β-葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
角 瓶 ， 速 １０ ／ ｉ， 用硫 酸 铵 分 级 沉 淀 法 对 Ｂ Ｇ 行提 取 研 究 。 转 １ ｍｎ 并 ｒ —进
关键 词 ：一 ８ 葡萄糖醛酸酶 ； 提取 ； 大肠杆 菌； 活性
Ｓｕ ｙｏ ｘｒ ｃ ｎ ３ Ｇ ｕ ｕ ｏ ｉａｅａ ｄｉ ｔ ａｉｎ ｔｄ ｎＥ ｔａｔ ｇ［ ｌｃ ｒ ｎｄ ｓ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ － ｔ Ａｃ ｖ ｏ
测定 样品液 的Ｏ 值 。 Ｄ
Ｔ ３ ８ 分 析天平 、 Ｐ 电子天平 ：上 海天平 仪器 厂 ； Ｇ ２Ａ Ｙ型 ７２ ５ 分光光 度计 ：上海光谱仪器 有限公 司 ；５ １ ９ — 磁力搅 拌器 ： 上海 司乐仪器 厂 ； Ｚ — 水 浴振 取工艺 将Ｅｃｌ ． ｉ ｏ 振荡培养６ｈ 酶活高峰 ， 止培养 ， 至 停 按下
２１ 大肠杆菌生长曲线的测定 ． 取 固体 斜 面Ｅｃｌ １ ２ ． ｉ 环 环接 种于适 宜 的新 鲜液 ｏ 体培养基 中 ， 为其提供适宜 的培养条件后 ， 不同的培 在 养时间 内， 取样检测细菌 的数 目及其性状 ， 现其 生长 发 过程呈现一定的规律性 ， 以培养时间为横坐标 ， 物 培养
ｐ ｅ ｉ ｉ ｔｏ ． ｒ ｃｐｔ ｉｎ ａ
Ｋｅ ｒ ｓ ｐ－ ｕ ｕｏ ｉａｅ ｅ ｔ ｃ ； ｃ ｌ； ｃｉａｉ ｙｗｏ ｄ ： Ｇｌｃ ｒｎｄ ｓ ； ｘｒ ｔ Ｅ．ｏｉ ａｔ ｔ ｎ ａ ｖ ｏ
食 品卫 生和 食 品安全 是关 系 到人 民群 众 的身 体 健康和生活质量 ，关 系到我 国经济发展 和社会 稳定 的
Ａｂ ｔａ ｔ Ｂ－ ｌｃｏｉａｅｉ ａｓ ｅ ｉｃｅ ｚｍｅｏ ． ｏｉＴ ｉ ｐ ｐ ｒｄ ｔｒ ｎ ｓ ｃｉｉ ， ｐｉ ｌｅ ｅ ｔ ｉｎ ｓｒ ｃ ： Ｇａａｔｓ ｓ ｐ ｃ ｉ ｎｙ ｆ ｃ ｌ ｈｓ ａ ｅ ｅｅｍｉｅ ｔ ｔ ｏ ｔ ｒ ｎａ ｏ ｄ ｓ ｆ Ｅ ． ａ ｖｙ ｍａ ｆｍ ｔ
－＝ １ ８ ＝＝ ４
２ １ 年 ７月 ０１ 第３ ２卷第 ７期
Ｆｏ ｅ ａｃ ｎ ｅｅ ｐ ｅｔ ｏｄＲｓ ｒｈＡ ｄＤｖｌ ｍ ｎ ｅ ｏ
食品研究与开发
生 物工 程
一
葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究
王振 强’王振伟 张耀光 ， 。
（． １黄河水利职业技术学 院 ， 河南 开封 ４ ５ ０ ； ． ７ ０ ３ ２河南 省疾病 预防控制 中心 ， 河南 郑州 ４ ０ １ ） ５０ ６
检测 ， 可达到定量检测 。 还 大肠 杆菌作 为一种危害性较
