对鞣花酸的抗氧化作用探索

对鞣花酸的抗氧化作用探索
甜茶是蔷薇科悬钩子属植物的一个品种，主产于广西的柳州、桂林、梧州等地区。

甜茶具有祛痰止咳、清热、润肺等功效，广泛用于保健品、食品和化妆品等领域中有关研究表明，鞣花酸具有多种生物活性功能，例如抗氧化功能、抗癌、抗突变性能、抑制人体免疫缺陷病毒（HIV）的增生等；鞣花酸还是一种有效的凝血剂旧，对多种细菌及病毒都有很好的抑制作用，能防止感染抑制溃疡。

除此之外，鞣花酸还具有降压、镇静，预防骨质疏松等多种生理作用¨鞣花酸作为一种新型的药物原料和食品添加剂日益受到人们的重视。

李小萍、贝玉祥、周本宏、王予祺等分别对红树莓果、诃子、石榴皮和蛇莓中的鞣花酸含量进行了测定，其中诃子中鞣花酸含量最高，达到了573mg／kg。

李小萍等发现红树莓果中的鞣花酸提取物具有较强的还原能力。

因此，开展甜茶中鞣花酸的研究，对甜茶植株的化学成分分布、开发甜茶系列产品、甜茶的推广应用具有重大意义。

近年来，甜茶的研究重点均局限于对甜茶素、黄酮苷及其苷元的提取和测定以及甜茶粗体物药理的研究，而关于甜茶中鞣花酸的研究鲜见报道。

因此，试验采用DPPH·法、BHT法和磷钼酸盐法对甜茶中鞣花酸的抗氧化活性进行了研究，以期为以甜茶为原料的保健品、天然抗氧化剂的开发利用提供理论依据。

1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。

甜茶，经鉴定为RubusSuavissmusS.Lee。

1.1.2主要仪器。

722型光栅分光光度计，购自上海分析仪器三厂；
GDC.TQ／ZS／3中试型智能控制连续化多功能超声波提取组件，购自济宁金百特电子有限责任公司；红外光谱仪（5-DX），购自美国Nicolet公司。

1.1.3主要试剂。

甲醇（cP）、蒸馏水、无水Na：SO。

、石油醚（AR）、氯仿（CP）、乙酸乙酯（CP）、二苯代苦味酰自由基（DPPH），购于SIGMA公司；2，6一二叔丁基对钾酚（BHT）、pH=6.6的磷酸缓冲溶液、l％的铁氰化钾水溶液、七钼酸铵、硫酸、磷酸钠，市售；LsA一10大孔吸附树脂，购自西安蓝深交换吸附材料有限责任公司。

1.2方法
1.2.1鞣花酸的制备。

取甜茶根2kg，碾碎后置入40L超声波提取罐，加20L水，加热至80℃，超声提取1h，膜过滤，重复1次，合并滤液，浓缩，滤液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，萃取液用无水NazSO。

脱水，再用旋转蒸发仪回收部分溶剂，放置，乙酸乙酯萃取液得到黄色颗粒结晶，将得到的结晶用碱溶解后，加入酸溶液进行沉淀，经水洗、醇洗后，放入红外干燥仪中干燥，得黄色颗粒结晶化合物A（约2.00g）。

、1.2.2仪器工作条件。

FHR光谱分辨率0.4cm～，光谱范围为4000～400em～，峰峰噪声值<1.24X10～AU。

1.2.3检测方法。

采用KBr压片法。

将固体化合物A研成细粉末，分散在固体介质KBr中，并用压片器压成透明的薄片后测定。

在波数为4000～400em‘1范围分别对鞣花酸对照品（标准样品）和样品A进行扫描。

1.2.4鞣花酸抗氧化试验。

1.2.4.1清除自由基能力的测定。

分别取0.2、0.4、0.5、1.0ml质量浓度为1.0mg／rnl的各样品甲醇溶液，加入到8rnl浓度为0.004％的
DPPH·甲醇溶液中。

水浴28℃恒温，在515nm下迅速测其吸光度，每10min 测定1次直到反应达到平衡。

同时测定DPPH·甲醇溶液的吸光度，作为空白参照。

由数据计算清除率S（％）=（1一A样品／A奉白）×100。

1.2.4.2还原能力的测定。

在10rnl具塞刻度比色管中依次加入
2.5ndpH为6.6的磷酸缓冲溶液，分别取0.1、0.3、O.5111l质量浓度为1.0mg ／ml的各样品甲醇溶液，与2.5IIll浓度为l％的铁氰化钾水溶液混合。

