一种简便的丹参丹酚酸提取工艺

二、检测去除乙酸乙酯残留过程对丹参提取物中有效成分含量的影响
实验步骤：取四川丹参300g，做丹参丹酚酸提取。乙酸乙酯萃取后，浓缩回收部分乙酸乙酯，剩余的有机溶液平均分为三组，标记A、B、C。分别浓缩至干，在相同环境下做去除乙酸乙酯残留实验。
A组为对照组，B组C组分别加超纯水溶解，在55℃下减压蒸馏4次、8次，每次加水10mL并减压蒸馏一小时，检测其冻干产物中有效成分含量。以下为测试结果：
实验Fra Baidu bibliotek料和仪器
1.主要原料：丹参饮片。本次实验使用的丹参为：
四川中江丹参（成都药材批发市场）
陕西秦岭野生丹参（网上药店）
2.其它材料或试剂：去离子水，乙醇，10%盐酸，乙酸乙酯
3.实验仪器：电炉，水浴锅，冷凝管，真空泵，低温高速离心机，旋转蒸发仪，冷冻干燥器，以及烧杯等常用玻璃仪器。
基本提取工艺流程图
以下为检测结果：
丹参品种
陕西丹参
酸化后pH
2.0
2.5
3.0
3.5
干燥固形物中质量
1.73g
1.64g
1.53g
1.13g
干粉得率
3.47%
3.28%
3.05%
2.26%
干燥固形物中丹酚酸A含量
8.01%
7.67%
4.36%
9.73%
干燥固形物中丹酚酸B含量
75.92%
83.51%
86.86%
87.34%
以下为第二次检测结果（实验方法相同，丹参质量为300g，添加了pH=4以及不进行酸化的对照组，其余条件均与第一次一致）
丹参品种
陕西丹参
酸化后pH
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
未酸化
干燥固形物中质量
1.33g
1.49g
1.58g
1.31g
0.628g
0.359g
干粉得率
2.71%
3.05%
3.22%
2.69%
经多次实验，该工艺结果稳定，实验过程和设备简单，条件温和，实验成本低，得到丹酚酸B纯度高，在实验室条件下效果较好。
实施例3
取四川丹参100g，加12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，得到得到丹酚酸总提物2.51g，其中丹酚酸B的含量为83.4%，丹酚酸得率为2.1%。
贮存条件
密封，置阴凉干燥处
有效期
提取出浸粉率
提取物功效成分检测方法
HPLC法测定丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素钠
1.色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax C18;流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59)；流速：1.0ml/mL；检测波长：286nm；进样量：20μL
2.对照品溶液制备
一种简便的丹参丹酚酸提取工艺
水塔（北京）老陈醋生物科学有限公司
车建途冯小珺于雷张丕馥陶中才
摘要：丹参中药材取自唇形科植物丹参的根，在中医临床上，丹参主要用来治疗冠心病、脑血栓、肝炎及肝硬化等。该药长期的临床应用背景及在治疗疾病方面的明显效果，引起了国内外学者对其水溶性酚类化合物的重视。丹酚酸B是丹参水溶性成分中最主要的活性物质，其含量较高，占丹参药材的2%-8%。丹酚酸B的活性很强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，还具有抗血小板聚集并对血栓形成的作用。因此，丹酚酸B的提取技术的研究受到了医药界的关注。本实验简化了丹参中丹酚酸B的提取方法，以简单低成本的提取方法得到丹酚酸B纯度较高的干粉。
分组
样品描述
样品质量
丹酚酸A
丹酚酸B
迷迭香酸
丹参素钠
A
未减压蒸馏
3.351g
4.17%
76.02%
4.1%
4.6%
B
减压蒸馏4h
3.161g
3.97%
86.23%
4.23%
5.18%
C
减压蒸馏8h
3.127g
4.35%
82.92%
4.04%
4.96%
重复实验得出结论：B和C组比较可得，经过多次减压蒸馏，丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素钠的含量会随减压蒸馏次数和时间的增多而有所减少，但减少量并不显著，可忽略不计。B组由于去掉大量乙酸乙酯，有效成分的纯度与A组比有较大提高。