强 的致病菌 ， 于人类 的身 体健康 构成 了很 大 的威胁 ， 对 因此大肠杆菌 快速检 测对于保障人类 的身体健康具有
重要 的意义［ ２ １ 。
马斯 亮蓝Ｇ ２ ０ Ａ ｒｓｏ 司 ；对硝基酚 一 Ｄ 葡萄 一 ５ ： ｍ ｅｃ公 ｐ— 一 糖醛 酸苷 ： 市医药科学研究所 。 天津 １ 仪器与设备 ． ２ 干燥箱 ： 实验仪器 厂 ； 汽消毒器 ： 上海 蒸 山东新 华
１ ．． 振荡培养 ．１ ３ ４
将接 过种 的三角瓶 放人 自控恒 温汽 浴摇 床上 振 荡培养 ， 温度为３ ７℃ ， 转速 １０ｒ ｉ。 ｒｎ １ ／ ａ
１ ．． 生长量测定 ．１ ３ ５
在培养过程 中 ， 每隔２ Ｎ 摇床 上取下一瓶装有 培 ｋ ｈ 养基 的三角瓶 ， 培养基倒人 比色皿 中， 将 并在分光光度
Ｗ ＡＮＧ ｅ —ｑａ ｇ， ＡＮＧ ｅ ｗｅ ＺＨＡＮＧ ｏ ｇ ｎ ２ Ｚｈ ｎ ｉｎ Ｗ Ｚｈ ｎ— ｉ， Ｙａ － ｕａ ｇ
（ ． ｌ ｗ Ｒ ｖ ｒ ｏ ｓｒａ ｃ ｅ ｈ ｉａ Ｉ ｓｔｔ ， ａｆｎ ７ ０ ３， ｎ ｎ Ｃ ｉａ ２ Ｈｅ ａ ｅ ｔｒ ｆ ｉｅｓ ｏ ｔ ｌ ｎ １ Ｙｅｌ ｉｅ ｎ ｅｖ ｎ ｙ ｃ ｎｃ ｌｎ ｔｕｅ Ｋ ｉ ｇ ４ ５ ０ Ｈｅ ａ ， ｈｎ ； ． ｎ ｎＣ ｎｅ ｓａｅＣ ｎｒ ｄ ｏ Ｃ Ｔ ｉ ｅ ｏＤ ｏａ Ｐ ｅｅ ｔ ｎ， ｈ ｎ ｚ ｏ ５ ０ ６， ｎ ｎ Ｃ ｉａ ｒｖ ｎｉ Ｚ ｅ ｇｈ ｕ ４ ０ １ Ｈｅ ａ ， ｈｎ ） ｏ
Ｂ ０ — ０ Ｍ流量调 节器 ：保定 兰格 恒 流泵有 限公 司 ； Ｔ ０ ３０ Ｌ Ｈ ２ ０ Ａ 化培养箱 ： 东省医疗器械厂。 Ｒ 一５ 一 生 广 １ 方法 ． ３
２ 结果与讨论
沉淀＿＋ 纯化
１ ． 大肠杆菌生长 曲线 的测定 ．１ ３
１ ． １ 接种 ．１ ３． 取 大肠 杆菌斜 面培养基 １ ，以无 菌操作挑 取适 支 量菌苔 （ 两环 ）接人种子培养液 中。 ， １ ．． 校正零点 ．１ ３ ２
琼脂 粉 ： ｔ 进 口分装 ； 油磷 酸钠 ： Ｅ本 甘 中国医药上海 化
学试剂公 司 ；无水葡萄糖 ：天津市北辰液化化学试 剂 厂； 胰蛋 白胨 ： 北京双旋微生物 培养基制 品厂 ； 酸铵 、 硫 乙醇 ： 天津天大 化工实 验厂 ； 酸 ： 磷 天津 四通化 工厂 ； 考
判断 大肠杆菌 的存在 ， 法具 有快 速 、 该 特异 性强 、 价格 低廉 、 灵敏度高等优点 ， 不仅 用于大肠杆菌 的快速定性
一
１ 材料与方 法 １ 材料 ． １
件大事【 】 ｌ 。Ｂ— 是一种酸性水解 酶 ， Ｇ 特异地富含于大
大肠杆菌 ： 天津公安 医院 ； 酵母浸膏 、 白胨 ： 蛋 天津
肠杆菌 中 ， 国外早 在８ 年代初 开始将 Ｂ— 的检 出用于 ０ Ｇ
英博 生化试剂有 限公 司 ； 琼脂 条 ： 北京 化学试 剂公 司 ；
