Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态在子宫内膜样腺癌侵袭转移中的作用及意义

Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态在子宫内膜样腺癌侵

袭转移中的作用及意义

冯振中;武世伍;俞岚;蔡兆根;李楠;吕秀红;陈嘉薇

【摘要】目的探讨子宫内膜样腺癌中Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态(VM)的表达以及与肿瘤侵袭转移的关系.方法采用免疫组化方法,结合组织芯片技术,检

测124例子宫内膜样腺癌、28例不典型增生内膜、35例正常内膜组织中Twist1、VE-cadherin和VM的表达水平,分析三者与临床病理因素的关系及相关性.结果子宫内膜样腺癌组织中Twist1、VE-cadherin和VM的表达率分别为56.5％、

48.4％、16.9％,与正常内膜和不典型增生内膜相比,差异均显著(P＜0.01).Twist1

表达与病理分级、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05).VE-cadherin和VM

与肿瘤肌层浸润和淋巴结转移显著相关(P＜0.01).子宫内膜样腺癌中VE-cadherin 表达分别与Twist1和VM呈正相关趋势(r=0.232,P=0.010;r=0.251,P=0.005).结论 Twist1、VE-cadherin和VM参与子宫内膜样腺癌的发生、发展过程,三者联合检测可能对肿瘤的进展及预后判断有重要意义.

【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》

【年(卷),期】2014(023)005

【总页数】6页(P439-444)

【关键词】子宫内膜癌;Twist1;血管生成拟态;血管上皮钙黏附素

【作者】冯振中;武世伍;俞岚;蔡兆根;李楠;吕秀红;陈嘉薇

【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;

蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学

院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附

属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;上海交通大学附属第一人民

医院病理科,上海200080;上海交通大学附属第一人民医院病理科,上海200080【正文语种】中文

【中图分类】R737.33

子宫内膜样腺癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤之一，侵袭和转移是肿瘤治疗失败、临床预后不良的重要生物学原因［1］，探讨肿瘤侵袭转移的相关分子机制，能够为临床子宫内膜癌的诊疗提供有价值的帮助。

Twist1基因是一种在胚胎发育中起关键调控作用的转录因子，同时具有介导肿瘤

细胞上皮－间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的能力，在

多种人类恶性肿瘤中均有高表达［2，3］。血管生成拟态（vasculogenic mimicry，VM）是新近认识的肿瘤微循环模式，即某些高侵袭性肿瘤细胞通过自

身变形和细胞外基质重塑，直接形成微循环管道，管腔无内皮细胞衬覆，并可与宿主微血管相通［4］。随后的研究发现，VM与恶性肿瘤的侵袭转移和预后不良等

恶性行为密切相关［5］。血管上皮钙粘附素（VE－cadherin）是细胞黏附分子家族中的重要成员，是血管发生及血管内环境稳定过程的重要因素，并直接参与了肿瘤VM的形成和调控［6，7］。

那么，在子宫内膜样腺癌中是否存在VM现象？Twist1、VE－cadherin的过度表达是否和 VM的发生有关？目前关于此类的研究未见报道。本研究采用免疫组化

方法，结合组织芯片技术，检测124例子宫内膜样腺癌、28例不典型内膜增生和35例正常内膜组织中Twist1、VE－cadherin和VM的表达，探讨这些指标和子宫内膜样腺癌侵袭转移的关系，为临床肿瘤预防和靶向治疗提供新的思路和实验基础。

材料和方法

1.研究对象

子宫内膜样腺癌124例，来自上海交通大学附属上海市第一人民医院病理科，2005年1月至2009年9月手术切除并经病理诊断证实标本，患者术前均未接受放疗、化疗，具有完整临床资料。年龄27－81岁，平均年龄57岁。根据2000年FIGO标准，临床分期为101例I－II期，23例III－IV期。根据2003年WHO标准，病理分级为高分化57例，中分化41例，低分化26例。肌层浸润＞50%者40例，≤50%者84例。有淋巴结转者31例，无转移者93例。子宫内膜不典型增生28例（单纯性不典型增生3例，复杂性不典型增生25例）；正常子宫内膜35例（增生期16例，分泌期19例），分别取自妇科活检和子宫平滑肌瘤的内膜组织。

2.方法和试剂

兔抗人多克隆Twist1抗体（工作浓度1∶200，Santa Cruz公司），鼠抗人单克隆 VE－cadherin抗体（工作浓度1∶120，Abcam公司），鼠抗人单克隆CD34抗体（即用型，克隆号 QBEnd／10）、Ultra－Sensitive试剂盒和DAB显色液购自福州迈新生物技术有限公司。过碘酸Schiff（periodicacid－Schiff，PAS）染色液为蚌埠医学院第一附属医院病理科配制。

3.构建组织芯片

选择所需病例存档蜡块，根据HE切片仔细进行形态学观察，确定具有代表性的病变部位并标记，由上海芯超生物有限公司技术支持。

4.免疫组织化学染色

采用SP两步免疫组织化学染色法，操作步骤按试剂盒说明书进行，采用已知阳性片作为对照，以PBS液代替一抗作为空白对照。Twist1和VE－cadherin蛋白检测采用组织芯片结合免疫组化方法，VM检测为便于观察更多病变组织，采用常规切片结合免疫组化方法。

5.CD34和PAS双重染色检测VM［8］

CD34免疫组化染色，DAB显色后，自来水冲洗1min终止显色反应，将切片置

于0.5%高碘酸溶液中氧化5－8min，自来水冲洗2min，再用蒸馏水洗1次，于暗处置于Schiff液中染色10－20min，然后用0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次，

每次1min，自来水冲洗2min；此后依次苏木素浅染细胞核、盐酸酒精分化、返蓝、脱水透明以及中性树胶封片。

6.结果判定

采用双盲法阅片并判定结果，若肿瘤染色不均匀，则取其主要部分进行计数。Twist1蛋白主要定位于细胞核，可伴有胞质着色；VE－cadherin阳性表达于细胞质，呈弥漫性棕色颗粒，也可见于血管内皮细胞连接处，呈棕褐色细线状。判断标准以子宫内膜腺上皮细胞内出现定位明确、染色明显的样本为阳性，判定标准［9］：①阳性细胞率：无着色为0，1－10%为1分，11－50%为2分，51－80%为3分，＞81%为4分；②染色强度：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。为方便数据统计，两者计分相加，＜2分为阴性，≥2分为阳性表达。

7.统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件。计数资料率的比较采用卡方检验或Fisher精确检验，相关关系采用Spearman等级相关分析，检验水准取双侧α＝0.05。

结果