微生物学与免疫学实验课PPT课件
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玻片凝集反应：定性试验，常用于已知抗体来鉴 定未知抗原。
试管凝集反应：定性和半定量试验，常用于已知 抗原来检测血清中的相应的特异抗体及其含量。
直接凝集反应
颗粒性抗原 抗体
可见的凝集块
玻片凝集反应－ABO血型鉴定(学生操作）
ABO血型系统是人类最常见和最重要的血 型系统，含A、B、H抗原。根据红细胞表面 所含抗原命名，红细胞膜上含A抗原者为A 型血；含B抗原者为B型血；同时含A、B抗 原者为AB型血；不含A及B抗原者为O型血。
2．加样：于中央孔加入AFP抗体，2、5 孔加 入待测的样品，第1,4孔加AFP抗原作阳性 对照，第3、6孔加入生理盐水作对照。用 移液器加样，均为50微升。
3．将平板放入置37℃温箱中，24 小时后取 出观察结果。
1,4: 阳性对照 3,6： 阴性 7： AFP抗体 2,5：待检血清
注意事项
微生物学与免疫学实验课
实验内容
一、凝集试验 人类ABO血型鉴定
二、沉淀试验 双向扩散
三、普通光学显微镜（油镜）的使用和维护 四、大小吞噬试验 五、E花环试验 六、淋转试验
一、经典的血清学反应－凝集反应
凝集反应－颗粒性抗原（细菌和红细胞等），当 与相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下， 可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应。
（二）油镜观察
使用油镜按下列步骤操作： 1、在低倍镜下选好视野后，调至视野中心，用油镜
观察。先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台 下降）约2cm，并将高倍镜转出。 2、在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 3、从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升， （或镜筒下降），使油浸物镜浸入香柏油中，使 镜头几乎与标本接触。
二、经典的血清学反应－沉淀反应
沉淀反应（precipitation）——一种血清学 反应。可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量 电介质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见 的沉淀物。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白 质、类脂等。
沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、 絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。
环状沉淀反应 － 主要用于抗原的定性试 验。如炭疽的诊断（Ascoli氏试验）。
Ａ型人
领袖欲高，擅争斗、有能力达到既定的目标， 他们坚信自己的力量，在感到强烈嫉妒和过分自 负时极易冲动而不能自制。自杀概率较高。 在统计上：德、日民族的血型以Ａ型人居多。 Ａ型者一般都具有双重性格，一方面心思细密， 极力压抑自己，不伤害别人，积极服务别人；但 另一方面又无法信任别人。 Ａ型血人非常注意修饰外观，对新事物最感 兴趣关心和敏感，所以说总是站立在时代尖端上。 交友上，Ａ型血，一旦成为你的知心朋友， 就会对你特别照顾和讲信用。
4、从接目镜内观察，上调聚光器，使光线充分照明。 用粗调节旋钮将载物台徐徐下降（或镜筒上升），当出 现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜 已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复 上述操作。 5、观察完毕。上升镜筒转动物镜转换器，使油镜物镜 偏位。用干净擦镜纸沾二甲苯擦去镜头上的油迹，最后 再用擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯（注意向一个方 向擦拭） 。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。
α N.A=n.sin
2
n—物镜与标本之间的介质析射率 α—物镜的镜口角：指从物镜光轴上的物点发出 的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度。 空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47， 香柏油为1.52。
分辨力
D=λ/2N.A. 可见光的波长为0.4—0.7微米，平均波长 为0.55微米 。 （1）减低波长； （2）增大折射率； （3）加大镜口角来提高分辨力。
ＡＢ型人
为数极少，科研人员知之不详。他们的性格还 是个未解之谜。
一般来说ＡＢ型兼具有Ａ和Ｂ型人的气质特征， 秘以在气质方面不统一，缺少一贯性，也就是在 性格方面充满矛盾，易怒、烦躁。但他对事物皆 有客观的看法，凡事要求合理化。