面工艺进行 提取 。 培养 液
联 电子科 技 有 限公 司 ； Ｙ —Ｉ Ｈ Ｇ Ｉ回转式 恒 温 调 速摇 瓶
柜 ： 海欣 蕊 自动化设 备有 限公 司 ；Ｓ 上 Ｌ Ｙ电热恒 温水浴 锅： 北京 医疗设 备厂 ；Ｈ Ｊ４ 型 ｐ 酸度计 ： 国奥 立 Ｐ Ｓ一 Ａ Ｈ 美
龙 公 司 ；Ｓ Ｂ 一自动 部分 收集 器 ：上 海 沪 西 分析 仪 厂 ；
医疗 器 械 厂 ；架 盘 药 物 天平 ：北京 宣 武 区天平 厂 ；
【】 Ｈｏｂ ． ｌｓ ｉｉｍｐｒｉｇｒ ａｄＢ ｃｌ ｓ ｅｅ ｓｎｅｔ ｎ［ ． ８ ｂ ｓ Ｃ Ｃｏｔ ｄｕ ｅｆｎｅｓ ｎ ａｉｕ ｒｕ ｆｃ ｏｓＭ］ Ｂ ｒ ｒ ｌ ｃ ｉ ｉ
Ｎｅ Ｙｏ ｋａ ｄＬ ｄ ｎ Ａｃ ｄ ｍｉ ｒｓ ．９ ９６ — Ｏ ｗ ｒ ｎ ｕｎ ｏ ： ａ ｅ ｃＰ ｅ ｓ１ ６ ：５ ７
计上读 取Ｏ 值 。 Ｄ
１ ．６ ． ｌ ． １ Ｅｃ ｉ ３． ｏ 生长曲线 的绘 制
以培养时 间为横 坐标 ， Ｄ Ｏ 值为纵 坐标 作图 ，绘制 Ｅｃｌ ． ｉ ｏ 生长 曲线 。
时间／ ｈ
图 １ Ｅｃｌ的生 长 曲线 ． ｉ ｏ
Ｆｉ ． Ｔｈ ｏ ｈ Ｃ Ｉ Ｖ ｆＥ．ｏ ｉ ｇ１ ｅ ｇｒ ｗｔ ｌ ｅ ｏ ｃ ｌ Ｆ
Ｒ ｖ ａ ｎａ ｃｏ ｉ ， ０ ， （） ４ ３ ｅ ｔ ｏｍＭｉ ｂｏ２ ６４ １： － ０ Ｌｉ ｒ ｌ０ ８ ２
收稿 日期：０ ０ １ － ７ ２ １— １ ０
生物 工 程
王振强， ［ 葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究 等：－ ３
４ｏ ） ＝， 清液 ； ） ０ ｍ波长下用空 白校正零 点后 （ 取上 ７ 在４ ５ ｎ
作者简介 ： 王振强 （９９ ）男 （ ） 师 ， １７一 ， 汉 ， 讲 硕士 ， 究方向 ： 品检测 研 食
分析教学与研究 。
● ◆ …◆ ● ● ｉ● ◆ Ｉ ｉ
３２３３ ７ — ７
【】 Ａ Ｙ Ｅ ｂ ａ ｒ ｈｍｏｏ ａ ｅ ｅ ｍｅｉｔｄ Ｉｈｂｔ ｎ ｏ ７ Ｌ ．Ａ ｏ—ｍｅ．Ｃ ｏ ｓｍ ｌＧ ｎｓ— ｄａ ｎ ｉｉｏ ｆ ｅ ｉ Ｉｔ ｔ ａ ａｄＦ ｏｂ ｒｅ ａ ｏ ｅｓ ｙＬ ｅ ｂｃｌｕ ｃ ｏ ｈｌｓ ］ ｎｅ ｉ ｌ ｎ ｏｄ ｏｎ ｔ ｇｎ ａｔ ａｉｉｓ ｉ ｐｉ ［ ． ｓｎ Ｐｈ ｂ ｏ ｌ ａｄ ｕ Ｊ
摘 要 ：一 ８ 葡萄糖 醛酸酶（ － 是大肠杆 菌（ ｃｌ ￣特异 酶， ｔ Ｇ） ３ Ｅ ｏ ） ｉ 利用酶一 底物 法测定ｐ Ｇ活性 ， — 确定 了１ Ｇ Ｓ ３ Ｃ 最佳发 酵 －
培养基 ： 胰蛋 白胨 １ 淀粉 ５％、 ａ １ ． 、 ％、 Ｎ Ｃ ５％，酵母 膏 ０５ ｐ ．— Ｉ； ０ ．％、Ｈ７２ ７４ 最佳发 酵培 养条件 ： 气量 ５ Ｌ２ ０ｍ ２ 通 ０ｍ ／５ Ｌ －
