南蛇簕抗眼镜蛇毒的实验研究

南蛇簕抗眼镜蛇毒的实验研究

李景新，蒋三员，唐荣德，张健民

（广东省江门市新会中医院，广东江门，529100）

Experimental Study of Nanshelei for Anti-Cobratoxin Action

LI Jing-xin, JIANG San-yuan,TANG Rong-de, ZHANG Jian-min

(Xinhui Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jianmen, Guangdong, 529100, China) [Abstract] Objective To explore the treatment effects of the Nanshelei (南蛇簕)for anti-cobratoxin. Methods The limulus reagent method was used in anti-cobratoxin tests.Results The concentration for cobratoxin to produce agglutination reaction is above 5.0µg/ml in action with 0.5EU/ml-1limulus reagent.The nanshelei concentration in 0.5g/ml has 10 times agglutination reaction of anti-cobratoxin Conclusion The nanshelei has better action of anti-cobratoxin.

[Key words]Nanshelei;Nnti-cobratoxin;

[摘要]目的探讨南蛇簕抗眼镜蛇毒的作用。方法抗眼镜蛇毒采用鲎试剂试验法。结果眼镜蛇毒与0.5EU/ml-1鲎试剂产生凝集反应的浓度在5.0µg/ml以上；南蛇簕提取液（含生药）为0.5g /ml浓度时有抗10倍量眼镜蛇毒的凝集反应；结论草药南蛇簕有较强的抗眼镜蛇毒作用。

[关键词]南蛇簕；抗眼镜蛇毒

南蛇簕是我国南方地区民间常用的草药，为豆科云实属植物喙荚芸实（Caesalpinia minax Hance.）以根、茎、叶。性味功能：苦、凉，清热解暑，消肿，用于治跌打损伤、骨折、疮疡肿毒，皮肤搔痒，毒蛇咬伤。在我们地区外用治疗带状疱疹有良好的效果。因此，本文进行了南蛇簕醇提液抗眼镜蛇毒作用的实验研究，探讨其抗毒效果，现报告如下：

1. 材料与仪器

南蛇簕摘自江门市新会区郊区；鲎试剂批号0410450.5EU/支; 细菌内毒素批号04070110EU/支, 溶解水批号040201；厦门鲎试剂厂：。眼镜蛇毒由广州蛇伤研究所提供。电热恒温水浴箱，湖北黄石医疗器械厂；超净化工作台，苏州市净化设备厂。小试管，注射器等经除热原处理。

2．方法与结果

2.1供试液的制备：取饮片1000g加常水适量，超过药面2～3cm，煎煮二次，每次1小时，滤过，合并煎液浓缩至（950ml）流膏状，加95%乙醇使含醇量达65%，静置过夜，过滤。醇液挥去乙醇，加蒸馏水至250ml，滤过（加水后有不溶物所以滤过）得醇提水溶液。(含生药浓度为4g/ml).

2.2眼镜蛇毒的制备：精密称取眼镜蛇毒37mg，加鲎试剂溶解水18.5ml溶解(浓度为2mg/ml=2000μg )，摇匀备用。

2.3鲎试剂的灵敏度复核［1］按照《中国药典》2000年版附录BET法的规定，复核的鲎试剂灵敏度结果见表1，二批鲎试剂均在0.5λ~2.0λ范围，符合标示的灵敏度要求。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果*

TAL批号细菌内毒素浓度（Eu·ml）λ(EUּml-1) λ c(EUּml-1) 结果

1.0 0.5 0.25 0.125 NC

020628 ++++ ++++ - - - - - - - - - - 0.50 0.50 合格041045 ++++ ++++ - - - - - - - - - - 0.50 0.50 合格

