实验七 红辣椒色素的提取及薄层色谱鉴定

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四、实验关键步骤
1、载玻片应干净且不被手污染，吸附剂在玻片上应 均匀平整。 2、点样不能戳破薄层板面，各样点间距1—1.5cm， 样点直径应不超过2mm。 3、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则， 无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf值和准 确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
红辣椒色素的提取及薄 层色谱鉴定
Extraction of pigment from red pepper and thin layer chromatography identification
一、实验目的

了解薄层色谱的基本原理和应用。 掌握薄层色谱的基本操作。 学习利用薄层色谱鉴定未知化合物2011-11-246三、实验步骤

1. 红辣椒色素的提取
在50mL圆底烧瓶中，放入1g干燥并研细的红辣椒和2粒
沸石，加入10mL二氯甲烷，装上回流冷凝管，加入回 流20min。待提取液冷却至室温，过滤，除去不溶物， 蒸馏回收二氯甲烷，得到浓缩的粗色素黏稠液。 以200mL广口瓶作薄层析槽，二氯甲烷做展开剂。取极 少量色素粗品置于小试管中，滴入2～3滴二氯甲烷使 之溶解，并在一块3×8cm的薄层板上点样，然后置入层 析槽进行层析，展开后板上出现三个斑点，计算每种 色素的Rf值。
倾斜上行展开
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垂直上行展开
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4. 显色


被分离物质如果是有色组分，展开后薄层色谱板 上即呈现出有色斑点。 如果化合物本身无色，则可用碘蒸气熏的方法显 色。还可使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、浓盐酸 和浓磷酸等。 对于含有荧光剂的薄层板在紫外光下观察，展开 后的有机化合物在亮的荧光背景上呈暗色斑点。 本实验样品本身具有颜色，不必在荧光灯下观察。
Rf = 溶质最高浓度中心至原点中心的距离 溶剂前沿至原点中心的距离
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二组分混合物的薄层色谱
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2、快速分离少量物质（几到几十微克，甚至0.01µg） 3、跟踪反应进程。在进行化学反应时，常利用薄层 色谱观察原料斑点的逐步消失，来判断反应是否 完成。 4、化合物纯度的检验（只出现一个斑点，且无拖尾 现象，为纯物质），此法特别适用于挥发性较小 或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析 的物质。
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薄层色谱的用途
1、化合物的定性检验。（通过与已知标准物对比的方法进 行未知物的鉴定） 在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱中 呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用薄层 色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合 物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多，如薄层的 厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度 和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的比 移值就比较困难。为此，在测定某一试样时，最好用已知 样品进行对照。
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2. 点样

先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始 线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点 直径一般不超过2mm。若因样品溶液太稀，可重复点样， 但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过 大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。若在同一 板上点几个样，样点间距离应为1cm。点样要轻，不可刺 破薄层。
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五、思考题

如何利用Rf值来鉴定化合物？ 薄层色谱法点样应注意些什么？ 常用的薄层色谱的显色剂是什么？
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3. 展开

薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使 溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。 在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超 过1cm。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点 样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展 开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标 上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位置，计算 Rf值。
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二、实验原理

薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示， 又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。样品在薄层板 上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分 离。由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂 上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的 目的。