学习微生物培养的基本技术PPT课件 人教版
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➢ 讨论：为什么盛放无氮培养基的培养皿应是灭过 菌的？
➢ 假设黏液中有三种自生固氮菌，如何将三种细菌 分开？（稀释——接种在无氮培养基上——镜 检——再稀释）
人大附中
2.微生物菌种的分离方法 （1）液体稀释法 将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布
在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌 落。 （2）平板划线分离 将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环 沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划 线，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随 着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单 个菌落。
3.接种操作为什么一定要在火焰旁进行？
人大附中
（05北京）31.（20分）某化工厂的污水池中，含有一种有害 的、难以降解的有机物化合物A。研究人员用化合物A、磷酸 盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效 降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示， 请分析回答问题：
人大附中
➢ 配制好的培养基必须经过灭菌。灭菌是指杀死一定 环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子。培养基一 般采用高压蒸气灭菌法，最终使菌体蛋白质凝固变 性，从而达到灭菌的目的。接种环是用火焰烧灼灭 菌的。
➢ 将某种细菌接种在彻底灭菌的培养基上，经过一段 时间的培养后，就能够得到生长良好的细菌群体， 它们在培养基上会呈现出一定的形态特征。
提示：生产菌株在含有淀粉的固体培养基上， 随着生长可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉， 在菌落周围形成透圈。
人大附中
1.抓 住 导 线 将 加热 丝从加 热腔垂 直拿出 ，小心 不要将 腔内壁 的绝缘 片带出 或划破 。
2.将 备 用 加 热 丝原 样垂直 装回。 注意： 加热腔 内壁贴 有绝缘 片，安 装时请 保证绝 缘片紧 贴腔体 内壁。
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讨论
1.在高压蒸气灭菌开始以前，为什么要将灭菌锅内 的冷空气排除？
2.灭菌完毕以后，如果压力未降到0就打开排气阀， 会出现什么现象？为源自文库么？
➢ NaCl，1 mol／L的NaOH溶液，体积分数为 75％的酒精溶液，蒸馏水。
人大附中
方法步骤
1.培养基的配制 ➢ 称量、溶化、调pH、培养基的分装、加棉塞、
包扎 2.灭菌 3.搁置斜面 4.接种 5.培养
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（4）转为固体培养基时，常采用 划线 的方法接种，获得单菌 落后继续筛选。
（5）若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养， 可采用 定期取样 方法进行计数，以时间为横坐标，以 细菌数 目的对数 为纵坐标，绘制生长曲线。
（6）实验结束后，使用过的培养液应进行 灭菌 处理后，才 能倒掉。
人大附中
【材料用具】
➢ 芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌，牛肉膏，蛋白 胨，琼脂。
➢ 天平，角匙，200 mL烧杯，试管，漏斗，量 筒，玻璃棒，滴管，胶管，弹簧夹，铁架台， 酒精灯，石棉网，三角架，火柴，纱布，棉 花，牛皮纸，线绳，标签，接种环，精密pH 试纸（或pH计），金属小筐，高压蒸气灭菌 锅，恒温箱。
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验证细菌分布的广泛性 （选修课、研究性学习）
➢ 应如何配培养基？如何取样？应如何减少实验 误差？对照实验应如何设置？
第1套 第2套
开盖，在空气中暴露10s 用手指接触培养基10s
第3套
用硬币接触培养基10s
第4套
用滤纸擦一下课桌，再接触培养基10s
第5套
对照（不打开盖）
人大附中
检查自来水中的大肠杆菌是否超标
(选修)·第五章
学习微生物培 养的基本技术
[实验目的]
1、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，理解配 制培养基的一般步骤和方法。 2、了解灭菌的基本原理，以及实验室中常用 的灭菌方法。