１ ． Ｂ一 ．２ ３ 葡萄糖醛酸酶活性测定步 骤［ ３ １ １将培养好 的菌液取 出 ， ） 离心 （ ０ ｍ ｎ ０ｍｎ ３ ０ｒ ｉ， ｉ， ０ ／ ２ ４℃ ） 菌体 ； ） 去 ２ 用干灭过 的移 液管 吸取 １ Ｌ 的上 清菌 ｍ
液 ， 管壁 徐徐 注人 装有 ９ｍ 无 菌水 的试 管 中 ， 成 沿 Ｌ 制 １１ 的稀释 液 ， Ｈ至７ ３ 吸取 ２ 稀 释菌液入 试管 ： ０ 调ｐ ；） ｍＬ
ｃｌ ｒ ｅｉｍ ａ ｄｆｒ ｅ ｔｉｎｃ ｌ ｒ ｃｎ ｉ ｎ ｆｐ— ｉ ｅｅ ｚｍ —ｕ ｓａ ｅ ｏ． ｈ ｐ ｍ ｌ ｕｔ ｅｍ ｄ ｎ ｍ ｎ ｔ ｕ ｕｅ ｏ ｄ ｉ ｓｏ ｕ ｕ ｅ ａｏ ｔ ｔ ｏ Ｇ ｗｔ ｔ ｎｙ ｅ ｓｂｔ ｔ ｍ ｔ ｄ Ｔ ｅｏ ｔ ａ ｈｈ ｒｅ ｈ ｉ
光度上调节零点 ， 以作测定 的空 白对照 。
１ ．． 测零时Ｏ 值 ．１ ３ ３ Ｄ
将 刚接 人 大肠杆 菌但 未振 荡 培养 的培养 基倾 倒 人 比色皿 中，在校好零 点的分光光 度计上 测定 Ｏ 值 。 Ｄ 此 时的Ｏ 值 即为接种后 大肠杆 菌生 长 曲线 中的零 时 Ｄ
读数值 。
ｆ ｒ ｎａｉｎ ｃ ｌ ｒ ｄ ｕ ｃ ｎ ｉｔ ｄｏ ｅｆｌｏ ｎ ： ｒｐ ｏ ｅ １％， ｔｒ ｈ５％， ａ ｌ ． ｅ ｍｅ ｔｔ ｕ ｔ ｅｍｅ ｉ ｍ ｏ ｓｓｅ ｆ ｈ ｏｌｗｉ ｇ ｔｙ ｔｎ ｏ ｕ ｔ ｓａｃ ｎ ｃ ５％， ｅ ｓ ｘｒ ｃ ． ０ ｙ ａ ｔ ｔａ ｔ０５％， ｅ ｐ ７． ７＿ ｔｅ ｆｒ ｅ ｔｔ ｎ ｃ ｌ ｒ ｏ ｄ ｔ ｎ ｏ ｓｓｅ ｆｔｅ ｆｌ ｗｉｇ ｖ ｎ ｉ ｔｏ ．５ ／ ５ ｒａ ｇ ｌｒ Ｈ ２－ ４：ｈ ｅ ｍ ｎ ａｉ ｕ ｔ ｅｃ ｎ ｉ ｏ ｓｃ ｎ ｉｔｄ ｏ ｏｌ ｎ ： ｅ ｔ ａｉｎ ０ ｍＬ ２ ０ ｍＬ ｔｉｎ ｕ ａ ｏ ｕ ｉ ｈ ｏ ｌ
从 图１ 以看 出０ｈ ４ｈ 可 ～ Ｎ迟缓期 ， ～ ０ｈ 对数 ４ｈ １ Ｎ 生长期 ，０ 以后 ， １ ｈ 菌体 的生长进入稳定期 。
ｆａ ｋ ｒ ｔｔ ｇｓ ｅ ｄ １ ／ ｎ Ｉ ｓｔｋ ｎａｒ ｕ ｈ ｃ ｌ ｃ ｉｇｒ ｓ ａ ｃ ｅｗａ ｆａ ｌ ｓ ， ｏａｉ ｐ ｅ ０ ｒｍｉ ． ｔ ｎ １ ｗａ ａ ｅ ｏ ｇ ｏｌ ｔ ｅ ｅ ｒ ｈ ｉ ｔ ｙｏ ｍｍｏ ｉｍ ｕｆ ｔ ｒｃ ｉｎ ｅ ｎ ｎｈ ｎ ｕ ｓ ｌ ｅｆａ ｔ ａ ａ ｏｌ
中活茵数 的对数为纵坐标 ， 可得 出一条 曲线 ， 即为生长 曲线 。 本试验将 Ｅｃｌ ． ｉ ｏ 接种 于种 子培 养基 中以培养 时 间 为 横坐标 ， 测得的Ｏ 值 为纵坐标 ， Ｄ 绘制Ｅｃｌ 长 曲线 ． ｉ ｏ生
