沙门氏菌检测方法

*不等于O&H 血清学结果.
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3M Food Safety
沙门氏菌测试片 I
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3M Food Safety
背光后的效果
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3M Food Safety
加入了确认反应片后
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3M Food Safety
沙门氏菌测试片 II
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3M Food Safety
背光后的效果
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3M Food Safety
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3M Food Safety
注意事项
SALX是3M致病菌检测平台的一个组成部分
区别于STX测试片：加入了确认反应片后，推测性阳性菌落的颜色 会变得和非沙门氏菌菌落的颜色一样 — 因此，提前标记！ 确认反应片会使得绿色、蓝色、蓝绿色或黑色菌落的颜色加深 — 因此，提前标记！ 非沙门氏菌表现为蓝色、绿色、蓝绿色或黑色菌落，带或不带黄色 晕圈和/或带有气泡
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3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System （SALX）主要特点
预置备培养基: Petrifilm技术平台 使用方便 无需仪器设备 更加稳定一致的结果 vs. 琼脂培养基干粉 更长的保质期 vs. 琼脂平板 紧凑/可叠放的测试片 & 确认反应片减少废物量 多合一的检测方法：提供推测性及生化确认的阳性结果 检测时间更短 (44-52 hrs) 1步增菌 — 低菌量样品 对所有标记的可疑菌的确认
3M沙门测试片
3压板
观察结果 样品增菌 划线接种
3M沙门确认片
3M沙门培养基 8
3M采样袋
水化好的测试片
3M Food Safety
1 水化测试片
1. 2. 3. 4.
测试片未开封的存放条件是2-8℃，开封后的存放条 件是-20℃~-10℃ 需提前把冻存的测试片在室温下放至至少5Min 将测试片放在平坦且水平的表面上 掀起上层膜，将2mL无菌水、无菌磷酸缓冲液垂直滴 在底层薄膜的中央位置
以便以后分析。最多将测试片在避光和-20℃到-10℃环境下存放72小时。
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沙门氏菌的确认
可推测性的阳性结果: 非沙门氏菌:
红色
暗红色
褐色
[带有黄色晕圈或/和气泡]
蓝色 绿色 蓝绿色 黑色
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以下情况为推测性的沙门氏菌:
1. 若发现有推测性阳性的菌落，加入确认反应片，41.5±1°C培 养4-5小时。 2. 仅观察被标记的菌落颜色变化情况。若菌落颜色变为蓝色，则 该菌落被确认为沙门氏菌。
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仅观察标记好的菌落!
测试片上的其他未标记的菌落不需观察
仅观察菌落颜色的变化! 比如:
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对于新鲜的菠菜样品，二次增菌的培养条件41.5 ± 1°C 24h
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3.接种
1. 10uL（直径3mm）接种环(无菌塑料, 新的或材质平滑的金属) 2. 划线时必须是一满环的增菌液
3. 一步划线
4. 划好线后用手轻轻将上层膜压紧，避免气泡 5. 41.5 ± 1°C 22-26h培养
4-5 hr
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获得结果所需时间 – 3 days 高菌量样品
增菌
At 3:00 PM R-V R10二次增菌 9:00AM-5:00 PM 读取结果 at3:00 PM
测试片at 5:00 PM
Day 1
Day 2
Day 3
获得结果所需时间 – 3 days 低菌量样品
增菌
观察推测性阳性菌落:红色， 暗红色或褐色菌落带有黄色晕 圈或/和气泡
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非沙门氏菌的确认
非沙门氏菌:
蓝色 绿色 蓝绿色