3、初步掌握细菌培养的基本技术。
人大附中
【实验原理】
➢ 根据某种细菌的营养需要而选择多种原料配制而成 的培养基，不仅含有这种细菌生长繁殖所需要的各 种营养物质，还要有适宜的pH。本实验所用的牛肉 膏蛋白胨培养基。
3.确 定 加 热 丝 已安 放后， 旋紧固 定螺丝 ，再将 导线固 定到接 线柱上 。
4.上 盖 帽 子 原 样安 放好， 先将三 颗内六 角螺丝 分别旋 上，在 确定三 颗螺丝 都旋上 后，均 匀将螺 丝旋紧 。
5、 禁 止 使 用 河豚鱼 、毒蘑 菇、发 芽马铃 薯等含 有毒有 害物质 的食品 及原料 ，餐饮 业禁止 使用亚 硝酸盐 。
（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选目的菌，这种培养基属 于选择 培养基。
（2）“目的菌”生长所需的氮源是来自培养基中的 化合物A ， 实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 异养需 氧型 。
（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量 减少 的培 养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量 增 加。
大肠杆菌常常作为水污染的指示菌，如果水中不存在大肠杆菌或含 量很少，表明水没有被病原菌污染。我国规定：1000mL自来水中大 肠杆菌的数量不超过3个。
培养基：伊红——美蓝培养基
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自生固氮菌的分离
➢ 设计实验：农田的表层土壤中固氮菌的含量比较 多，根据什么原理将其与其它细菌分开？选用什 么培养基？
（3）利用选择培养基进行分离
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（04天津）（1）人们不会在热泉中发现活着 的嗜冷海藻，而经常可以在冷水环境中分离出 嗜热微生物。请根据酶的特性分析产生这种现 象的原因。
（2）淀粉酶可以通过微生物发酵生产。为了 提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变 育种方法，获得产生淀粉酶较多的菌株。① 写出主要实验步骤。② 根据诱发突变率低和 诱发突变不定向性的特点预期实验结果。
6、 豆 浆 、 四 季豆等 生食有 毒食物 ，应按 要求煮 熟焖透 ，谨慎 提供贝 类、海 螺类以 及深海 鱼的内 脏，有 效预防 豆浆、 四季豆 、瘦肉 精、雪 卡毒素 等中毒 。
➢ 假设黏液中有三种自生固氮菌，如何将三种细菌 分开？（稀释——接种在无氮培养基上——镜 检——再稀释）
人大附中
2.微生物菌种的分离方法 （1）液体稀释法 将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布
在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌 落。 （2）平板划线分离 将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环 沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划 线，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随 着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单 个菌落。
3.接种操作为什么一定要在火焰旁进行？
人大附中
（05北京）31.（20分）某化工厂的污水池中，含有一种有害 的、难以降解的有机物化合物A。研究人员用化合物A、磷酸 盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效 降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示， 请分析回答问题：
人大附中
➢ 配制好的培养基必须经过灭菌。灭菌是指杀死一定 环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子。培养基一 般采用高压蒸气灭菌法，最终使菌体蛋白质凝固变 性，从而达到灭菌的目的。接种环是用火焰烧灼灭 菌的。
➢ 将某种细菌接种在彻底灭菌的培养基上，经过一段 时间的培养后，就能够得到生长良好的细菌群体， 它们在培养基上会呈现出一定的形态特征。
提示：生产菌株在含有淀粉的固体培养基上， 随着生长可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉， 在菌落周围形成透圈。