ＡＢ型人经常擅于讥讽，多喜欢交际活动， 但也厌恶攀附权贵式的合理化。
ＡＢ型人内心对人的喜恶表现得很强烈，却 绝不会形之于色。
抗A
抗B
血型鉴定结果
＋
－
A型
－
＋
B型
＋源自文库
＋
AB型
－
－
O型
中国人的血型比例
A型血型：28%， B型血型：24%， O型血型：41%， AB型血型：7%
Ｏ型血人
性格稳重、办事有分寸、富于正义感。美中不 足的是有时性情急躁，处理事务犹豫。 根据统计欧美人的血型为Ｏ型居多。一般普遍 性而言，Ｏ型血人皆具有强烈的自信心。意志坚 决，同时兼有罗曼蒂克和重视现实的双重性格， 但经常一遇到麻烦，他是可冲动去解决而不会后 悔自己的所作所为。
实验步骤
1先用碘酒，再用酒精消毒手指，待酒精干后用一 次性采血针扎手指。
2采血，取一大滴血滴加到0.5ml的生理盐水中，混 匀制成红细胞悬液。
3 滴加一滴抗A，抗B到干净的玻片上。 4 用毛细吸管滴加一滴血悬液到抗A和抗B中。 5 边轻摇边观察有无凝集的小血块出现，有记作
（＋），呈均匀浑浊，无凝集血块，测为阴性， 记作（－）。
Ｂ型血人
平静、认真、耐心、心地善良、多愁善感。有 时他们也固执，精神紧张。 东西方人最大的差别在于Ｂ型血人的多少，亚 洲Ｂ型人数位居全球人之冠。 Ｂ型血人淡泊，乐天，乍看时让人觉得冷漠 且不太有礼貌，其实Ｂ型人向来大而化之，不注 重交际手腕，属于个性爽朗、开门见山型。他对 人有恳切，有深深的人情味，非常喜欢热闹。 Ｂ型血人自我肯定意识很强，所以常常喜欢 推翻别人的意见，虽然他往往是并无恶意。
1 加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线 的形成。
2 反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解 离而导致假阴性、不出现或不清楚。
三、 油镜的使用及细菌形态的观察
（一）显微镜的构造
机械部分： 镜座、镜筒、物镜转换 器、载物台、推动器、粗动螺旋、 微动螺旋等
光学部分：聚光器、物镜、目镜
数值孔径
也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A， 它与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比，与 镜象亮度的平方根成正比。
絮状沉淀反应 － 如诊断梅毒的康氏反应。
琼脂扩散试验 － 利用可溶性抗原与抗体在 半固体琼脂内进行扩散，若抗原与抗体对应， 并且比例适当，就会出现白色沉淀线。
可分为单向琼脂扩散反应和双向琼脂扩 散反应。
双向琼脂扩散试验
双向琼脂扩散反应（学生操作）
1．琼脂平板的制备：取已溶化的盐水琼脂 10ml倾注于直径6cm的平板。待琼脂凝固后， 用打孔器按下图 打孔。
试管凝集反应：定性和半定量试验，常用于已知 抗原来检测血清中的相应的特异抗体及其含量。
直接凝集反应
颗粒性抗原 抗体
可见的凝集块
玻片凝集反应－ABO血型鉴定(学生操作）
ABO血型系统是人类最常见和最重要的血 型系统，含A、B、H抗原。根据红细胞表面 所含抗原命名，红细胞膜上含A抗原者为A 型血；含B抗原者为B型血；同时含A、B抗 原者为AB型血；不含A及B抗原者为O型血。
2．加样：于中央孔加入AFP抗体，2、5 孔加 入待测的样品，第1,4孔加AFP抗原作阳性 对照，第3、6孔加入生理盐水作对照。用 移液器加样，均为50微升。
3．将平板放入置37℃温箱中，24 小时后取 出观察结果。
1,4: 阳性对照 3,6： 阴性 7： AFP抗体 2,5：待检血清
注意事项
微生物学与免疫学实验课
实验内容
一、凝集试验 人类ABO血型鉴定
二、沉淀试验 双向扩散
三、普通光学显微镜（油镜）的使用和维护 四、大小吞噬试验 五、E花环试验 六、淋转试验
一、经典的血清学反应－凝集反应
凝集反应－颗粒性抗原（细菌和红细胞等），当 与相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下， 可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应。
（二）油镜观察
使用油镜按下列步骤操作： 1、在低倍镜下选好视野后，调至视野中心，用油镜
观察。先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台 下降）约2cm，并将高倍镜转出。 2、在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 3、从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升， （或镜筒下降），使油浸物镜浸入香柏油中，使 镜头几乎与标本接触。
二、经典的血清学反应－沉淀反应
沉淀反应（precipitation）——一种血清学 反应。可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量 电介质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见 的沉淀物。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白 质、类脂等。
沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、 絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。
环状沉淀反应 － 主要用于抗原的定性试 验。如炭疽的诊断（Ascoli氏试验）。
Ａ型人
领袖欲高，擅争斗、有能力达到既定的目标， 他们坚信自己的力量，在感到强烈嫉妒和过分自 负时极易冲动而不能自制。自杀概率较高。 在统计上：德、日民族的血型以Ａ型人居多。 Ａ型者一般都具有双重性格，一方面心思细密， 极力压抑自己，不伤害别人，积极服务别人；但 另一方面又无法信任别人。 Ａ型血人非常注意修饰外观，对新事物最感 兴趣关心和敏感，所以说总是站立在时代尖端上。 交友上，Ａ型血，一旦成为你的知心朋友， 就会对你特别照顾和讲信用。
4、从接目镜内观察，上调聚光器，使光线充分照明。 用粗调节旋钮将载物台徐徐下降（或镜筒上升），当出 现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜 已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复 上述操作。 5、观察完毕。上升镜筒转动物镜转换器，使油镜物镜 偏位。用干净擦镜纸沾二甲苯擦去镜头上的油迹，最后 再用擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯（注意向一个方 向擦拭） 。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。
α N.A=n.sin
2
n—物镜与标本之间的介质析射率 α—物镜的镜口角：指从物镜光轴上的物点发出 的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度。 空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47， 香柏油为1.52。
分辨力
D=λ/2N.A. 可见光的波长为0.4—0.7微米，平均波长 为0.55微米 。 （1）减低波长； （2）增大折射率； （3）加大镜口角来提高分辨力。
ＡＢ型人
为数极少，科研人员知之不详。他们的性格还 是个未解之谜。
一般来说ＡＢ型兼具有Ａ和Ｂ型人的气质特征， 秘以在气质方面不统一，缺少一贯性，也就是在 性格方面充满矛盾，易怒、烦躁。但他对事物皆 有客观的看法，凡事要求合理化。
ＡＢ型人经常擅于讥讽，多喜欢交际活动， 但也厌恶攀附权贵式的合理化。
ＡＢ型人内心对人的喜恶表现得很强烈，却 绝不会形之于色。
抗A
抗B
血型鉴定结果
＋
－
A型
－
＋
B型
＋源自文库
＋
AB型
－
－
O型
中国人的血型比例
A型血型：28%， B型血型：24%， O型血型：41%， AB型血型：7%
Ｏ型血人
性格稳重、办事有分寸、富于正义感。美中不 足的是有时性情急躁，处理事务犹豫。 根据统计欧美人的血型为Ｏ型居多。一般普遍 性而言，Ｏ型血人皆具有强烈的自信心。意志坚 决，同时兼有罗曼蒂克和重视现实的双重性格， 但经常一遇到麻烦，他是可冲动去解决而不会后 悔自己的所作所为。
实验步骤
1先用碘酒，再用酒精消毒手指，待酒精干后用一 次性采血针扎手指。
2采血，取一大滴血滴加到0.5ml的生理盐水中，混 匀制成红细胞悬液。
3 滴加一滴抗A，抗B到干净的玻片上。 4 用毛细吸管滴加一滴血悬液到抗A和抗B中。 5 边轻摇边观察有无凝集的小血块出现，有记作
（＋），呈均匀浑浊，无凝集血块，测为阴性， 记作（－）。
Ｂ型血人
平静、认真、耐心、心地善良、多愁善感。有 时他们也固执，精神紧张。 东西方人最大的差别在于Ｂ型血人的多少，亚 洲Ｂ型人数位居全球人之冠。 Ｂ型血人淡泊，乐天，乍看时让人觉得冷漠 且不太有礼貌，其实Ｂ型人向来大而化之，不注 重交际手腕，属于个性爽朗、开门见山型。他对 人有恳切，有深深的人情味，非常喜欢热闹。 Ｂ型血人自我肯定意识很强，所以常常喜欢 推翻别人的意见，虽然他往往是并无恶意。
1 加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线 的形成。
2 反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解 离而导致假阴性、不出现或不清楚。
三、 油镜的使用及细菌形态的观察
（一）显微镜的构造
机械部分： 镜座、镜筒、物镜转换 器、载物台、推动器、粗动螺旋、 微动螺旋等
光学部分：聚光器、物镜、目镜
数值孔径
也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A， 它与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比，与 镜象亮度的平方根成正比。
絮状沉淀反应 － 如诊断梅毒的康氏反应。
琼脂扩散试验 － 利用可溶性抗原与抗体在 半固体琼脂内进行扩散，若抗原与抗体对应， 并且比例适当，就会出现白色沉淀线。
可分为单向琼脂扩散反应和双向琼脂扩 散反应。
双向琼脂扩散试验
双向琼脂扩散反应（学生操作）
1．琼脂平板的制备：取已溶化的盐水琼脂 10ml倾注于直径6cm的平板。待琼脂凝固后， 用打孔器按下图 打孔。