多重耐药大肠埃希菌复方新诺明耐药相关基因研究

关键词: 大肠埃希菌; 复方新诺明; 耐药 中图分类号: R 378121; Q 781 文献标志码: A 文章编号: 167127414 ( 2008) 052042202
Study on the Genes of S M Zco Res istance in M ulti- drug- res istan t Stra in s of E scher ich ia coli
敏感株数 (% )
0 ( 0) 0 ( 0) 0 ( 0) 13 ( 65) 0 ( 0) 0 ( 0) 0 ( 0) 10 ( 10) 3 ( 15) 4 ( 20) 19 ( 95) 19 ( 95) 20 ( 100) 4 ( 20) 14 ( 70) 1 ( 5) 9 ( 45) 2 ( 10)
2007 年 12 月 10 日之前已在w w w . ncbi. n lm . n ih. g ov nucleotid e 登
录的 su l1, dfrA 1, dfrA 5, dfrA 12, dfrA 17 基因序列的保守区域完成 设计, 特此致谢! )
参考文献:
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的模板液, - 20 ℃冰箱保存备用。
表 1 20 株 ECO 菌 18 种抗菌药物的敏感性 纸片浓度 ( Λg)
10 100 30 30 30 30 75 30 30 30 10 100 10 75 75 10 30 5 30 25
抗菌药物 氨苄西林 哌拉西林 头孢噻吩 头孢西丁 头孢曲松 头孢噻肟 头孢哌酮 头孢他啶 头孢吡肟 氨曲南 亚胺培南 哌拉西林 他唑巴坦 头孢哌酮 舒巴坦 庆大霉素 阿米卡星 环丙沙星 氯霉素 复方新诺明
SU N H a i2 p ing, L I N N ing ( F irst H osp ita l of H ua ian C ity , J iang su H ua ian 223300, C h ina )
Abstract: O bjective: To investiga te m echan ism s of SM Zco resistance in m u lti2drug 2resistan t stra in s of E scherich ia coli. M ethods T he genes ( su l1, dfrA 1, dfrA 5, dfrA 12 and dfrA 17) of SM Zco resistance w ere detected by po lym era se cha in re2 action (PCR ). Results In 20 stra in s, su l1, dfrA 1, dfrA 12, dfrA 172 po sitive ra te w a s 90% ( 18 20 ) , 10% ( 2 20 ) , 5% ( 1 20 ) and 75% ( 15 20) resp ectively. A to ta l of 18 detection su l and o r dfrA gene ( 90% ). Conclusion T he SM Zco resistance m echan ism s of the ECO a re su l1 and dfrA rela ted. T he SM Zco resistance p heno typ e and geno typ e con sisten t. Keywords: E scherich ia coli; SM Zco; resistance
1. 5 基因检测 均为 PCR 法。靶基因引物序列和 目的产物长度见表 2。 各种靶基因 PCR 扩增体系均为: 每反应体系 P 1 , P 2 引物各 0. 5 Λ mm o l L , dN T P s 各 200 mm o l L , KC l 10 mm o l L , (N H 4 ) 2 SO 4 8 mm o l L ,M gC l2 2 mm o l L , T ris2 HC l (pH 9. 0 ) 10 mm o l L , N P 40 0. 5% , B SA 0. 02 g d l, T aq DNA po l 1U 。 总反应体 积 20 Λl ( 其中模板液 5 Λl) 。热循环参数均为: 93 ℃
Ξ 作者简介: 孙海平 (1954- ) , 女, 大专, 副主任检验师, 主要从事医学微生物检验与质量控制工作。 通讯作者: 林 宁 (1969- ) , 男, 学士, 副主任检验师, 江苏省医学会检验分会会员, 科主任, 主要从事医学检验工作。
现代检验医学杂志 第 23 卷 第 5 期 2008 年 9 月 J M od L ab M ed, V o l . 23, N o. 5, Sep te. 2008
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现代检验医学杂志 第 23 卷 第 5 期 2008 年 9 月 J M od L ab M ed, V o l . 23, N o. 5, Sep te. 2008
