革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌检验

2.胃肠炎 4.携带者
二、临床意义
肠热症 伤寒沙门菌等经口 菌毛 吸附小肠黏膜细胞上 穿入淋巴液 潜伏期2W 在肠壁、肠系膜淋巴组 织中繁殖（致敏） 胸导管 血流（第一次菌血症） 第二次菌血症 发病期 （1-4W） 肝 脾 肾 淋巴结 胆囊 尿排菌 粪便排菌 迟发型变 态反应 肠壁坏死 、溃疡 肠出血、 肠穿孔
在自然界中广泛分布，可栖生在人和动物的肠道内，多数为
条件致病菌，少数为致病菌
致病菌：沙门菌、志贺菌、耶尔森菌等 与医学 的关系
条件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸橼酸杆菌、肠杆属菌
、沙雷菌、变形杆菌等
共同特性
1）形态与染色
革兰阴性杆状或球杆状细
菌，无芽孢，多数有鞭毛，能运动，少数细菌有荚
膜或包膜，有致病性的菌株多数有菌毛
燥、化学消毒剂敏感、耐低温、耐胆盐、煌绿（可抑制
临床意义
（一）肠道外感染 除志贺菌外，多数肠杆菌科细菌均可引起肠道外感染，且 往往为获得性的感染 鼠疫耶尔森菌可引起自然疫源烈性传染病鼠疫，伤寒沙门 菌可经粪口传播引起血流感染 （二）肠道内感染 是人和动物肠道感染的重要病原菌。比较明确的肠道病原 菌有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶尔森菌属等
2）培养特性
在22~35℃生长良好
需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普
通培养基如血琼脂和麦康凯培养基上容易生长，大部分菌属
大肠埃希菌菌落特征（MAC）
大肠埃希菌菌落特征（血平板）
SS培养基（沙门志贺培养基） 乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂
大肠埃希菌
乳糖
发酵
产酸
中性红
呈红色
桃红色乳糖发酵菌落
第四节 志贺菌属
案例
男性，35岁。因腹痛，脓血便2天来诊。 患者3天前出差回来后突然发热达38℃，无寒战，同时有 腹痛、腹泻，大便每日10余次，为少量脓血粘液便，伴里急 后重。医生接诊后，怀疑患者患了细菌性痢疾。 请问：1、为做病原学上的检查，应该采集什么标本？ 2、应该选用什么标本来进行分离培养？对可疑菌 落需做哪些生化反应和血清学试验来鉴定？
三、微生物学检验
1.采集标本
、胸腹水等。
主要有痰液、血液、尿液、脓、脑脊液、粪便
2.检验方法
1）直接检查：脓、痰直接涂片染色镜检，尿、脑脊液取离心沉 渣涂片染色镜检。可见革兰阴性球杆菌，有明显的荚膜。 2）分离培养：血液、脑脊液标本先经肉汤增菌培养，其他标本 接种血平板或麦康凯琼脂平板进行分离培养。 3）鉴定 ①生化反应：革兰染色，氧化酶、触酶和硝酸酶、KIA、MIU、 IMViC ②荚膜肿胀试验
阳性:红色 阴性:淡黄色 硝酸盐还原实验
发酵型
氧化型 OF实验
产碱型
一、生物学特性
4. 抗原构造
1)O（菌体）抗原：脂多糖，耐热 2)H（鞭毛）抗原：蛋白质，不耐热 3)K（表面）抗原：荚膜多糖，耐热，能阻止O抗原凝集 反应
一、生物学特性
5.抵抗力
自然状态下较强。加热60℃30min既被杀死，
耐低温，对常用化学消毒剂敏感、对胆盐、煌绿有选
KIA：AA+-；MIU：--+；IMViC:--++
4.抗原结构：
O抗原
K抗原：荚膜多糖，用以分型
二、临床意义
1. 克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群，是医院感染中 最重要的条件致病菌
2. 肺炎克雷伯菌是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发
性肺炎
3. 肺炎克雷伯菌肺炎亚种还能引起各种肺外感染
• 定群：每个O血清群的单价因子血清定群 • 定型：用单价H因子血清与待测菌做玻片凝集试验 3）血清学诊断（肥达试验）用已知的伤寒沙门菌O.H抗原、 副伤寒沙门菌A、B、C的H抗原，检测受检血清中有无相应
的抗体的半定量凝集试验。
结果解释：正常值伤寒沙门菌O抗体效≥1:80，H 抗体效价 ≥1:160，副伤寒沙门菌 A、B、C的H抗体效价≥ 1:80才有 临床意义
一、生物学特性
5.变异性
（1）S-R变异：宋内志贺菌（诊断血清中含有两相血清）
（2）耐药性变异
（3）毒力变异
6.抵抗力
本属细菌对理化因素的抵抗力较其他肠杆菌科细菌为低。
对酸较敏感，在运送培养时须使用含有缓冲剂的培养基，
以免被粪便中其他细菌代谢中的酸所杀死。
