肺炎支原体抗体金标检测试剂盒作业指导(精品)

肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒作业指导书
1目的
建立肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒作业指导书，确保生产过程处于受控状态。

2范围
适用于肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒相关工序的操作者。

3职责
3.1操作人员应严格执行本作业指导书。

3.2生产主管负责监督检查。

3.3质检部质检员负责抽查执行情况。

4工作内容
4.1生产工艺流程图
※
胶体金
制备
★
胶体
抗胶
体
金反
单克隆体
金应膜
抗体检标
检测
制备进测记
★
肺炎支原体重组抗原的表达
※
NC
膜
处
理
兔抗鼠IgG 抗体制备抗
原
检
测
NC
膜
检
测
★
NC
膜
包
被
抗
体
检
测
质装产
贴切量卡品
分
NC 检检
板条包
反测测
应
膜
检
测
入
库
注：※关键过程★特殊过程
4.2作业内容
4.2.1胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）
氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，
搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。

4.2.2金标抗体（反应膜）制备
以0.1M 碳酸钾溶液调胶体金溶液 pH8.0-9.0→加入抗人 IgM 单抗， 15 分钟后加入
聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。

4.2.3金标抗体反应膜质检
将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反应膜匹配组装成品，同时与
标准成品作如下对照检测：
a)符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；
b)反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）；
c)反应时间：30s～5min。

确认合格后才能转入下一工序。

4.2.4NC 反应膜制备
亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12 小时→用水洗 5 次，每次 20 分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组MOPP抗原和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组肺炎支原体抗原在NC 膜上包被肺炎支原体抗体阳性检测线→用兔抗鼠IgG 抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS 液封闭， H2O 清洗后，室温干燥，备用。

4.2.5NC 反应膜质检
4.2.
5.1常规图形模式检测：将制备好的反应膜按5‰比例抽检，与标准金标抗体反映
膜匹配组装成品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本底，要求图形
规则程度均匀，无遗漏或重复包被。

4.2.
5.2均一性、符合率筛选：按3%比例 /批，随机取样，每张5～ 10 人份，作阴性质控品和肺支阳性血清的阳性质控品检测，无假阳性和假阴性，均一性≥98%
4.2.6反应体系组装
组装材料材料规格（mm）组装方式反应膜（S1）20
无纺布（S2）25，30
吸水纸（S3）30
金标反应膜（S4）10 见图1
双面胶带（S5）29，48
塑料垫板S6 78
单面胶带S7 15
4.2.6.1反应体组装程序：
a)在S6塑料基板上贴双面胶带S5（29，48mm）二条；
b)在S5上贴反应膜S1（20mm），S1上下缘距S6上下缘各29mm；
c)在S6上贴吸水纸S3（30mm），吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与
S5 的上边
缘对齐；
d)在S5下端贴无纺布S2-1，其上缘压住S1下缘1mm；
e)在S2-1上平放金标抗体反应膜S4（10mm）上缘对齐；
f) 在 S4 上平放无纺布 S2-2（ 30mm）上下缘分别S4、S6 对齐；
g) 将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成 4.2mm 测试条，装入干
燥器，待包装。

4.2.6.2成品包装：每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂，附说明书，打批号入库，每批留样100 人份，以备复检．
4.2.7参比品制备
4.2.7.1肺支阳性血清质控品
取临床确诊肺支病人（临床症状明显、肺炎衣原体培养阳性）血清15 份，间接ELISA测定肺炎支原体IgM 抗体阳性， 0D492≥ 0.3，混合血清加防腐剂 ,分装-70℃保存。

4.2.7.2肺衣阴性血清质控品
取健康人血清（体查健康，培养法和间接ELISA 测定肺炎支原体IgM 抗体均阴性，0D492＜0.10）15份，混合血清加防腐剂,分装 -70℃保存。

4.3成品检测
产品技术要求应符合《肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒》产品注册标要求。

4.3.1 外观
4.3.1.1要求
a)检测条：表面应平整、无划伤、开裂、变形及污渍；检测卡各组分附着牢固、
内容齐全；
b)检测卡：外壳应平整，上下盖应均匀合拢，无明显间隙；反应芯试条在外壳
内应附着
牢固；
4.3.1.2检验
在自然光线下，用手感和目力观察方法进行检验。

4.3.2符合率
4.3.2.1阴性符合率
4.3.2.1.1 要求
试剂卡测试肺炎支原体IgM 抗体阴性质控血清10 份，假阳性判断结果不多于1份，符合率应≥ 90%。

4.3.2.1.2测试
a)试剂
1)样品稀释液；
2)测定样品液：肺炎支原体IgM抗体阴性质控血清。

b)测定方法
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阴性质控血清 10份。

测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。

c) 结果
以下结果为合格：检测线不显色，只有对照线显色。

4.3.2.2阳性性符合率
4.3.2.2.1 要求
试剂卡测试肺炎支原体IgM 抗体阳性质控血清10 份，假阴性判断结果不多于1份，符合率应≥ 90%。

4.3.2.2.2测试
a)试剂
1)样品稀释液；
2)测定样品液：肺炎衣原体IgM抗体阳性质控血清。

b) 测定方法
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阳性质控血清 10份。

测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。

c) 结果
以下结果为合格：检测线和对照线均显色。

4.3.3 重复性
4.3.3.1 阴性重复率
4.3.3.1.1 要求
使用试剂盒检测同一份阴性质控血清10次，同一份质控血清的阴性判定结果应基本一致，假阳性判定结果不多于1份，阴性重复率应≥ 90%。

4.3.3.1.2 测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。

4.3.3.2 阳性重复率
4.3.3.2.2 要求
使用试剂盒检测同一份阳性质控血清10次，同一份质控血清的阳性判定结果应基本一致，假阴性判定结果不多于1份，阴性重复率应≥ 90%。

4.3.3.2.2 测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取10μl阳性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。

4.3.4精密性
4.3.4.1要求
每批试剂盒随机抽取10个检测卡样品，用同一份阳性质控血清进行检测，要求各检测卡的显色应均一。

4.3.4.2测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡进行检测。

测定时取10μl 阳性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl 样品稀释液，平放，等待 3～ 5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。

4.3.5稳定性
4.3.
5.1要求
a）在 37 C 条件下加速破坏试验放置12 天，检测卡的符合率和精密度应符
合要求；
b）在有效期后一个月内的留样检测卡的符合率和精密性应符合要求。

4.3.
5.2测定
肺炎支原体IgM金标检测试剂盒成品进行稳定性实验：
测定方法同 4.3.2、 4.3.4。

5相关文件
《肺炎支原体抗体IgM 金标检测试剂盒》产品标准。

6质量记录
6.1《进货检验报告》
6.2《肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒批生产记录》。