Ξ
多重耐药大肠埃希菌复方新诺明耐药相关基因研究
孙海平, 林 宁 ( 淮安市第一人民医院, 江苏淮安 223300)
摘 要: 目的 了解多重耐药大肠埃希菌 ( ECO ) 对复方新诺明耐药机制。方法 采用PCR 检测 20 株多重耐药ECO 菌复方 新诺明耐药基因 ( su l1, dfrA 1, dfrA 5, dfrA 12, dfrA 17) 。 结果 su l1, dfrA 1, dfrA 12, dfrA 17 基因阳性率分别为90% ( 18 20) , 10% ( 2 20) , 5% ( 1 20) , 75% ( 15 20) , 未检出dfrA 5 基因。 共有 18 株检出 su l 和 或 dfrA 基因 ( 90% ) 。 结论 本组多重耐 药 ECO 菌复方新诺明耐药与携带 su l1, dfrA 基因相关, 复方新诺明耐药表型与基因型相符。
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预变性 2 m in, 然后 93 ℃ 30 s→55 ℃ 30 s→72 ℃ 60 s, 循环 35 周期, 最后一个 72 ℃延长至 5 m in。扩 增产物做 2 g d l 琼脂糖凝胶电泳, 紫外凝胶电泳成 像仪下观察, 并记录结果。 耐药基因检测试剂盒、 靶 基因 PCR 引物序列和阳性对照DNA 由无锡市克 隆遗传技术研究所提供。
中敏株数 (% )
0 ( 0) 0 ( 0) 0 ( 0) 6 ( 30) 0 ( 0) 0 ( 0) 0 ( 0) 1 ( 5) 0 ( 0) 3 ( 15) 0 ( 0) 0 ( 0) 0 ( 0) 0 ( 0) 1 ( 5) 0 ( 0数 (% )
20 ( 100) 20 ( 100) 20 ( 100) 1 ( 5) 20 ( 100) 20 ( 100) 20 ( 100) 9 ( 45) 17 ( 85) 13 ( 65) 1 ( 5) 1 ( 5) 0 ( 0) 16 ( 65) 5 ( 25) 19 ( 95) 8 ( 40) 17 ( 85)
大肠埃希菌 ( E scherich ia coli, ECO ) 是院内感 染常见菌种, 院内感染 ECO 菌对常用抗菌药物出 现多重耐药性。有关ECO 菌耐药机制研究, 国内报 道Β 2内酰胺类耐药机制较多, 而复方新诺明耐药相 关基因研究报道鲜见。 为了解淮安一院 ECO 菌临 床分离多重耐药株复方新诺明耐药相关基因存在 状况, 我们对 20 株多重耐药 ECO 菌进行了复方新 诺 明 耐 药 相 关 基 因2su l1, dfrA 1, dfrA 5, dfrA 12, dfrA 17 检测, 现报道如下。 1 材料与方法 1. 1 菌株来源 20 株 ECO 菌均分离自 2007 年 1 月 ～ 7 月间淮安一院住院病人标本。标本来源分别 为尿液 7 份、 痰液 5 份、 血液 5 份、 脓液 3 份。病人年 龄 2～ 75 岁, 男 7 例、 女 13 例。 全部菌株均使用 V IT EK 细菌鉴定仪鉴定菌种。 标准菌株为大肠埃 希菌A TCC25922。 1. 2 抗菌药物敏感性试验 为 K 2 B 法测定 18 种 抗菌药物的敏感性。根据美国CL S I2006 年版要求 进行敏感性判断, 其中头孢哌酮 舒巴坦敏感性判 别参照头孢哌酮。20 株 ECO 菌临床分离多重耐药 株 18 种抗菌药物的敏感性见表 1。 1. 4 细菌处理 挑纯培养菌落置入 0. 5 m l 离心 管内 ( 内预置 200 ng m l 蛋白酶 K 溶液 200 Λl) , 56 ℃水浴2 h, 改95 ℃水浴10 m in, 加入Chelex 2100 40 Λl, 离心 ( 15 000 r m in ) 30 s。上清液即为基因检测
表 2 靶基因 PCR 引物序列及产物长度 产物长度
300 bp 480 bp 300 bp 498 bp 475 bp P 1: TA GCGA GGGCTTTACTAA GC P 2:A TTCA GAA TGCCGAACACCG P 1: TTGTGAAACTA TCACTAA TGGTA G P 2: CTTGTTAACCCTTTTGCCA GA P 1: TCCACACA TACCCTGGTCCG P 2:A TCGTCGA TA TA TGGA GCGTA P 1:A TGAACTCGGAA TCA GTACGC P 2: TTA GCCGTTTCGACGCGCA T P 1: TTGAAAA TA TTA TTGA TTTCTGCA GTG P 2: GTTA GCCTTTTTTCCAAA TCTGGTA TG ) 基因名称 引物序列 ( 5’ →3’ sul1 dfrA 1 dfrA 5 dfrA 12 dfrA 17
抗菌敷料[ 8, 9 ] , 氯己定2磺胺银涂布导管常用做预防 [ 10 ] 导管留置性血行感染 (CR 2 B S I) 。 但细菌 su l1, dfrA 基因携带率高, 预防作用需重新评估。 复方新诺明目前在临床并非常用药, 耐药性如 此高其原因值得深究。
( PCR 引物由无锡市克隆遗传技术研究所糜祖煌老师根据