如 图１
将蒸馏水倾倒入 比色皿 中 ，选用６０Ｉｌ ５ Ｉ ｘ 波长分 光 ＿ ｌ
关键 词 ：一 ８ 葡萄糖醛酸酶 ； 提取 ； 大肠杆 菌； 活性
Ｓｕ ｙｏ ｘｒ ｃ ｎ ３ Ｇ ｕ ｕ ｏ ｉａｅａ ｄｉ ｔ ａｉｎ ｔｄ ｎＥ ｔａｔ ｇ［ ｌｃ ｒ ｎｄ ｓ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ － ｔ Ａｃ ｖ ｏ
测定 样品液 的Ｏ 值 。 Ｄ
Ｔ ３ ８ 分 析天平 、 Ｐ 电子天平 ：上 海天平 仪器 厂 ； Ｇ ２Ａ Ｙ型 ７２ ５ 分光光 度计 ：上海光谱仪器 有限公 司 ；５ １ ９ — 磁力搅 拌器 ： 上海 司乐仪器 厂 ； Ｚ — 水 浴振 取工艺 将Ｅｃｌ ． ｉ ｏ 振荡培养６ｈ 酶活高峰 ， 止培养 ， 至 停 按下
２１ 大肠杆菌生长曲线的测定 ． 取 固体 斜 面Ｅｃｌ １ ２ ． ｉ 环 环接 种于适 宜 的新 鲜液 ｏ 体培养基 中 ， 为其提供适宜 的培养条件后 ， 不同的培 在 养时间 内， 取样检测细菌 的数 目及其性状 ， 现其 生长 发 过程呈现一定的规律性 ， 以培养时间为横坐标 ， 物 培养
ｐ ｅ ｉ ｉ ｔｏ ． ｒ ｃｐｔ ｉｎ ａ
Ｋｅ ｒ ｓ ｐ－ ｕ ｕｏ ｉａｅ ｅ ｔ ｃ ； ｃ ｌ； ｃｉａｉ ｙｗｏ ｄ ： Ｇｌｃ ｒｎｄ ｓ ； ｘｒ ｔ Ｅ．ｏｉ ａｔ ｔ ｎ ａ ｖ ｏ
食 品卫 生和 食 品安全 是关 系 到人 民群 众 的身 体 健康和生活质量 ，关 系到我 国经济发展 和社会 稳定 的
Ａｂ ｔａ ｔ Ｂ－ ｌｃｏｉａｅｉ ａｓ ｅ ｉｃｅ ｚｍｅｏ ． ｏｉＴ ｉ ｐ ｐ ｒｄ ｔｒ ｎ ｓ ｃｉｉ ， ｐｉ ｌｅ ｅ ｔ ｉｎ ｓｒ ｃ ： Ｇａａｔｓ ｓ ｐ ｃ ｉ ｎｙ ｆ ｃ ｌ ｈｓ ａ ｅ ｅｅｍｉｅ ｔ ｔ ｏ ｔ ｒ ｎａ ｏ ｄ ｓ ｆ Ｅ ． ａ ｖｙ ｍａ ｆｍ ｔ
－＝ １ ８ ＝＝ ４
２ １ 年 ７月 ０１ 第３ ２卷第 ７期
Ｆｏ ｅ ａｃ ｎ ｅｅ ｐ ｅｔ ｏｄＲｓ ｒｈＡ ｄＤｖｌ ｍ ｎ ｅ ｏ
食品研究与开发
生 物工 程
一
葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究
王振 强’王振伟 张耀光 ， 。
（． １黄河水利职业技术学 院 ， 河南 开封 ４ ５ ０ ； ． ７ ０ ３ ２河南 省疾病 预防控制 中心 ， 河南 郑州 ４ ０ １ ） ５０ ６
检测 ， 可达到定量检测 。 还 大肠 杆菌作 为一种危害性较
强 的致病菌 ， 于人类 的身 体健康 构成 了很 大 的威胁 ， 对 因此大肠杆菌 快速检 测对于保障人类 的身体健康具有
重要 的意义［ ２ １ 。