二、临床意义
1. 致病因素
1）侵袭力
2）内毒素：志贺菌主要致病物质 3）外毒素
三源自文库微生物检验
三、微生物检验
鉴定
• 1）生化反应鉴定：可以菌落革兰染色，若为革兰阴性杆菌 ，进行氧化酶、触酶和硝酸盐还原试验，氧化酶阴性，后两 者为阳性者可做KIA和MIU等生化反应进一步鉴定
KIA（K A－＋） MIU（＋－－）
四、微生物检验
2）血清学鉴定
• 定属：多价O抗血清对沙门菌分离株进行定属
2.培养特性
兼性厌氧，营养要求不高，在肠道鉴别培养基上可形成乳糖
不发酵、中等大小、无色半透明的菌落，宋内志贺菌常形成
粗糙型菌落，且能迟缓分解乳糖，培养48h后可形成乳糖发酵 的粉红色菌落。
一、生物学特性
3.生化反应
发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖。
KIA：KA-；
MIU：--/+-；
IMViC：-/++--
三、微生物学检验
3.检验方法
1）分离培养 2）鉴定 先进行氧化酶、触酶和硝酸盐还原试验（-++） 后做KIA和MIU等生化反应试验
第五节 克雷伯菌属
克雷伯菌属：肠杆菌科中的一属，为条件
致病菌，临床感染中以肺炎克雷伯菌多
见，也是引起医院感染的重要病原菌
一、生物学特性
1.形态与染色
肺炎克雷伯菌为革兰阴性杆菌，单个、成双或 者短链状排列，有明显荚膜，无芽孢，无鞭毛 ，有菌毛
高热、肝脾肿大、玫瑰疹、白细胞↓ 等全身中毒症状
三、微生物检验
• 标本采集
1周取血，2、3周取粪，3周取尿液，全病程骨髓，血清学诊 断应在病程的不同时期分别采集2～3份标本
食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物
带菌者：粪便 尿液：中段尿离心后取沉淀物
• 分离鉴定
增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反应→血清鉴定
伊红美蓝不能结合
无色的乳糖不发酵菌落
3)生化反应
非常活泼。发酵葡萄糖（产酸或产酸产
气） 、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性
4）抗原结构：
O抗原 H抗原 表面抗原 菌体抗原 菌毛抗原
5）变异性
多样。如S-R变异、H-O变异，生化反应
变异、耐药性变异
6）抵抗力
非致病菌）
不强。加热60℃30min既被杀死，对干
二、临床意义
2）肠道内感染 是人和动物肠道的正常菌群，但其中有些
菌株能引起轻微腹泻至霍乱样严重腹泻，根据其不同的血清
型别、毒力和所致临床症状的不同，将引起人腹泻的大肠埃 希菌分为5类：
三、微 生物学常规检验
1.标本采集
肠外感染的标本：取血液、痰液、脓液、分泌物等
肠内感染的标本：取腹泻和食物中毒者的粪便、肛拭和残留食
志贺菌属细菌是引起人类细菌性痢疾的主要肠道病原菌之一 志贺菌属可用特异性抗血清将其分为4个血清群（种）： A群为痢疾志贺菌：症状最重 B群为福氏志贺菌：我国多见 C群为鲍特志贺菌 D群为宋内志贺菌：症状最轻，我国多见
一、生物学特性
1.形态与染色
为革兰阴性短杆菌，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，某些菌株有菌毛
染色形态
2.培养特性
兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂平板上 ，形成较大、灰白色、黏液型的菌落，相邻菌 落容易发生融合，用接种针沾取时可挑出长丝 状细丝 在麦康凯或SS琼脂平板上，形成较大、红色、 黏液型菌落。在血平板上不溶血。
粘丝试验
BAP菌落特征
一、生物学特性
3.生化反应
分解葡萄糖、乳糖产酸产气，
平板上某些菌株可产生β -溶血，在SS琼脂平板上少数
菌株可发酵乳糖，形成粉红色菌落。在麦康凯平板上
菌落呈粉红色。在伊红美蓝琼脂平板上呈有金属光泽 的紫黑色菌落。在液体培养基中，呈浑浊生长
一、生物学特性
3. 生化反应特征：
① 发酵多种糖，产酸、产气 ② KIA产酸/产酸、产气 ③ IMViC中4个试验的结果为＋＋―― ④ MIU中3个试验结果为＋＋―
一、生物学特性
3.生化反应
※ 发酵葡萄糖产酸、产气（伤寒沙门菌不产气），不 发酵乳糖。
※
多数沙门菌反应特征为：KIA：KA++，MIU：+--，
IMViC：-+-+/-
二、临床意义
1、致病因素
1．侵袭力 菌毛和Vi抗原构成
2．内毒素
3．肠毒素
2、所致疾病
染
沙门菌主要通过污染食品和水源经口感
1.临床常见伤寒和副伤寒：肠热症 3.菌血症或败血症
2.所致疾病
1）肠道外感染 大肠埃希菌是临床分离的革兰阴性杆菌中最
