一例心脏缺陷胎儿染色体lp36.3微缺失的产前诊断重点

ａｎ
ａ
ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ｏｆ ４６，ＸＹ，ｔ（１；１４）（ｔ）３６．３；ｐ１２），ａｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＳＮＰ—
ｏｒ
ａｂｎｏｒｍａｌ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐａｔｅｒｎａＩ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ。Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＦＩＳＨ
ｃａｎ
Ａｒｒａｙ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＧＴＧ ｂａｎｄｉｎｇ ａｎｄ
２．１
结果
针，２００万个拷贝数探针，探针平均间隔约１ ｋｂ）。提 取胎儿羊水和父母全血基因组ＤＮＡ（Ｑｉａｎｇｅｎ试剂 盒），取５００ ｎｇ完整基因组ＤＮＡ按实验手册进行实 验。采用Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ７Ｇ扫描仪扫描，扫描信号图经 Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ的Ｃｈａｓ软件分析、计算产生每一个位点的 基因型或信号相对强度，包括拷贝数变异（ｃｏｐｙ
ａ
ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｆｅｔｕｓ ａｎｄ ｈｉｓ ｐａｒｅｎｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｉｎ
６．９
Ｍｂ ｍｉｃｒｏｄｅｌｅｔｉｏｎ
ａｔ
１ ｐ３６．３３ ｐ３６．２３
ｔｈｅ ｆｅｔｕｓ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｎｄ ＦＩＳＨ
ａｎａｌｙｓｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆａｔｈｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｔｕｓ ｈａｄ ｆｅｔｕｓ ｈａｓ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ
常规的Ｇ显带核型分析只能检测到５～１０ Ｍｂ以上的 染色体片段异常，对于微小的染色体结构的异常不能 检测。染色体末端通常涉及的片段较小，而且大部分 是Ｇ显带浅染区，肉眼难以辨认，发生染色体重排时 一般难以通过传统细胞遗传学核型分析检测。在诊断 染色体末端重排时除了需要Ｇ显带核型分析技术，更 需要借助ＦＩＳＨ和基因芯片技术。 １ｐ３６缺失是最常见的染色体亚端粒区域微缺失， 其表现出来的临床症状称为１ｐ３６缺失综合征，在人群 中的发病率为１／５０００～１／１０ ０００。ｌｐ３６缺失综合征 患者的症状包括中度到重度智力低下、宫内发育迟缓、 生长发育迟缓、心脏畸形、听力障碍、视力障碍、肌张力 低、癫痫、肥胖、泌尿生殖器缺陷、甲状腺机能减退症、 骨骼异常、大脑异常、喂食困难、异常颅面特征（小头畸 形、短头畸形、大前囟门、面中部发育不良、直眉毛、深 陷的眼睛、内眦赘皮、鼻梁平坦、平鼻子、尖下巴、低位 耳）等［３‘５］。１ｐ３６缺失综合征患者涉及４种染色体重 排：单纯性末端缺失（占６７％）、衍生染色体（占１６％）、 中间缺失（占１０％）和复杂重排（占７％）［６３。由于 １ｐ３６缺失综合征患者缺失的片段大小和位置不同，导 致缺失不同的剂量敏感基因而产生不同的单倍剂量不 足效应，或发生不同的基因印记效应，或暴露某些隐性 突变的等位基因，从而表现出多样化表型。１ｐ３６缺失 综合征患者中５０％患有癫痫；７１％患有先天性心脏缺 陷，主要缺陷为室间隔缺损、动脉导管未闭、瓣膜异常 和心肌病；４７％有行为异常，包括３０％咬手、２２％乱发 脾气、１３％食欲过盛，与Ｐｒａｄｅｒ—Ｗｉｌｌｉ综合征（Ｐｒａｄｅｒ— Ｗｉｌｌｉ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＷＳ）典型表型重叠【７］。 