马斯 亮蓝Ｇ ２ ０ Ａ ｒｓｏ 司 ；对硝基酚 一 Ｄ 葡萄 一 ５ ： ｍ ｅｃ公 ｐ— 一 糖醛 酸苷 ： 市医药科学研究所 。 天津 １ 仪器与设备 ． ２ 干燥箱 ： 实验仪器 厂 ； 汽消毒器 ： 上海 蒸 山东新 华
１ ．． 振荡培养 ．１ ３ ４
将接 过种 的三角瓶 放人 自控恒 温汽 浴摇 床上 振 荡培养 ， 温度为３ ７℃ ， 转速 １０ｒ ｉ。 ｒｎ １ ／ ａ
１ ．． 生长量测定 ．１ ３ ５
在培养过程 中 ， 每隔２ Ｎ 摇床 上取下一瓶装有 培 ｋ ｈ 养基 的三角瓶 ， 培养基倒人 比色皿 中， 将 并在分光光度
Ｗ ＡＮＧ ｅ —ｑａ ｇ， ＡＮＧ ｅ ｗｅ ＺＨＡＮＧ ｏ ｇ ｎ ２ Ｚｈ ｎ ｉｎ Ｗ Ｚｈ ｎ— ｉ， Ｙａ － ｕａ ｇ
（ ． ｌ ｗ Ｒ ｖ ｒ ｏ ｓｒａ ｃ ｅ ｈ ｉａ Ｉ ｓｔｔ ， ａｆｎ ７ ０ ３， ｎ ｎ Ｃ ｉａ ２ Ｈｅ ａ ｅ ｔｒ ｆ ｉｅｓ ｏ ｔ ｌ ｎ １ Ｙｅｌ ｉｅ ｎ ｅｖ ｎ ｙ ｃ ｎｃ ｌｎ ｔｕｅ Ｋ ｉ ｇ ４ ５ ０ Ｈｅ ａ ， ｈｎ ； ． ｎ ｎＣ ｎｅ ｓａｅＣ ｎｒ ｄ ｏ Ｃ Ｔ ｉ ｅ ｏＤ ｏａ Ｐ ｅｅ ｔ ｎ， ｈ ｎ ｚ ｏ ５ ０ ６， ｎ ｎ Ｃ ｉａ ｒｖ ｎｉ Ｚ ｅ ｇｈ ｕ ４ ０ １ Ｈｅ ａ ， ｈｎ ） ｏ
Ｂ ０ — ０ Ｍ流量调 节器 ：保定 兰格 恒 流泵有 限公 司 ； Ｔ ０ ３０ Ｌ Ｈ ２ ０ Ａ 化培养箱 ： 东省医疗器械厂。 Ｒ 一５ 一 生 广 １ 方法 ． ３
２ 结果与讨论
沉淀＿＋ 纯化
１ ． 大肠杆菌生长 曲线 的测定 ．１ ３
１ ． １ 接种 ．１ ３． 取 大肠 杆菌斜 面培养基 １ ，以无 菌操作挑 取适 支 量菌苔 （ 两环 ）接人种子培养液 中。 ， １ ．． 校正零点 ．１ ３ ２
琼脂 粉 ： ｔ 进 口分装 ； 油磷 酸钠 ： Ｅ本 甘 中国医药上海 化
学试剂公 司 ；无水葡萄糖 ：天津市北辰液化化学试 剂 厂； 胰蛋 白胨 ： 北京双旋微生物 培养基制 品厂 ； 酸铵 、 硫 乙醇 ： 天津天大 化工实 验厂 ； 酸 ： 磷 天津 四通化 工厂 ； 考
判断 大肠杆菌 的存在 ， 法具 有快 速 、 该 特异 性强 、 价格 低廉 、 灵敏度高等优点 ， 不仅 用于大肠杆菌 的快速定性
一
１ 材料与方 法 １ 材料 ． １
件大事【 】 ｌ 。Ｂ— 是一种酸性水解 酶 ， Ｇ 特异地富含于大
大肠杆菌 ： 天津公安 医院 ； 酵母浸膏 、 白胨 ： 蛋 天津
肠杆菌 中 ， 国外早 在８ 年代初 开始将 Ｂ— 的检 出用于 ０ Ｇ
英博 生化试剂有 限公 司 ； 琼脂 条 ： 北京 化学试 剂公 司 ；
面工艺进行 提取 。 培养 液
联 电子科 技 有 限公 司 ； Ｙ —Ｉ Ｈ Ｇ Ｉ回转式 恒 温 调 速摇 瓶
