柱色谱法分离

5
三、装置图
溶剂 石英砂
Biblioteka Baidu
氧化铝 砂芯
柱色谱装置
6
四、操作规程
收集黄色产物于一已知重量烧瓶中
7
8
五、操作要点
1 、 色谱柱一定要干燥 ， 若潮湿可用吹风机吹干或用无 色谱柱一定要干燥， 水有机溶剂（甘油等）清洗。 水有机溶剂（甘油等）清洗。 2 、 装柱要紧密均匀 ， 无裂缝 ， 无气泡 ， 是分离效果好 装柱要紧密均匀， 无裂缝， 无气泡， 坏的关键。但装填时过分敲击， 坏的关键。但装填时过分敲击，又会太紧密而流速 太慢。 太慢。 3 、 加入砂子的目的是在加料时不致把吸附剂冲起 ， 而 加入砂子的目的是在加料时不致把吸附剂冲起， 影响分离效果。 影响分离效果。
9
4、在整个洗脱过程中，为了保持色谱柱的均一性，应 在整个洗脱过程中，为了保持色谱柱的均一性，
使柱中洗脱剂液面始终保持不低于石英砂面。 使柱中洗脱剂液面始终保持不低于石英砂面。否则 柱中溶剂流干时，就会使柱身干裂， 柱中溶剂流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显 色的均一性。 色的均一性。 5、 最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。 最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。 6、 可以每次倒入10ml洗脱剂进行洗脱。 可以每次倒入10ml洗脱剂进行洗脱。
10
实验十、 实验十、柱色谱法分离
柱色谱的原理跟薄层色谱、 纸色谱、 柱色谱的原理跟薄层色谱 、 纸色谱 、 气相色谱及高 效液相色谱等一样， 效液相色谱等一样，即是利用混合物中各组分在某一物质 中的吸附或溶解性能（即分配） 中的吸附或溶解性能（即分配）的不同或其它亲和作用性 能的差异，使混合物的溶液流经该种物质， 能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸 附或分配等作用，从而将组分分开。 附或分配等作用，从而将组分分开。流动的混合物称为流 动相，固定的物质称为固定相。 动相，固定的物质称为固定相。
4
一、 实验目的 1、了解掌握柱色谱原理和方法 2、进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。 进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。 二、试剂
5g氧化铝，自制乙酰二茂铁（溶于1.5ml正己烷）， 氧化铝，自制乙酰二茂铁（溶于1 ml正己烷） 石英砂。洗脱剂：① 正己烷， 石英砂。洗脱剂：① 正己烷，②1 ：1=二氯甲烷：正己 烷，③ 9 ：1=二氯甲烷：正己烷，④ 9 ：1=二氯甲烷： 二氯甲烷：正己烷， 甲醇。 甲醇。
1
柱色谱（柱上层析） 柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱 色谱两类。吸附柱色谱常用氧化铝和硅胶作固定相。 色谱两类 。吸附柱色谱常用氧化铝和硅胶作固定相。在 分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂， 分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以 吸收较大量的液体作固定相， 吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作 用。 吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大， 吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大，经过活 化的多孔性或粉状固体吸附剂。 化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离的混合物溶液流 过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。 过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂 流下时，由于不同化合物吸附能力不同， 流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度 也不同，于是形成了不同层次， 也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按 对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带， 对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时
3
化合物的吸附性与它们的极性成正比。 色层的展开首先使用极性较小的溶剂， 色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱 附的组分分离。 附的组分分离 。然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗 脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。 脱剂 ，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。 所用 溶剂必须纯粹、 干燥 。 溶剂必须纯粹 、 干燥。 吸附剂用量为被分离样品量的 30~40倍 需要时可增至100倍 柱高与直径之比是75： 30~40倍，需要时可增至100倍。柱高与直径之比是75： 1。（利用相似相溶原理） 利用相似相溶原理） 本实验采用干法装柱。 本实验采用干法装柱。
2
已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或者将柱吸干， 已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或者将柱吸干， 挤出后按色带分割开， 挤出后按色带分割开，在用溶剂将各色带中的溶质萃取出 来。对于柱上不显色的化合物分离时，可用紫外光照射后 对于柱上不显色的化合物分离时， 所呈现的荧光来检查，或在用溶剂洗脱时， 所呈现的荧光来检查，或在用溶剂洗脱时，分别收集洗脱 液逐个加以鉴定。 液逐个加以鉴定。 常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、 氧化镁、 常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、 氧化镁 、碳酸钙和 活性炭等，一般要经过纯化和活性处理。颗粒大小均匀， 活性炭等，一般要经过纯化和活性处理。颗粒大小均匀， 粒小，表面积大吸附能力就高，但过小，溶剂流速太慢。 粒小，表面积大吸附能力就高，但过小，溶剂流速太慢。 氧化铝有：酸性PH为 氧化铝有：酸性PH为4，中性PH=7.5，碱性PH=10，3种， 中性PH=7 碱性PH=10， 大多数吸附剂都能强烈吸水，使活性降低， 大多数吸附剂都能强烈吸水，使活性降低，通常用加热方 法使吸附剂活化。活性等级可用勃劳克曼标准测定法， 法使吸附剂活化。活性等级可用勃劳克曼标准测定法，分 五级。 级活性最高， 级吸附力最弱。 五级。I级活性最高，V级吸附力最弱。