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1.抓 住 导 线 将 加热 丝从加 热腔垂 直拿出 ，小心 不要将 腔内壁 的绝缘 片带出 或划破 。
2.将 备 用 加 热 丝原 样垂直 装回。 注意： 加热腔 内壁贴 有绝缘 片，安 装时请 保证绝 缘片紧 贴腔体 内壁。
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讨论
1.在高压蒸气灭菌开始以前，为什么要将灭菌锅内 的冷空气排除？
2.灭菌完毕以后，如果压力未降到0就打开排气阀， 会出现什么现象？为源自文库么？
➢ NaCl，1 mol／L的NaOH溶液，体积分数为 75％的酒精溶液，蒸馏水。
人大附中
方法步骤
1.培养基的配制 ➢ 称量、溶化、调pH、培养基的分装、加棉塞、
包扎 2.灭菌 3.搁置斜面 4.接种 5.培养
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（4）转为固体培养基时，常采用 划线 的方法接种，获得单菌 落后继续筛选。
（5）若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养， 可采用 定期取样 方法进行计数，以时间为横坐标，以 细菌数 目的对数 为纵坐标，绘制生长曲线。
（6）实验结束后，使用过的培养液应进行 灭菌 处理后，才 能倒掉。
人大附中
【材料用具】
➢ 芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌，牛肉膏，蛋白 胨，琼脂。
➢ 天平，角匙，200 mL烧杯，试管，漏斗，量 筒，玻璃棒，滴管，胶管，弹簧夹，铁架台， 酒精灯，石棉网，三角架，火柴，纱布，棉 花，牛皮纸，线绳，标签，接种环，精密pH 试纸（或pH计），金属小筐，高压蒸气灭菌 锅，恒温箱。
人大附中
验证细菌分布的广泛性 （选修课、研究性学习）
➢ 应如何配培养基？如何取样？应如何减少实验 误差？对照实验应如何设置？
第1套 第2套
开盖，在空气中暴露10s 用手指接触培养基10s
第3套
用硬币接触培养基10s
第4套
用滤纸擦一下课桌，再接触培养基10s
第5套
对照（不打开盖）
人大附中
检查自来水中的大肠杆菌是否超标
(选修)·第五章
学习微生物培 养的基本技术
[实验目的]
1、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，理解配 制培养基的一般步骤和方法。 2、了解灭菌的基本原理，以及实验室中常用 的灭菌方法。
3、初步掌握细菌培养的基本技术。
人大附中
【实验原理】
➢ 根据某种细菌的营养需要而选择多种原料配制而成 的培养基，不仅含有这种细菌生长繁殖所需要的各 种营养物质，还要有适宜的pH。本实验所用的牛肉 膏蛋白胨培养基。
3.确 定 加 热 丝 已安 放后， 旋紧固 定螺丝 ，再将 导线固 定到接 线柱上 。
4.上 盖 帽 子 原 样安 放好， 先将三 颗内六 角螺丝 分别旋 上，在 确定三 颗螺丝 都旋上 后，均 匀将螺 丝旋紧 。
5、 禁 止 使 用 河豚鱼 、毒蘑 菇、发 芽马铃 薯等含 有毒有 害物质 的食品 及原料 ，餐饮 业禁止 使用亚 硝酸盐 。
（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选目的菌，这种培养基属 于选择 培养基。
（2）“目的菌”生长所需的氮源是来自培养基中的 化合物A ， 实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 异养需 氧型 。
（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量 减少 的培 养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量 增 加。
大肠杆菌常常作为水污染的指示菌，如果水中不存在大肠杆菌或含 量很少，表明水没有被病原菌污染。我国规定：1000mL自来水中大 肠杆菌的数量不超过3个。
培养基：伊红——美蓝培养基
人大附中
自生固氮菌的分离
➢ 设计实验：农田的表层土壤中固氮菌的含量比较 多，根据什么原理将其与其它细菌分开？选用什 么培养基？
（3）利用选择培养基进行分离
人大附中
（04天津）（1）人们不会在热泉中发现活着 的嗜冷海藻，而经常可以在冷水环境中分离出 嗜热微生物。请根据酶的特性分析产生这种现 象的原因。
（2）淀粉酶可以通过微生物发酵生产。为了 提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变 育种方法，获得产生淀粉酶较多的菌株。① 写出主要实验步骤。② 根据诱发突变率低和 诱发突变不定向性的特点预期实验结果。
6、 豆 浆 、 四 季豆等 生食有 毒食物 ，应按 要求煮 熟焖透 ，谨慎 提供贝 类、海 螺类以 及深海 鱼的内 脏，有 效预防 豆浆、 四季豆 、瘦肉 精、雪 卡毒素 等中毒 。