ｌｐ３６上含有多个基因，有学者研究了其中的部分 基因与疾病的关系，取得很大进展。位于１ｐ３６．３３的 ＧＡＢＲＤ基因和位于１ｐ３６．３１的ＫＣＮＡＢ２基因是癫 痫的候选基因，这些基因的缺失会导致基因表达的单 倍剂量不足，从而出现癫痫症状¨’８］。位于１ｐ３６．３３的 ＳＫＩ基因是一种促进细胞生成的原癌基因，该基因的 单倍剂量不足可能会引起肌张力减退、运动发育迟缓、 智力低下、面裂等症状［９］。位于１ｐ３６．３３的ＭＭＰ２３ 基因在调节囟门关闭上起重要作用，当基因缺失，基因 表达单倍剂量不足时会导致前囟门关闭延迟；当基因 重复，基因过度表达时会导致颅缝早闭［１…。距离１ｐ 末端１０ Ｍｂ以内的区域有很多基因与葡萄糖和脂类 代谢相关，这些基因表达的改变或者疾病易感基因的 影响程度不同，可能会导致ｌｐ３６缺失综合征中肥胖的 发展。ＤＡｎｇｅｌｏ等［１妇发现１ｐ３６缺失综合征有类似 ＰＷＳ综合征表型的患者有２．５ Ｍｂ的末端缺失，提出 １ｐ３６．３３一ｐ３６．３２是肥胖和食欲过盛表型的关键区域。
ｎｕｍｂｅｒ ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ＣＮＶ）和ＳＮＰ。
１．３
ＳＮＰ—ａｒｒａｙ检测结果
胎儿高密度ＳＮＰ—ａｒｒａｙ
０２３ ４１１—
芯片结果为ａｒｒ［ｈ９１９］１ｐ３６．３３ｐ３６．２３（１
７ ８８１
７８０）×１，在ｌｐ３６．３３ｐ３６．２３存在约６．９ Ｍｂ的 Ｇ显带核型分析结果 羊水Ｇ显带核型分析结
于发现染色体末端隐匿性易位、微缺失或微重复，提高诊断准确率，对复发风险的评估有重要价值。
【关键词】染色体末端； 位杂交 隐匿性易位； 核型分析； 单核苷酸多态微阵列芯片技术分析； 荧光原
Ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ １ｐ３６．３ Ｉ．ｉｎ
ｍｉｃｒｏｄｅｌｅｔｉｏｎ ｉｎ
ａ
ｆｅｔｕｓ ｗｉｔｈ
ｈｅｌｐ
ａｓｓｅｓｓ
ｔｏ
ｄｅｔｅｃｔ ｃｒｙｐｔｉｃ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ，ｍｉｃｒｏｄｅｌｅｔｉｏｎ
ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ
百度文库
ｍｉｃｒｏｄｕｐｌｉｃａｔｌｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ ａｎｄ ｉｓ ｖａｌｕａｂｌｅ
ｔｏ
ｔｈｅ
ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｆａｍｉｌｙ．
Ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ； Ｓｉｎｇｌｅ
Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１００８０．Ｃｈｉｎａ （？ｏｒｒＰｓｐｏ玎ｄｉ拧ｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｗｕ Ｊｉａｎｚｈｕ，Ｅｍａｉｌ：ｗ“歹；廿＂：矗“３１４０（雪１ ２６．ＣＯｒｎ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］
ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ
ａｎａｌｙｚｅ
２０１６，Ｖ０１．３３，Ｎｏ．３
隔缺损，均未行进一步检查。 １．２全基因组基因芯片检测 应用美国Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ
哚复染剂于杂交区域位置，盖上盖玻片，暗处放置１０ ｍｉｎ后，在荧光显微镜下观察。
２
公司提供的ＣｙｔｏＨＤ－ＳＮＰ—Ａｒｒａｙ微阵列，使用
Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＣｙｔｏＳｃａｎ
