毒理学实验 ppt课件

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实验动物安全采血量
动物品种 最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml)
小鼠 大鼠 豚鼠 家兔
0.1 1.0 5.0 10.0
0.3 2.0 10.0 40.0
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2.尿液、粪便收集：代谢笼
（八）动物处死
1. 脊椎脱臼法 2. 断头法 3. 急性大失血法 4. 击打法 5. 麻醉致死法
6.麻醉后急性放血法 7.空气栓塞法 8.化学药物致死法 9.开放性气胸法
健康动物辨认：
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健康动物辨认：外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼 睛明亮，行动迅速、反应灵活，食欲及营养状况良好。
– (1)眼：明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。 – (2)耳，耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。 – (3)鼻：无喷嚏，无浆性粘液分泌物。 – (4)皮肤：无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。 – (5)颈部：要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不
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四、步骤
1. 动物选择 2. 剂量设计：5-8个剂量（一般不设对照组）
1. 最高、高、中、低、最低5个剂量, 2. 中剂量组：100mg/kg，组距1.4
3. 动物称重、编号、标记 4. 受试物配制 5. 灌胃：1ml/100g体重 6. 观察：急性毒性试验原始记录
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5. LD50计算：LD50及95%可信区间
• 每组动物数相等 • 各剂量组组距呈等比级数 • 死亡呈正态分布 • 最低剂量组死亡<20% • 最高剂量组死亡>80% • 死亡不倒置
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二、原理
• 健康动物按体重随机分组一次或多次 经口给药观察中毒特征或死亡剂量-反 应关系求出LD50 毒性分级
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三、材料与试剂
• 动物：昆明种小白鼠 • 器材： • 试剂：敌敌畏，苦味酸
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3、微生物学和寄生虫控制的选择 Ⅰ级：普通动物，开放系统饲养 Ⅱ级：清洁动物，屏障系统饲养 Ⅲ级：SPF动动，屏障/隔离系统饲养 Ⅳ级：无菌动物，隔离系统饲养
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4、个体选择 ① 性别： ② 年龄：急性、慢性
① 以体重估计：组内、组间差异
③ 生理状态：雌--未产未孕，避免妊娠、激 素影响
④ 健康状况：健康动物
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急性毒性、急性毒性分级标准
• 急性毒性：一次或多次接触，短时间产生 的毒性效应，包括一般行为和外观改变， 大体形态改变以及死亡效应等。
• 农药的急性毒性分级：低、中、高、Байду номын сангаас毒
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LD50计算方法
• 改良寇氏法：计算简便，准确率高，常用 • 霍恩法 • 序贯法 • Bliss法
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改良寇氏法要求
（五）动物随机分组：随机数字表
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（六）染毒途径和方法
1. 经口（胃肠道）染毒
① 喂饲：不易挥发、不易水解、无异味、不影响营养 ② 吞咽胶囊： ③ 灌胃：灌前禁食空腹，不饮水 – 小鼠、大鼠或豚鼠：左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动
物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿 咽后壁徐徐插入食管。针插入时应无阻力，若感到阻 力或动物挣扎，应立即停止进针或将针拔出，以免损 伤或穿破食管及误入气管。
应选作实验动物。 – (6)消化道：无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。 – (7)神经系统：无震颤、麻痹。若动物(大鼠、小鼠)出现圆圈动
作或提尾倒置呈圆圈摆应放弃该动物。 – (8)四肢及尾：四肢、趾及尾无红肿及溃疡。
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（二）动物性别鉴定 • (1)大鼠、小鼠：主要依肛门与生殖孔间的距离
区分，间距大者为雄性，小者为雌性。成年雄鼠 卧位可见到辜丸，雌性在腹部可见乳头。 • (2)豚鼠；用一只于抓住豚鼠颈部，另一只手扒 开靠生殖器孔的皮肤，雄性动物在圆孔中露出性 器官的突起，雌性动物则显示三角形间隙，成年 雌性豚鼠胸部有两个乳头。
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2. 经呼吸道染毒
① 静式吸入 ② 动式吸入 ③ 气管内注入
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3. 经皮肤染毒
① 斑贴法（家兔）
① 被毛的去除：剪毛、拔毛、脱毛
② 浸尾法（大、小鼠）
4. 注射染毒：静脉注射、肌肉注射、腹腔注 射、皮下注射、皮内注射
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（七）生物标本采集 1.血液采集：
① 大、小鼠鼠尾采血法 ② 眼眶静脉丛采血法 ③ 腹主动脉或股动(静)脉采血法 ④ 断头采血法 ⑤ 家兔耳缘静脉采血法 ⑥ 心脏采血法
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微核实验动物染毒
• 阴性对照组：生理盐水 • 阳性对照组：环磷酰胺40-60mg/kg • 高剂量组：敌敌畏20mg/kg • 中剂量组：敌敌畏10mg/kg • 低剂量组：敌敌畏5mg/kg
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实验二 急性经口毒性试验
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一、目的 • 掌握LD50 计算方法和急性毒性分级标准 • 熟悉经口灌胃技术 • 了解急性毒性试验的设计原则
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(3)豚鼠：豚鼠胆小易惊，在抓取时要稳、 准、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其 肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一 只手托住臀部即可。
(4)兔：用右手抓住兔颈部的毛皮提起，然 后左手托住其臀部或腹部，让其体重的大 部分重量集中在左手上。注意不要抓取双 耳或抓提腹部。
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（四）实验动物称重、编号、标记 染色法：苦味酸、品红 耳缘孔口标记： 项圈
毒理学实验
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实验一 实验动物的一般操作技术
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一、目的 二、内容 （一）实验动物的选择
1、物种的选择：啮齿类、非啮齿类 基本原则：
① 代谢、生化、毒理学特征与人最接近的 ② 自然寿命不太长的 ③ 易于饲养和实验操作的 ④ 经济且易于获得的
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2、品系的选择：遗传学控制分类
① 近交系：纯品系 ② 杂交群：F1代 ③ 封闭群：5年内，随机交配 ④ 遗传均一性： ⑤ 一种毒物固定使用同种品系
敌敌畏小鼠经口染毒死亡情况
组别
剂量
mg/kg
对数
动物数 死亡数 死亡率 存活率 p·q （n） (只) (p) (q)
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（三）动物抓取 • 正确地抓取固定动物，既不损害动物健康、不影
响观察指标，又防止被动物咬伤 (1)小鼠：先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实
验台上向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和 食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左 手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指 按住后腿即可。
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(2)大鼠：大鼠的抓取基本同小鼠，只是大 鼠比小鼠性情凶猛，不易用袭击方法抓取。 为避免咬伤，可带上帆布或棉纱手套。采 用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳， 余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中。