柜 ： 海欣 蕊 自动化设 备有 限公 司 ；Ｓ 上 Ｌ Ｙ电热恒 温水浴 锅： 北京 医疗设 备厂 ；Ｈ Ｊ４ 型 ｐ 酸度计 ： 国奥 立 Ｐ Ｓ一 Ａ Ｈ 美
龙 公 司 ；Ｓ Ｂ 一自动 部分 收集 器 ：上 海 沪 西 分析 仪 厂 ；
医疗 器 械 厂 ；架 盘 药 物 天平 ：北京 宣 武 区天平 厂 ；
【】 Ｈｏｂ ． ｌｓ ｉｉｍｐｒｉｇｒ ａｄＢ ｃｌ ｓ ｅｅ ｓｎｅｔ ｎ［ ． ８ ｂ ｓ Ｃ Ｃｏｔ ｄｕ ｅｆｎｅｓ ｎ ａｉｕ ｒｕ ｆｃ ｏｓＭ］ Ｂ ｒ ｒ ｌ ｃ ｉ ｉ
Ｎｅ Ｙｏ ｋａ ｄＬ ｄ ｎ Ａｃ ｄ ｍｉ ｒｓ ．９ ９６ — Ｏ ｗ ｒ ｎ ｕｎ ｏ ： ａ ｅ ｃＰ ｅ ｓ１ ６ ：５ ７
计上读 取Ｏ 值 。 Ｄ
１ ．６ ． ｌ ． １ Ｅｃ ｉ ３． ｏ 生长曲线 的绘 制
以培养时 间为横 坐标 ， Ｄ Ｏ 值为纵 坐标 作图 ，绘制 Ｅｃｌ ． ｉ ｏ 生长 曲线 。
时间／ ｈ
图 １ Ｅｃｌ的生 长 曲线 ． ｉ ｏ
Ｆｉ ． Ｔｈ ｏ ｈ Ｃ Ｉ Ｖ ｆＥ．ｏ ｉ ｇ１ ｅ ｇｒ ｗｔ ｌ ｅ ｏ ｃ ｌ Ｆ
Ｒ ｖ ａ ｎａ ｃｏ ｉ ， ０ ， （） ４ ３ ｅ ｔ ｏｍＭｉ ｂｏ２ ６４ １： － ０ Ｌｉ ｒ ｌ０ ８ ２
收稿 日期：０ ０ １ － ７ ２ １— １ ０
生物 工 程
王振强， ［ 葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究 等：－ ３
４ｏ ） ＝， 清液 ； ） ０ ｍ波长下用空 白校正零 点后 （ 取上 ７ 在４ ５ ｎ
作者简介 ： 王振强 （９９ ）男 （ ） 师 ， １７一 ， 汉 ， 讲 硕士 ， 究方向 ： 品检测 研 食
分析教学与研究 。
● ◆ …◆ ● ● ｉ● ◆ Ｉ ｉ
３２３３ ７ — ７
【】 Ａ Ｙ Ｅ ｂ ａ ｒ ｈｍｏｏ ａ ｅ ｅ ｍｅｉｔｄ Ｉｈｂｔ ｎ ｏ ７ Ｌ ．Ａ ｏ—ｍｅ．Ｃ ｏ ｓｍ ｌＧ ｎｓ— ｄａ ｎ ｉｉｏ ｆ ｅ ｉ Ｉｔ ｔ ａ ａｄＦ ｏｂ ｒｅ ａ ｏ ｅｓ ｙＬ ｅ ｂｃｌｕ ｃ ｏ ｈｌｓ ］ ｎｅ ｉ ｌ ｎ ｏｄ ｏｎ ｔ ｇｎ ａｔ ａｉｉｓ ｉ ｐｉ ［ ． ｓｎ Ｐｈ ｂ ｏ ｌ ａｄ ｕ Ｊ
摘 要 ：一 ８ 葡萄糖 醛酸酶（ － 是大肠杆 菌（ ｃｌ ￣特异 酶， ｔ Ｇ） ３ Ｅ ｏ ） ｉ 利用酶一 底物 法测定ｐ Ｇ活性 ， — 确定 了１ Ｇ Ｓ ３ Ｃ 最佳发 酵 －
培养基 ： 胰蛋 白胨 １ 淀粉 ５％、 ａ １ ． 、 ％、 Ｎ Ｃ ５％，酵母 膏 ０５ ｐ ．— Ｉ； ０ ．％、Ｈ７２ ７４ 最佳发 酵培 养条件 ： 气量 ５ Ｌ２ ０ｍ ２ 通 ０ｍ ／５ Ｌ －