实施例
实施例1
取陕西丹参90g，加12倍量的40%乙醇，浸泡2小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，53℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，得到得到丹酚酸总提物3.04g，其中丹酚酸B的含量为81.1%，丹酚酸得率为2.74%。
干燥固形物中迷迭香酸含量
3.99%
3.07%
3.22%
4.26%
干燥固形物中丹参素钠含量
4.33%
3.96%
3.69%
2.33%
丹酚酸B得率
2.63%
2.74%
2.65%
1.97%
第一次测试结果明显表明随着pH从2-3.5的增长，丹酚酸提取物中丹酚酸B的含量也在上升。且pH为2.5、3、3.5时丹酚酸B纯度相差很小；而干粉质量（得率）却在直线下降。
粒径
100%通过80目
化学性质
重金属
≤10ppm
砷（As）
≤2ppm
农药残留
≤2ppm
乙酸乙酯残留
≤5μg/g
乙醇残留
≤5μg/g
微生物
细菌总数
≤1000cfu/g
霉菌及酵母
≤100cfu/g
大肠杆菌
不得检出
沙门氏菌
不得检出
功效成分
总丹酚酸（以丹酚酸B计）
≥65%
丹酚酸B
≥55%
迷迭香酸
丹参素钠
其它
实施例2
取陕西丹参100g，加12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，即得到得到丹酚酸总提物3.32g，其中丹酚酸B的含量为81%，丹酚酸得率为2.69%。
1.28%
0.73%
干燥固形物中丹酚酸A含量
6.40%
6.42%
6.21%
5.93%
4.29%
4.91%
干燥固形物中丹酚酸B含量
73.20%
89.94%
91.48%
88.69%
38.58%
66.47%
干燥固形物中迷迭香酸含量
3.70%
3.65%
3.45%
4.12%
8.13%
6.03%
干燥固形物中丹参素钠含量
精密称取丹酚酸B对照品，用水溶解，并稀释成浓度为0.20mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
3.供试品溶液制备
精密称取适量固形物，加适量水溶解，用水稀释样本溶液浓度为0.4mg/mL，则作为供试品溶液。
4.计算方法
以峰面积，外标法计算含量。
实验过程及结论
一、检测酸化对提取物中丹酚酸B含量的影响
取陕西丹参200g，加入2400mL 40%的乙醇溶液按照方案二的方法提取。浓缩后平均分四份，分别酸化至2、2.5、3、3.5。将四组置于相同条件下萃取，并冷冻干燥，检测所得物。
4.97%
3.47%
3.33%
2.56%
3.06%
2.65%
丹酚酸B得率
1.987%
2.74%
2.95%
2.38%
0.49%
0.49%
第二次测试结果与第一次测试结果反应一致，而pH为4以及未经酸化（pH值大约为4.4-4.6）时提取物很难溶于水，用传统冷冻干燥方法难以检测，故不采用。
经测试，丹参在pH为2.5-3.5条件下提取纯度较高，而由于pH=3.5的时候有较少不溶于水的杂质，且提取干粉质量较低，故选取酸化pH为2.5至3。
3.滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，50℃以下减压浓缩回收乙酸乙酯。
4.将浓缩后的浸膏（干粉）溶于1.5倍量去离子水中，继续浓缩至干，重复两次，即可去除产品中残留乙酸乙酯。浓缩液取出经真空冷冻干燥，既得丹酚酸总提物。
提取物质量控制指标
检测项目
质量标准
物理性质
性状
乳黄色粉末
气味
特有的中药材味
提取工艺具体操作步骤
1.取丹参饮片，加10-12倍量的30%-40%的乙醇溶液，浸泡1-2小时，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，滤渣加8-10倍量的相同浓度乙醇溶液，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，将两次提取液合并。
2.将上述提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10%的盐酸酸化至pH为2.5-3，抽滤或离心去掉悬浮颗粒不溶物。