红色、暗红色和褐色 菌落，但不带有黄色 晕圈和气泡
黑色
红色、暗红色和褐色 菌落，但带有紫红色 晕圈
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测试片水化: • 2 mL 反渗透水、无菌水、无菌磷酸缓冲液 • 1小时的凝胶固化时间 • 水化时要在避光条件下进行 培养: • 10uL接种环(无菌塑料, 新的或材质平滑的金属) • 划线时必须是一满环的增菌液 • 分离划线只需1步 • 培养时间 = 24 hrs 2 hrs. • 培养温度 = 41.5 C 1
加入了确认反应片后
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3M Food Safetyod Safety
背光后的效果
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3M Food Safety
加入了确认反应片后
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3M Food Safety
操作要点
增菌: • 只能使用3M沙门氏菌增菌肉汤+3M沙门氏菌增菌补充物 • 一次增菌 = 18-24小时 • 高菌量样品需要二次增菌 = RV[R10]，0.1mL至10mL培养8-24小时 温度= 41.5 C 1
测试片
at 11:00 AM
读取结果
At 5:00 PM
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at 9:00 AM
3M Food Safety
• 通过AOAC ® PTM认证 编号061301
•
•
通过AOAC® OMA 认证
ISO 16140 进行中
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沙门氏菌的检测方案
测试片水化
3M采样袋
食品样品
环境样品
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二次增菌（可选）
二次增菌:高菌量的样品
RV[R10] 限制个别背景菌的生长，比如变形杆菌等。培养时间在该范围内可根据情况自由取舍。
培养基：RV(R10) 15-25℃保存3年 配制方法：26.6g粉末溶解于1L去离子水，加热溶解。分装成 10mL一份，然后在116℃高压灭菌15分钟。 0.1ml增菌液+10mlRV(R10) 对于其他高菌量的样品，二次增菌的培养条件41.5 ± 1°C 8-24h
原料奶 宠物产品的配料
巴氏消毒的蛋类产品
巧克力冰淇凌 宠物食品(干燥) 巴氏消毒奶酪
*According to FDA BAM
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2 样品增菌
1. 称取25g(或其它量) 样品置入到无菌采样袋中 2. 加入225mL(或其它体积) 3M沙门氏菌增菌肉汤（增菌肉汤基 础+补充物）. 3. 彻底均质2 min 4. 41.5 ± 1°C培养18-24h
培养基 干粉 配好的增菌肉汤 保存时间 1年 28天 保存条件 15-25℃ 2-25℃避光
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灭菌前
灭菌后
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注意事项
3M 沙门氏菌增菌肉汤补充物
50mg补充物加到1L灭好菌的增菌肉汤中
补充物的形式 未开封 已开封 水溶液 保存时间 1年 5个月 15天 2-8℃避光 保存条件
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2 样品增菌
高菌量样品Vs低菌量样品
高菌量样品 (>104 CFU/gram)* 水产品 (虾) 未加工的牛肉 水果/蔬菜 (菠菜) 低菌量样品 (<104 CFU/gram)* 巴氏消毒乳制品(牛奶, 奶粉) 加工好的 /冷冻 食品 （鸡块） 环境样品
未加工的禽肉
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4.观察推测性阳性结果
1. 观察推测性阳性菌落:红色，暗红色或褐色菌落（见比色
卡），带有黄色晕圈或/和气泡 2. 用较细的记号笔在测试片的上层膜上标记出推测性阳性的菌
落，至少圈出五个单独的假定阳性沙门氏菌菌落（如果有）
注意：如果从保温箱中取出后1小时内无法分析测试片，请先使用不褪色的记号 笔在上层膜上圈出假定沙门氏菌菌落，然后将测试片放在密封的塑料袋中
颜色变化! 确认为阳性 颜色没有变化! 确认为阴性
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加确认片之前
加确认片之后
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颜色变化! 生化确认的结果---沙门阳性检出!