ＨＤ探针（含约７５万个ＳＮＰｓ探
ＦＩＳＨ检测
胎儿父亲中期分裂相ＦＩＳＨ分析，
选用定位于Ｍｏｎｏｓｏｍｙ ｌｐ３６微缺失综合征关键区内 的ＳＫＩ探针（红色信号是ＳＫＩ探针，绿色信号是ｌｑ４４ 探针，Ｃｙｔｏｃｅｌｌ公司）。滴片风干后５０℃烤３ ｈ，放人 ３７℃预温的２×ＳＳＣ溶液浸泡１０ ｍｉｎ，在室温的ＰＢＳ 溶液中漂洗３ ｍｉｎ，用浓度分别为７０％、８５％、１００％的 乙醇脱水各２ ｍｉｎ。干燥后在暗室中加对应探针，盖 上盖玻片后封胶，杂交仪７３℃变性３ ｍｉｎ，４２℃杂交１６ ｈ，然后洗片，干燥后滴加８“Ｉ。４’，６一二脒基一２一苯基吲
中华医学遗传学杂志２０１６年６月第３３卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，Ｊｕｎｅ ２０１６，Ｖ０１．３３，Ｎｏ．３
・３５３・
・临床遗传学论著・
一例心脏缺陷胎儿染色体ｌｐ３６．３
微缺失的产前诊断
吴坚柱 何志明 林少宾
谢英俊
陈宝江
陈筠虹
５１００８０广州，中山大学附属第一医院妇产科胎儿医学中心
通信作者：吴坚柱，Ｅｍａｉｌ：ｗｕｊｉａｎｚｈｕ３１４０＠１２６．ｃｏｒｎ ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００３—９４０６．２０１６．０３．０１７
１ｐ３６．３３ｐ３６．２３不存在缺失
胎儿羊水Ｇ显带核型分析图ｌｐ３６．３被一段未知来源的随体柄和随体所代替
胎儿父亲Ｇ显带核型分
１ｐ末端和１４ｐ末端平衡易位图５胎儿父亲中期分裂相ＳＫＩ探针ＦＩＳＨ分析结果１条ｌｐ末端缺少ＳＫＩ探针信号，易位到其他染色体末
万方数据
中华医学遗传学杂志２０１６年６月第３３卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，Ｊｕｎｅ ２０１６，Ｖ０１．３３，Ｎｏ．３
（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）验证胎儿染色体１ｐ３６．３微缺失的来源。结果
高密度ＳＮＰ—
ａｒｒａｙ芯片检测显示胎儿在ｌｐ３６．３３ｐ３６．２３存在６．９ Ｍｂ的微缺失，Ｇ显带核型分析和ＦＩＳＨ检测提示其父 亲核型为４６，ＸＹ，ｔ（１；１４）（ｐ３６．３；ｐ１２），胎儿携带一条由父亲ｌＰ末端和１４ｐ末端平衡易位形成的ｌ号衍生 染色体，核型为４６，ＸＹ，ｄｅｒ（１）ｔ（１；１４）（ｐ３６．３；ｐ１２）ｐａｔ。结论 ＳＮＰ—ａｒｒａｙ结合Ｇ显带和ＦＩＳＨ技术有助
缺失（图１），其父母检测结果正常（图２）。
２．２
果显示胎儿１Ｐ末端的ｌｐ３６．３被一段未知来源的随体 柄和随体所代替，核型为４６，ＸＹ，ａｄｄ（１）（ｐ３６．３）（图 ３）。胎儿母亲Ｇ显带核型分析结果正常，胎儿父亲Ｇ 显带核型分析结果显示１Ｐ末端和１４ｐ末端平衡易位， 核型为４６，ＸＹ，ｔ（１；１４）（ｐ３６．３；ｐ１２）（图４）。
ｃｏｍｐｌｅｘ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔ
Ｗｕ Ｊｉａｎｚｈｕ，Ｈｅ Ｚｈｉｍｉｎｇ，
Ｓｈａｏｂｉｎ，Ｘｉｅ Ｙｉｎｇｊｕｎ，Ｃｈｅｎ Ｂｕｏｊｉａｎｇ，Ｃｈｅｎ Ｊｕｎｈｏｎｇ
Ｆｅｔａｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ
术能检测出染色体末端的微缺失和微重复，有利于染 色体末端隐匿性易位的检出。本研究中，我们应用 ＳＮＰ—Ａｒｒａｙ、Ｇ显带核型分析和荧光原位杂交
（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术检出１
例心脏缺陷胎儿携带来源于父亲１Ｐ末端和１４ｐ末端
万方数据
中华医学遗传学杂志２０１６年６月第３３卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，Ｊｕｎｅ
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图３
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左上角红色粗横杠示在Ｉｐ３６．３３ｐ３６．２３存在６．９ Ｍｂ的缺失
