肠道病毒71型灭活疫苗ppt课件

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EV71 疫苗除能诱导中和抗体外， 还能诱导细胞免疫应答，其也具 有免疫保护作用。
肠道病毒 71 型疫苗分类
全病毒灭活疫苗 减毒活疫苗
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基因工程疫苗 病毒样颗粒( VLPs)疫苗 合成肽疫苗
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生产工艺成熟， 具有良好的免疫原性及安全 性， 众多研究证明灭活 EV71 病毒疫苗较其他形式 疫苗， 如 VP1 亚单位疫苗、 DNA 疫苗、 VLP 疫苗 有更好的免疫效果， 是 EV71 疫苗发展的主要类型。 目前进入临床研究的 5 株 EV71 疫苗均为灭活疫苗， 而临床试验结果表明这些疫苗均有较好的免疫原 性及安全性。（2014）
EV71简介
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EV71疫苗可行性
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人血浆中含有的中和抗体可在细胞基质上中和不同的 EV71。可减少或消除毒株攻击乳鼠后的致病及死亡 现象，而在毒株攻击乳鼠的同时或其后限定的时间内 注射含 EV71 中和抗体的人血浆，可起到保护乳鼠的 作用
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EV71 感染或疫苗免疫动物 后产生的抗体具有病毒中 和活性；中和抗体在体外 与 EV71 中和后，可减少 或消除毒株攻击乳鼠后的 致病性；
ｒｏ细胞后，收获病毒培养液，经超滤浓缩、
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凝胶过滤、离子交换层析纯化、甲醛灭活，吸 附氢氧化铝佐剂后，制备 ＥＶ7１灭活疫苗成
品。
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ＥＶ７１灭活疫苗制备一般流程
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病毒液的灭活收获病毒液按 １∶４０００（Ｖ
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／Ｖ）加入福尔马林，３７ ℃灭活，并每间 隔2ｈ取样，采用微量滴定法进行感染性滴度
检测以观察其灭活效果。
CAMS 则对 12 000 名 6 ～ 71 月龄的婴儿和儿童 随机接种了 100 U 疫苗或 安慰剂，疫苗也显示出了 良好的安全性和免疫原性， 但具体信息不详
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ＳＤＳ －ＰＡＧＥ 分 析
02 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分 析
03 ＨＰＬＣ 检测
04 将纯化后的产品进行灭活疫 苗成品的制备 .
肠道病毒 71 型灭活疫苗 分离纯化方法
膜分离技术
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超速离心
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凝胶过滤层析（ gel filtration chromatography，GF ）
疫苗纯度控制方面
在疫苗纯度控制上， 高效液相色谱法 （ＨＰＬ Ｃ）规定颗粒峰面积不低于 ９５．０％，疫苗动物效力 统一修定为以１针后半数有 效量 （ＥＤ５０）作 为 效 力 指 标， 保证了疫苗生产 的一致性和有效性；
标准品方面
中国食品药品检定研究院 （中检院）联合３家企业已完 成了疫苗中和抗体检测标准品和疫苗抗原定量标 准品的 研制（２０１０国生标字００２３、００２４） 。正在 开展的疫苗标准研究 包括：比 活 一 致 性 标 准，Ｖｅ ｒｏ细 胞 残 余ＤNＡ标准等；开展的疫苗标准品研究 包括疫苗效力标准品和冻干标准中和抗体检测株等
目前， 亚洲地区进入临床 试验阶段的灭活疫苗有 5 家( 其中 3 家来自中国大陆， 另外 2 家分别来自我国台 湾和新加坡) ，他们采用的 病毒株、细胞系、 培养技 术和免疫佐剂有所不同( 表 1)
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Vigoo 以 160、 320和 640 U 剂量 加以氢氧化铝佐剂的福尔马林灭活疫 苗随机接种包括 12 ～ 36 月龄儿童 和 6 ～ 11 月龄婴儿在内的 12 000 名受试者。结果显示，疫苗仍然具有 较好的疫苗效能， 可使约 90% 的受 试者能抵御 HFMD，80% 的抵御疱 疹性咽峡炎或相关神经症状。
Enterovirus type 71 inactivated vaccine
课程：生物技术制药 班级：2013生技一班
肠道病毒71 型灭活疫苗
刘雨桐
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EV71图片
肠道病毒 71 型( enterovirus 71， EV71) 为单股正链 ＲNA病 毒，是小 ＲNA 病 毒 科 肠 道 病 毒 属 中 的 重 要 成 员 之 一。EV71 基因组由 7400 多个核苷酸构成， 包含一个开放 读码框，编码大约 2200 个氨基酸的多聚蛋白。该多聚蛋 白可被进一步水解成 P1、 P2 和 P3 三个前体蛋白，P1 前 体蛋白编码VP1、 VP2、 VP3 和 VP4 四种结构蛋白，P2、 P3 前体蛋白编码 7种非结构蛋白( 2A ～ 2C 和 3A ～ 3D) EV71 包括 A、 B 和C 3 种基因型，11 个基因亚型， 每种亚 型感染均可引起手足口病( hand， foot and mouth disease， HFMD
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北京微谷生物医药有限公
司( Vigoo) 、 中国科兴生 物制品有限公司( Inovac) 和中国医学科学院
( CAMS) 所研制的疫苗在 2013 年已完成了临床Ⅲ 期试验， 而我国台湾国家 卫生研究院( NHＲI) 和新 加坡Inviragen公司研制的 疫苗正在进行临床Ⅰ期试 验( 表 2) 。
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ＥＶ７１灭活疫苗两种类型
二倍体细胞疫苗生产工艺：ＥＶ７１疫苗株
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ＦＹ －２３Ｋ－Ｂ株在人二倍体细胞 （ＫＭ Ｂ１７株）上适应传代，收获病毒液，经灭活、
浓缩、层析过滤，吸附氢氧化铝佐剂后，制备
成为肠道病毒７１ 型灭活疫苗成品。
Ｖｅｒｏ细胞疫苗生产工艺：疫苗株ＥＶ７１
ＡＨ－ＦＹ７ＶＰ５株或Ｈ０７株感染 Ｖｅ
ＥＶ７１病 毒 液 的 灭 活
病毒微量滴定法：将灭活后的病毒液按１０
倍梯度稀释，以 １００μ ｌ／孔置于９６孔
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平底细胞培养板，每个稀释度接种８孔， 每 孔按 １×１０４细胞／１００μｌ培养液加入
Ｖｅｒｏ细胞，３、７ｄ时观察记录病变，超
过５０％细胞病变孔判为病变阳性
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EV71病毒的纯化、检测及制备
离子交换层析（ ion-exchange chromatography，IEC ）
疏水相互作用层析（ hydrophobic interaction chromatography，HIC）
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疫苗标准来自百度文库面
国家质量控制和审评部门结 合2010版 《 中华人民共和 国药典》 和修订企业注册 标准中对预防性疫苗的要求， 对申报临床试验的灭活疫 苗 毒 株、原 液 和 成 品 标 准 进 行 规 范 和 统一。对 种子库要求 疫 苗 主 要 保 护 区 ＶＰ１ 氨 基 酸 序列 在三级种子批均保持一致；