，植物体内的氧化酶，如 细胞色素氧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶等， 活性有较大的变化，一定程度上反映了植物的发 育进程和代谢活性。 • 采用分光动力学方法测定，操作简单直观，并可 分析其动力学特点。
过氧化物酶（POD）
1. 广泛分布在植物的各个器官中，与光合作用、呼吸作用 及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中活
混匀；
4. 立即计时，于分光光度计上测取光密度，间隔15秒读数一 次，共读12次（或光密度增率很小为止）。
实验步骤2： （2）多酚氧化酶的测定
1. 取2只1cm比色皿； 2. 一比色皿中加入多酚氧化酶反应混合液作为空白参比，波长 420nm调光密度零点； 3. 另一比色皿中先加入反应混合液3ml，后加入100ul酶液，混
6.0）于烧杯中，加入愈创木酚28ul，加热搅拌，直至愈创
木酚溶解，冷却后加入30%过氧化氢19ul，混合均匀，保
存于冰箱中; 4、多酚氧化酶反应混合液：0.21克儿茶酚溶于1000ml 0.1M 磷酸缓冲液（pH 6.5）中。
实验步骤1: 粗酶液的制备
1. 称取1克（精确到小数点后两位）去皮马铃薯块茎，
含量
420nm有最大吸收峰
实验材料：
马铃薯块茎
实验用具：
天平 5ml移液管2支 100 µ l移液枪1支 离心管2支 高速离心机 分光光度计
实验试剂
1、0.02M KH2PO4溶液; 2、0.1M磷酸缓冲液（pH 6.0；pH 6.5）
3、过氧化物酶反应混合液：取50ml 0.1M磷酸缓冲液（pH
470nm有最大吸收峰
多酚氧化酶（PPO）
1. 多酚氧化酶是一种含铜氧化酶
2.
由于它的酶促褐变往往导致一些植物经济价值 的下降；且与植物对病害、伤害和虫害的防御 等生理功能息息相关，因而一直成为人们研究 的热点
多酚氧化酶（PPO）
多酚氧化酶在有氧存在的条件下，能使儿茶酚 （邻苯二酚）氧化成儿茶醌，该物质在420nm处 有最大吸收峰，可用分光光度法测量生成物的
性不断变化。
2. 一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是 因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化 成木质素，增加木质化程度，所以过氧化物酶可作为组 织老化的一种生理指标。
过氧化物酶（POD）
过氧化物酶在有过氧化氢的存在下，过氧化物酶能使愈创 木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸 收峰，可用分光光度法测量生成物的含量。
切碎后放入研钵；
2. 加5ml KH2PO4溶液研磨至匀浆；
3. 移入离心管，放入离心机，12000转/分离心4分钟
上清液即为粗酶液。
实验步骤2 （1）过氧化物酶的测定
1. 取2只1cm比色皿； 2. 一比色皿中加入过氧化物酶反应混合液作为空白参比，波 长470nm调光密度零点； 3. 另一比色皿中先加入反应混合液3ml，后加入100ul酶液，
匀；
4. 立即计时，于分光光度计上测取光密度，间隔15秒读数一次， 共读12次（或光密度增率很小为止）。
实验结果计算
以每分钟光密度变化值表示酶活性的大小，即：
百度文库
Δ A（470nm或420nm）/克鲜重材料•分钟
计算公式
以每分钟光密度变化表示酶活性大小 （以POD活性为例），即:
第5次读数-第3次读数
下周实验
实验七 植物组织中可溶性总糖 含量测定
酶活力=
△A470nm
0.5
t•W
×
VT Vs
（△A470nm/gFW· min）
W：马铃薯鲜重（g） t：反应时间（min） VT：酶液总体积（ml） VS：测定时用去酶液体积（ml）
思考题
1、本实验要取得精确的结果，需注意控制哪些方
面的误差？
2、酶活性单位可用克鲜重、克干重及毫克蛋白三
种方式表示，你认为哪种方式表示更好些？为什
实 验 六
氧化酶活性测定
实验目的
• 在植物生长发育过程中，植物体内的氧化酶，如 细胞色素氧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶等， 活性有较大的变化，一定程度上反映了植物的发 育进程和代谢活性。 • 采用分光动力学方法测定，操作简单直观，并可 分析其动力学特点。
过氧化物酶（POD）
1. 广泛分布在植物的各个器官中，与光合作用、呼吸作用 及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中活
混匀；
4. 立即计时，于分光光度计上测取光密度，间隔15秒读数一 次，共读12次（或光密度增率很小为止）。
实验步骤2： （2）多酚氧化酶的测定
1. 取2只1cm比色皿； 2. 一比色皿中加入多酚氧化酶反应混合液作为空白参比，波长 420nm调光密度零点； 3. 另一比色皿中先加入反应混合液3ml，后加入100ul酶液，混
6.0）于烧杯中，加入愈创木酚28ul，加热搅拌，直至愈创
木酚溶解，冷却后加入30%过氧化氢19ul，混合均匀，保
存于冰箱中; 4、多酚氧化酶反应混合液：0.21克儿茶酚溶于1000ml 0.1M 磷酸缓冲液（pH 6.5）中。
实验步骤1: 粗酶液的制备
1. 称取1克（精确到小数点后两位）去皮马铃薯块茎，
含量
420nm有最大吸收峰
实验材料：
马铃薯块茎
实验用具：
天平 5ml移液管2支 100 µ l移液枪1支 离心管2支 高速离心机 分光光度计
实验试剂
1、0.02M KH2PO4溶液; 2、0.1M磷酸缓冲液（pH 6.0；pH 6.5）
3、过氧化物酶反应混合液：取50ml 0.1M磷酸缓冲液（pH
470nm有最大吸收峰
多酚氧化酶（PPO）
1. 多酚氧化酶是一种含铜氧化酶
2.
由于它的酶促褐变往往导致一些植物经济价值 的下降；且与植物对病害、伤害和虫害的防御 等生理功能息息相关，因而一直成为人们研究 的热点
多酚氧化酶（PPO）
多酚氧化酶在有氧存在的条件下，能使儿茶酚 （邻苯二酚）氧化成儿茶醌，该物质在420nm处 有最大吸收峰，可用分光光度法测量生成物的
性不断变化。
2. 一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是 因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化 成木质素，增加木质化程度，所以过氧化物酶可作为组 织老化的一种生理指标。
过氧化物酶（POD）
过氧化物酶在有过氧化氢的存在下，过氧化物酶能使愈创 木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸 收峰，可用分光光度法测量生成物的含量。
切碎后放入研钵；
2. 加5ml KH2PO4溶液研磨至匀浆；
3. 移入离心管，放入离心机，12000转/分离心4分钟
上清液即为粗酶液。
实验步骤2 （1）过氧化物酶的测定
1. 取2只1cm比色皿； 2. 一比色皿中加入过氧化物酶反应混合液作为空白参比，波 长470nm调光密度零点； 3. 另一比色皿中先加入反应混合液3ml，后加入100ul酶液，
匀；
4. 立即计时，于分光光度计上测取光密度，间隔15秒读数一次， 共读12次（或光密度增率很小为止）。
实验结果计算
以每分钟光密度变化值表示酶活性的大小，即：
百度文库
Δ A（470nm或420nm）/克鲜重材料•分钟
计算公式
以每分钟光密度变化表示酶活性大小 （以POD活性为例），即:
第5次读数-第3次读数