混合物于50℃恒温水浴20nfin，再分别用0.1、0.3、0.5rIll质量浓度为1.0mg ／ml的Bin"甲醇溶液作对比，在700nm下分别测定吸光度。

1.2.4.3总抗氧化性的测定。

在2支10IIll具塞刻度比色管中分别加入1ml质量浓度为0.5mg／ml的鞣花酸甲醇溶液和1.0rIll质量浓度0.5mg／ridBHT，然后分别依次加入1.0IIll浓度为0.6mol／L的H：S0。

水溶液、1.0ml浓度为0.028mol／L的Na，PO。

水溶液和1.0ml浓度为0.004mol／L的（NH。

）。

Mo。

O。

水溶液，最后用蒸馏水定容至5.0ml，混合均匀，于95℃恒温水浴90rain后，取出冷却至室温，以不加鞣花酸体系为空白参比，在695nm波长处测定吸光度A。

2结果与分析
2.1鞣花酸红外光谱分析由图1可知，鞣花酸标样的主要吸收峰有[IR （KBr）／em：3555，1698，1621，1582，1511，1448，1390，1335，1259，1195，1115，1059，922，882，758。

其中3555em‘1为O—H伸缩振动频率，1698em。

为C=O的伸缩振动频率，1621、1582，1511、1448是苯的C=C伸缩振动峰。

样品A的主要吸收峰[IR（KBr）／em。

3559，1695，1618，1582，1511，
1451，1395，1346，1257，1195，1111，1056，922，882，757。

样品A与鞣花酸对照品的红外谱图谱峰的重合性较好，各峰波数基本一致，并与文献相符¨3|。

因此，可以判定制备得到的黄色颗粒结晶物A为鞣花酸。

2.2鞣花酸抗氧化试验
2.2.1清除自由基能力的测定。

在清除反应中，鞣花酸还原稳定的DPPH·自由基，是由于鞣花酸提供氢，把无水甲醇中的DPPH·还原成非自由基的形式，使溶液由紫色变成黄色，因此通过测定吸光度减弱的程度，可评价该自由基清除剂的清除活性Ⅲ1。

由表1可知，鞣花酸清除DPPH·效果明显，速度快，用量少，清除8mlP （DPPH·）=0.004％的DPPH.'仅需0.04～0.05mg。

说明鞣花酸是清除自由基的有效成分之一。

2.2.2还原能力的测定。

还原性通常表现为贡献出氢原子以打破自由基链而产生抗氧化作用，通过将Fe3+转化成Fe2+后，吸光度的改变来测量还原能力m1。

由表2可知，鞣花酸的还原能力随着浓度的增大而变强，与BI-rr相比，浓度低时稍逊于Bill"，达到0.5叫ITll时，鞣花酸有反超的趋势。

2.2.3总抗氧化性的测定。

在酸性条件下，具有抗氧化性的物质能把Mo”还原成Mo“，然后磷酸与Mo“形成绿色的磷钼酸配合物，在695nm处测其吸光度，物质的抗氧化性越强，则体系的吸收越强，吸光度也越高Ⅲ1。

由表3可知，不同浓度的鞣花酸总抗氧化活性随着浓度及加入时间的增大而增大，总体来看，总抗氧化活性大小变化趋势。

3结论与讨论
（1）鞣花酸清除自由基的能力很强，还原能力和总抗氧化性浓度低时稍逊于BHT，当浓度达到1.2 mg／ml时，有反超BHT的趋势。

（2）从甜茶中分离得到的纯鞣花酸有很强的清除自由基作用，说明鞣花酸是甜茶中有效的抗氧化成分。

（3）鞣花酸是一种比较好的纯天然抗氧化剂，可以安全使用，具有开发利用意义。