图２ 胎儿父亲ＳＮＰ ａｒｒａｙ芯片检测结果 图４
胎儿ＳＮＰ—ａｒｒａｙ芯片检测结果
ａ
ｆｅｔｕｓ
ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ
ｗｉｔｈ
ｃｏｍｐｌｅｘ
ｈｅａｒｔ
ｄｅｆｅｃｔ ａｎｄ
ａｓｓｅｓｓ
ｔｈｅ
ｒｉｓｋ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ，ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ
ｔＯ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）ａｎｄ ｓｉｎｇｌｅ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｂａｓｅｄ ａｒｒａｙ（ＳＮＰ—ａｒｒａｙ）ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ＳＮＰ—Ａｒｒａｙ ｈａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ
ｎｕｅｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ－ｂａｓｅｄ ａｒｒａｙｓ，ＳＮＰ—ａｒｒａｙ）技
平衡易位衍生的１号染色体。 ｌ对象与方法 １．１对象胎儿父母为再婚夫妻，非近亲婚配。胎儿 母亲年龄３３岁，Ｇ３Ｐ１Ａ１，２００５年与前夫生育一子，表 型正常。２０１３年怀孕３个月时因“胚胎停育”行人工 流产；再次怀孕２２周，超声检查结果显示胎儿室间隔 缺损、三尖瓣发育不良、主动脉弓离断、胸腺缺如、右侧 单脐动脉。父亲年龄３５岁，与前妻育有一子一女，均 为“脑瘫患儿”，超声检查发现女儿动脉导管未闭、房间
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］
Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｔｅｒｍｉｎａｌ；
Ｃｒｙｐｔｉｃ
ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ；
ｎｕｅｌｅｏｔｉｄｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ—ｂａｓｅｄ ａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ；
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
染色体末端的亚端粒区域富含基因，常常发生染 色体重排，重排后可能会导致智力障碍¨］。大多数染 色体末端属于Ｇ显带浅带，发生隐匿性易位时Ｇ显带 不易察觉。单核苷酸多态微阵列芯片（ｓｉｎｇｌｅ
【摘要】
目的
对ｌ例心脏缺陷胎儿进行细胞遗传学诊断，明确其病因，为再生育复发风险评估及产
应用单核苷酸多态微阵列芯片（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ—ｂａｓｅｄ
ａｒｒａｙｓ，
前诊断提供依据。方法
ＳＮＰ—ａｒｒａｙ）对胎儿及其父母行全基因组ＤＮＡ扫描分析，结合Ｇ显带核型分析及荧光原位杂交
２．３
Ｇ显带核型分析
签署知情同意书后抽取３０
ｍｌ。羊水进行羊水细胞培养、Ｇ显带核型分析。取胎 儿父母外周血各１ ｍＬ行淋巴细胞培养、行Ｇ显带核 型分析。选择５５０条带以上的核型进行分析，核型按 《２０１３人类细胞遗传学国际命名体制（ＩＳＣＮ）》描述。
１．４
ＦＩＳＨ检测结果胎儿父亲中期分裂相ＳＫＩ探
针ＦＩＳＨ结果显示其中１条１Ｐ末端缺少ＳＫＩ探针信 号，易位到其他染色体末端，验证了胎儿父亲发生 １ｐ３６．３易位（图５）。确定胎儿携带１条来源于父亲的 １Ｐ末端和１４ｐ末端平衡易位形成的衍生１号染色体， 核型为４６，ＸＹ，ｄｅｒ（１）ｔ（１；１４）（ｐ３６．３；ｐ１２）ｐａｔ。 ３讨论 染色体末端亚端粒区域的隐匿性重排可能会引起 畸形和智力低下。在不明原因的中度或重度智力缺陷 儿童中，约５％～７％存在隐匿性亚端粒区域重排［２］。