１ ． Ｂ一 ．２ ３ 葡萄糖醛酸酶活性测定步 骤［ ３ １ １将培养好 的菌液取 出 ， ） 离心 （ ０ ｍ ｎ ０ｍｎ ３ ０ｒ ｉ， ｉ， ０ ／ ２ ４℃ ） 菌体 ； ） 去 ２ 用干灭过 的移 液管 吸取 １ Ｌ 的上 清菌 ｍ
液 ， 管壁 徐徐 注人 装有 ９ｍ 无 菌水 的试 管 中 ， 成 沿 Ｌ 制 １１ 的稀释 液 ， Ｈ至７ ３ 吸取 ２ 稀 释菌液入 试管 ： ０ 调ｐ ；） ｍＬ
ｃｌ ｒ ｅｉｍ ａ ｄｆｒ ｅ ｔｉｎｃ ｌ ｒ ｃｎ ｉ ｎ ｆｐ— ｉ ｅｅ ｚｍ —ｕ ｓａ ｅ ｏ． ｈ ｐ ｍ ｌ ｕｔ ｅｍ ｄ ｎ ｍ ｎ ｔ ｕ ｕｅ ｏ ｄ ｉ ｓｏ ｕ ｕ ｅ ａｏ ｔ ｔ ｏ Ｇ ｗｔ ｔ ｎｙ ｅ ｓｂｔ ｔ ｍ ｔ ｄ Ｔ ｅｏ ｔ ａ ｈｈ ｒｅ ｈ ｉ
光度上调节零点 ， 以作测定 的空 白对照 。
１ ．． 测零时Ｏ 值 ．１ ３ ３ Ｄ
将 刚接 人 大肠杆 菌但 未振 荡 培养 的培养 基倾 倒 人 比色皿 中，在校好零 点的分光光 度计上 测定 Ｏ 值 。 Ｄ 此 时的Ｏ 值 即为接种后 大肠杆 菌生 长 曲线 中的零 时 Ｄ
读数值 。
ｆ ｒ ｎａｉｎ ｃ ｌ ｒ ｄ ｕ ｃ ｎ ｉｔ ｄｏ ｅｆｌｏ ｎ ： ｒｐ ｏ ｅ １％， ｔｒ ｈ５％， ａ ｌ ． ｅ ｍｅ ｔｔ ｕ ｔ ｅｍｅ ｉ ｍ ｏ ｓｓｅ ｆ ｈ ｏｌｗｉ ｇ ｔｙ ｔｎ ｏ ｕ ｔ ｓａｃ ｎ ｃ ５％， ｅ ｓ ｘｒ ｃ ． ０ ｙ ａ ｔ ｔａ ｔ０５％， ｅ ｐ ７． ７＿ ｔｅ ｆｒ ｅ ｔｔ ｎ ｃ ｌ ｒ ｏ ｄ ｔ ｎ ｏ ｓｓｅ ｆｔｅ ｆｌ ｗｉｇ ｖ ｎ ｉ ｔｏ ．５ ／ ５ ｒａ ｇ ｌｒ Ｈ ２－ ４：ｈ ｅ ｍ ｎ ａｉ ｕ ｔ ｅｃ ｎ ｉ ｏ ｓｃ ｎ ｉｔｄ ｏ ｏｌ ｎ ： ｅ ｔ ａｉｎ ０ ｍＬ ２ ０ ｍＬ ｔｉｎ ｕ ａ ｏ ｕ ｉ ｈ ｏ ｌ
从 图１ 以看 出０ｈ ４ｈ 可 ～ Ｎ迟缓期 ， ～ ０ｈ 对数 ４ｈ １ Ｎ 生长期 ，０ 以后 ， １ ｈ 菌体 的生长进入稳定期 。
ｆａ ｋ ｒ ｔｔ ｇｓ ｅ ｄ １ ／ ｎ Ｉ ｓｔｋ ｎａｒ ｕ ｈ ｃ ｌ ｃ ｉｇｒ ｓ ａ ｃ ｅｗａ ｆａ ｌ ｓ ， ｏａｉ ｐ ｅ ０ ｒｍｉ ． ｔ ｎ １ ｗａ ａ ｅ ｏ ｇ ｏｌ ｔ ｅ ｅ ｒ ｈ ｉ ｔ ｙｏ ｍｍｏ ｉｍ ｕｆ ｔ ｒｃ ｉｎ ｅ ｎ ｎｈ ｎ ｕ ｓ ｌ ｅｆａ ｔ ａ ａ ｏｌ
中活茵数 的对数为纵坐标 ， 可得 出一条 曲线 ， 即为生长 曲线 。 本试验将 Ｅｃｌ ． ｉ ｏ 接种 于种 子培 养基 中以培养 时 间 为 横坐标 ， 测得的Ｏ 值 为纵坐标 ， Ｄ 绘制Ｅｃｌ 长 曲线 ． ｉ ｏ生
如 图１
将蒸馏水倾倒入 比色皿 中 ，选用６０Ｉｌ ５ Ｉ ｘ 波长分 光 ＿ ｌ