多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的机制研究

·实验技术及其应用·多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的

机制研究

何超，康梅，陈知行，邓瑶，陶传敏，郭靓，谢轶

（四川大学华西医院实验医学科，四川成都610041）

摘要：目的探索多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株对替加环素敏感性降低的机制。方法应用E-test方法测定菌株对

替加环素的敏感性，然后使用PCR和测序技术确定菌株中adeB、adeR和adeS外排泵基因的分布，最后运用实时荧光

逆转录PCR技术测定adeB基因的表达水平。结果替加环素对46株受试菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory con-centration，MIC）范围为0.094~8μg／ml，MIC50=2μg／ml，MIC90=3μg／ml。菌株中adeB、adeS和adeR泵基因广泛分

布，但adeB的相对表达量并一定随着MIC值的增加而增加。结论多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株对替加环素敏感

性下降可能存在adeB基因表达调控以外的机制。

关键词：替加环素；最低抑菌浓度；外排泵；基因表达

中图分类号：R378.2文献标志码：A文章编号：1003-8507（2012）10-2513-03

Study on the Mechanism for decreased susceptibility to tigecycline for

multidrug-resistant Acinetobacter baumannii

HE Chao，KANG Mei，CHEN Zhi-xing，DENG Yao，TAO Chuan-min，GUO Liang，XIE Yi.

Department of Laboratory Medicine，West China Hospital，Sichuan University，Chengdu，Sichuan610041，China Abstract：OBJECTIVE To explore the mechanism for decreased susceptibility to tigecycline for the clinical isolates of mul-tidrug-resistant Acinetobacter baumannii（MDR-AB）.METHODS Susceptibility to tigecycline for the isolates was determined

by E-test method.The distribution of adeB，adeR and adeS efflux pump genes among these isolates was investigated by PCR

and sequencing.Real-time reverse-transcription PCR method was performed to determine the expression level of adeB gene. RESULTS Minimal inhibitory concentrations（MICs）of tigecycline against the46isolates was ranged from0.094to8μg／ml.

MIC50and MIC90were2μg／ml and3μg／ml，respectively.The adeB，adeR and adeS genes were widely distributed among these isolates，but the relative quantification of adeB gene expression did not increase absolutely along with MICs.CONCLU-SION Except expression regulation of adeB gene，and other mechanisms might be associated with decreased susceptibility to tigecycline for MDR-AB clinical isolates.

Key words：Tigecycline；Minimal inhibitory concentration；Efflux pump；Gene expression

随着抗菌药物的广泛使用，多重耐药鲍曼不动杆菌（mul-tidrug-resistant Acinetobacter baumannii，MDR-AB）日趋增多，给临床抗感染治疗带来严峻挑战，亟待寻找新的治疗药物［1］。替加环素（tigecycline）是一类新型静脉注射用半合成甘氨酰环素类抗生素，其作用机制是通过与核糖体30S亚单位结合后抑制细菌的蛋白质合成，具有广谱抗菌活性，成为治疗MDR-AB的新选择。

不同国家和地区的医疗机构中抗生素压力和遗传环境等因素存在差异，MDR-AB菌株对替加环素的敏感性不尽相同，而有关其耐药机制的研究报道还很少。最近有研究显示，MDR-AB对替加环素的敏感性下降，与AdeABC-AdeSR外排泵系统的高表达有关［1］。

基金项目：2010年度国家自然科学基金项目（81000712）

作者简介：何超（1980-），女，博士，研究方向：感染性疾病的分子诊断和耐药机制

通讯作者：谢轶，E-mail：xie_yi_77@

因此，本研究将使用E-test方法测定替加环素对MDR-AB临床分离株的体外活性，运用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和测序确定这些菌株中AdeABC-AdeSR 外排泵系统的分布，并用实时荧光逆转录PCR（reverse tran-scription PCR，RT-PCR）测定adeB基因的表达，为该药的临床应用提供指导，并为进一步深入研究其耐药机制奠定基础。

1材料和方法

1.1菌株MDR-AB临床分离株

从四川大学华西医院住院病人临床标本中分离，并对现有常规治疗鲍曼不动杆菌感染的药物（包括碳青霉烯类和舒巴坦在内的所有β-内酰胺类、氟奎诺酮类、氨基糖苷类）均耐药的菌株。

药敏实验标准菌株：大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853，均来自美国标准菌种保存中心。

1.2主要仪器与试剂

1.2.1仪器lightcycler2.0实时荧光PCR仪（Roche），DNA