*：λc为灵敏度的测定值

2.4眼镜蛇毒与鲎试剂的凝集反应试验：取2.2眼镜蛇毒液(2000μg /ml )0.5 ml分别置I、II 消毒具塞试管中，II号管加鲎试剂溶解水0.5ml摇匀备用。取0.5EU/ml鲎试剂加入鲎试剂溶解水0.1ml溶解, 加入眼镜蛇毒液0.1ml，胶布封口，每个浓度做2管，并作阴、阳性对照，结果阴性对照为阴性；阳性对照为阳性；眼镜蛇毒管呈阳性，眼镜蛇毒与鲎试剂产生凝集反应。

2.5眼镜蛇毒与鲎试剂产生凝集反应的浓度试验：取2.2配制浓度2000ug/ml眼镜蛇毒液1ml置已装有1ml鲎试剂溶解水的消毒具塞I号试管中，摇匀，取1ml加入已装有1ml鲎试剂溶解水的II号试管中，按此稀释至第五号管。从第IV号管中取1ml加鲎试剂溶解水至10ml 分别取1.0ml、0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml、0.5ml、0.4ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml共10个少于1ml的加鲎试剂溶解水至1ml。蛇毒浓度分别为12.5、11.3、10、8.8、7.5、6.3、5、

3.8、2.5、1.3（ug/ml）。(2) 取0.5EU/ml-1的鲎试剂，加0.1ml鲎试剂溶解水溶解，分别加入上述不同浓度的眼镜蛇毒液0.1ml，每个浓度做2管，轻轻摇匀，胶布封口，置37±1℃恒温水浴箱中保温60±1min，观察结果见表2 。

表2 眼镜蛇毒对鲎试剂凝集反应浓度试验结果

编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 NC PC 眼镜蛇毒浓度(μg /ml) 12.5 11.3 10.0 8.8 7.5 6.3 5.0 3.8 2.5 1.3 结果++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- -- ++

2.6 抗眼镜蛇毒试验：取眼镜蛇毒液(2000μg /ml ) 1.0 ml，加鲎试剂溶解水至10.0ml，摇匀，取6.0ml加鲎试剂溶解水至12.0ml (浓度为100μg /ml)，摇匀备用；取南蛇簕醇提水溶液(4g/ml) 1ml于I、II号消毒具塞试管中，在II号管内加入鲎试剂溶解水1.0ml，摇匀，取1.0ml加入己装有1.0ml鲎试剂溶解水的III号试管中，摇匀。按此法作倍比稀释至第5管，备用；在不同浓度的南蛇簕药液中加入眼镜蛇毒液1ml，摇匀, 备用。取0.5EU/ml的鲎试剂，加0.1ml 鲎试剂溶解水溶解，分别加入南蛇簕药液与眼镜蛇毒液的混合液0.1ml，每个浓度做2管，轻轻摇匀，胶布封口，置37±1℃恒温水浴箱中保温60±1min，观察结果见表2.

表2 不同浓度南蛇簕液抗眼镜蛇毒试验结果

编号 1 2 3 4 5

眼镜蛇毒浓度(μg /ml) 50 50 50 50 50

南蛇簕药液浓度(g /ml) 4 2 1 0.5 0.25

结果――――――――＋＋

3．讨论

3.1 鲎试剂是一种能与生物毒素产生凝集反应的生化试剂。实验研究表明，眼镜蛇毒与鲎试剂可产生凝集反应, 浓度在5.0µg/ml以上，通过抗凝集反应来探讨中草药的抗眼镜蛇毒作用是可行的。

3.2眼镜蛇毒浓度在5.0µg/ml就能引起鲎试剂产生凝集反应，南蛇簕提取液在（含生药）0.5g /ml浓度能抗眼镜蛇毒50μg / ml浓度（是能产生凝集反应的10倍）的鲎试剂凝集反应，显示有良好的抗眼镜蛇毒作用。证明民间用于治疗毒蛇咬伤是有效的。

参考文献

[1] 国家药典委员会《中国药典》2000年版，二部，附录: 86.

注：广东省中医药局的立项课题编号：1050124;江门市新会区科技局立项课题编号：0535.