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生化确认
3M Petrifilm Salmonella Express Method 确认结果在统计学上和 Vitek or API 的结果是一致的。
操作贴士：水化测试片的操作在正常的环境下进行就可以。
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1 水化测试片
3. 轻轻地将上层膜缓慢盖下，避免有气泡产生，切勿使上 层膜直接落下 4. 将扁平压板放在测试片中央位置，轻轻地压按压板的中 心，使稀释液均匀覆盖。请勿在薄膜上滑动压板。 5. 室温避光静置至少1h
室温水化15Min左右，可先观察测试片的颜色，如果水 化后测试片颜色为下图右边红色，则可以继续试验；如 为左边橙色，则说明该测试片无法使用。
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3M Food Safety
操作要点
推测性阳性:

找出红色、暗红色、或褐色、并带有黄色晕圈和/或气泡 的菌落
加确认反应片以前先标记出推测性阳性的菌落

确认:

标记出推测性阳性的菌落后, 加入确认反应片 41.5C 1C下培养4 - 5 hrs.
查看被标记菌落的颜色变化：
蓝绿色、蓝色或黑色，或者菌落周围有蓝色沉淀环绕，则 判为生化确认的沙门氏菌。
3M 沙门氏菌增菌肉汤补充物的水溶液
规格 1.00±0.05g 0.500±0.025g
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无菌蒸馏水量 400ml 200ml
保存时间 15天
保存条件 2-8℃避光
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3M 沙门氏菌增菌肉汤补充物的水溶液与增菌肉汤基础的添加比例
增菌肉汤基础 补充物水溶液 225ml 450ml 675ml 900ml 1000ml 2000ml 5000ml 4.5ml 9.0ml 13.5ml 18.0ml 20.0ml 40.0ml 100.0ml 以增菌肉汤和 补充物水溶液 的保存时间短 的为依据 2-8℃避光 保存时间 保存条件
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检测流程
(所有培养温度：41.5±1°C)
低菌量样品
肉汤基础+ 增菌补充物
18 - 24 hr
高菌量样品
肉汤基础+ 增菌补充物
18 - 24 hr
前增菌
选择性增菌
R-V R10
8 - 24 hr
分离培养
测试片
24±2 hr
测试片
24±2
生化确认
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确认片
4-5 hr
确认片
GB/T 4789.4-2010中沙门氏菌的检测流程：
5.1前增菌
5.2增菌
5.3分离 5.4生化实验 5.5血清学鉴定 3M Petrifilm Salmonella Express Method相当于GB/T4789.4-2010操作步骤5.15.4。如果还需做血清学鉴定，还需要借助其他方法。
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3M Food Safety
(低菌量样品）
测试时间: 40-44 HRS
样品加入到3M沙门氏菌增菌肉汤 + 3M 沙门氏菌增菌补充物 (1:10 稀释)。培养 18-24 hr @ 41.5 ± 1°C (高菌量样品）
水化测试片, 将增菌液划 线至测试片。 培养 24± 2 hr @ 41.5 ± 1°C
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注意事项
培养基：3M 沙门氏菌增菌肉汤基础
特有的培养基外加补充物提供了限制背景菌（如大肠杆菌、大肠菌群、柠檬酸杆菌、气单 胞菌等）生长的选择性，同时促进沙门氏菌的生长。
配制方法：37g粉末溶解于1L去离子水，加热溶解。然后在121℃ 高压灭菌15分钟。 存放环境： 存放在避光、避热和防潮的环境中。
3M Food Safety 3M™ Petrifilm™
Salmonella Express System
3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System （SALX）
3M Food Safety Petrifilm™ 3M™
Salmonella Express System （SALX） 适用于食品和食品加工环境样品增菌后 的快速筛选及生化确认（鉴定）
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3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System （SALX）
产品包括：
1. 3M 沙门氏菌增菌肉汤基础 (SEB) 2. 3M沙门氏菌增菌补充物 (SESUP) 3. 3M Petrifilm沙门氏菌测试片 4. 3M Petrifilm沙门氏菌确认反应 片
绿圈为推测性阳性 黑圈为非沙门氏菌
加入确认反应片以前一定要先标记出推测性阳性的菌落！
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比色卡
推测性阳性
Side 1
非沙门氏菌
Side 2
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3M Food Safety
1. 2. 3.
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红色菌落有黄晕和气泡 红色菌落只有黄晕 非沙门
3M Food Safety
5.加确认片