3种抗氧化活性测定方法
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一、抗氧化活性测定
1．DPPH:
a)样品溶液浓度初测定，（0~4℃）储藏。
b)称4mg，加无水甲醇溶解于烧杯，转移至100mL容量瓶定容。
浓度为0.04mg/mL。
避光（0~4℃）储藏。
i.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml无水甲醇）混合后充分振摇，
反映稳定，40min后测定。
以无水甲醇为对照分光检测λ
=517nm。
平行测定2次。
A1
ii.5ml离心管（2ml待测样+2mL无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。
以无水甲醇为对照分光检测λ
=517nm。
A2
iii.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml待测样）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。
以无水甲醇为对照分光检测λ
=517nm。
A3
清除率（Y）=[1-（A3-A2）/A1]∙100%。
平行测定3次，取平均值。
分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。
自由基清除能力，AE=1/IC50。
根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。
2．·OH
a)PBS制配：磷酸二氢钠31.2g 1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g
1000ml蒸馏水定容。
移液管移液磷酸二氢钠190ml、磷酸氢二钠
810ml 于1000ml 烧杯，pH 计调7.4。
b) 邻二氮菲：148mg 蒸馏水定容100ml 。
c) 硫酸亚铁：208.5mg 蒸馏水定容100ml 。
d) 100ml30%双蒸馏水定容300ml 。
封口。
i. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚
铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ
=536nm 。
A1
ii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚
铁混匀后+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A2 iii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 待测样
+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水
浴1h 后分光λ=536nm.A3
iv. 10ml 离心管（1mlPBS+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光
λ=536nm.A 空。
清除率（Y ）=（A3-A1）/（A2-A1）∙100%
平行测定3次，取平均值。
分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。
自由基清除能力，AE=1/IC50。
根据AE 大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE 越大清除能力越强。
3．-
2O ·：
a) 磷酸二氢钠31.2g 1000ml 蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g 1000ml 蒸馏水定容。
用滴管取磷酸二氢钠加入到磷酸氢二钠中，边加边
搅拌，pH计测到8.2。
0.2mol/L加蒸馏水稀释到0.05mol/L。
b)邻苯三酚：94.58g蒸馏水溶解定容100ml。
i.（5mlPBS+0.1mL蒸馏水+0.2ml邻苯三酚）4min25℃水浴（+
一滴HCl终止反应。
λ=325nm。
A0【对照】
ii.（5mlPBS+0.1ml样品液+0.2ml邻苯三酚）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。
λ=325nm。
A1
iii.（5mlPBS+0.2mL蒸馏水+0.1ml样品液）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。
λ=325nm。
A2
清除率（Y）=1-（A1-A2）/A0∙100%
平行测定3次，取平均值。
分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。
自由基清除能力，AE=1/IC50。
根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。