常见的菌种，可引起各种类型的感染，主要是引起人类泌尿
系感染
•肠道外感染（多为内源性感染）
化脓性感染——定位转移
腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染等 泌尿道感染——病原菌来自病人肠道（上行性） 占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、肾 盂肾炎等）
微生物检验技术
第六章 革兰阴性需氧和兼性厌 氧杆菌检验
刘垣
重点难点
重点
各菌属生物学特性及临床意义。
难点
各菌属微生物学检验
目 录 一、肠杆菌科
二、弧菌科 三、非发酵革兰阴性杆菌 四、其他革兰阴性苛养菌
肠杆菌科
第一节
概述
分
类
肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群形态、生物 学性状相似，需氧或兼性厌氧的革兰阴性杆菌或球杆菌
择性抑制作用，对链霉素、卡那霉素等敏感，但易耐 药
二、临床意义
1.致病因素
1）侵袭力： K抗原和菌毛与侵袭力有关。K抗原有抗吞噬作用
，菌毛有黏附作用
2）内毒素 ：细胞壁上的脂多糖（LPS）
3）肠毒素： 大肠埃希菌可产生两种肠毒素：一种是不耐热肠
毒素（LT）；另一种是耐热肠毒素（ST）
二、临床意义
一、生物学特性
1.形态与染色
革兰阴性杆菌，不产生芽孢，无荚膜，除少数菌株（ 鸡沙门菌和雏沙门菌）外，一般都有周鞭毛，能运动
一、生物学特性
2.培养特性
※ 兼性厌氧，对营养的要求不高，在普通营养琼脂平板上生长
的菌落为半透明、S型菌落，可出现粗糙型的菌落（S-R）变
异。 ※ 在肠道选择性培养基上因不发酵乳糖，菌落透明或半透明， 有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂平板上可形成中心黑色 的菌落
强选择 培养基
伤寒沙门菌
乳糖 不发酵
无色乳糖不发酵菌落
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率
EMB（伊红美蓝培养基），乳糖、伊红、美兰 大肠埃希菌 （非致病菌） 乳糖 产酸 美蓝 形成紫黑色金 属光泽化合物
发酵
伊红
弱选择 培养基
结合
有色的乳糖发酵菌落
伤寒沙门菌等 （致病菌） 乳糖 不发酵
一、生物学特性
4、抗原构造与分类
志贺菌属菌种有O抗原，无H抗原，部分菌种有K抗原。 O抗原是分类的依据，有群特异性和型特异性两种抗原。 根据生化反应和O抗原的不同，将志贺菌属分为4个血清群 （A、B、C、D）和40余个血清型 A群 B群 C群 D群 痢疾志贺菌 福氏志贺菌（★） 鲍氏志贺菌 宋内志贺菌（★）
2.所致疾病
床类型：
主要引起人类细菌性痢疾，主要有以下3种临
1）急性细菌性痢疾 2）慢性菌痢 3）带菌者
二、临床意义
细菌（菌毛）吸附肠黏膜上皮细胞 穿入细胞并扩散周围及深入黏膜下层 释放内毒素、外毒素 肠局部 刺激肠壁植物神 经 肠蠕动↑ 肠肌痉挛 腺体分泌↑ 水分吸收↓ 刺激直肠肛门 括约肌 吸收入血 发热、白细胞↑ 毒 血 症 高热、休克 中毒性脑病 DIC 死亡
里急后重
便数增加
出血、坏死、溃疡
脓血便/黏液血便
腹痛、腹泻
中毒性 菌痢
黏膜炎症 （变性、坏死、脱 落）
三、微生物学检验
1.标本采集
取粪便或肛拭标本。 发病早期采集黏液脓血便做床边接种。 若不能及时送检（甘油保存液或卡-布运送
培养基内）
三、微生物学检验
KIA（KA－－）
MIU（－－－ ）
IMVC（－＋－－）
物
三、微 生物学常规检验
2.肠道外感染标本的常规检验
１）检验程序 ２）检验方法 直接检查→分离培养→鉴定（KIA、MIU）
3.肠道内感染标本的常规检验
1)分离培养：选择培养基 2)鉴定：生化反应、血清学试验、毒素或毒力试验
第三节 沙门菌属
案例
一男性病人，高热10天，有纳差、腹部不适、全身酸 痛的前驱症状。腹部有压痛，肝脾肿大。肥达试验： H 1:40，O1：160，PA1：20，PB<1:20。医生怀疑病人得 了肠热症。 请问：1、为明确诊断，应采集哪些标本来进行微生物学 检验？ 2、所采集的标本应做哪些微生物学检验才能有助 于疾病的诊断？ 3、为了明确诊断，是否还可以再抽血做肥达试验？
微生物检验
IMVC:＋＋――
KIA（AA＋－）
MIU（＋＋－）
第二节 埃希菌属
埃希菌属主要有5个种，
1）大肠埃希菌 临床最常见
2）蟑螂埃希菌
3）弗格森埃希菌 4）赫尔曼埃希菌 5）伤口埃希菌
一、生物学特性
1.形态与染色
菌毛 为革兰阴性短杆状，多数有周鞭毛和
2.培养特性
兼性厌氧，营养要求不高，在血琼脂