磷酸酯酶的性质
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跨膜ATP酶可以为细胞输入许多新陈代谢所需 的物质并输出毒物、代谢废物以及其他可能阻碍 细胞进程的物质。例如,钠钾ATP酶(又称为钠/ 钾离子ATP酶)能够调节细胞内钠/钾离子的浓度, 从而保持细胞的静息电位;氢钾ATP酶(又称为氢 /钾离子ATP酶或胃质子泵)可以使胃内保持酸化 环境。
焦磷酸酶
碱性磷酸酯酶(AP)
碱性磷酸酯酶是一种核酸酶,因为它在pH为8 是的活性最大而得名,它只催化磷酸酯的水解 反应,而对磷酸二酯无催化作用。它的催化活 性很高,其中从Escherichia coli中提叏出来 的AP是目前収现的催化反应加速最快的酶之 一。
碱性磷酸酯酶是催化从单链戒双链DNA和RNA分 子中除去5′-磷酸残基,即脱磷酸作用: 1.磷酸盐在细胞内不能合成,当磷酸盐数量叐限的 时候,细胞必须通过磷酸酯酶的水解从核酸、磷酸化糖 和蛋白质中得到有机体所需的磷酸盐 2.在基因工程中主要是应用该酶处理经限制性内 切酶切割后的载体DNA,去除载体DNA两末端的5′-磷 酸残基,以防止载体DNA自我环化,从而提高其重组效率 3. AP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′ 磷酸末端,使得它们不能进行自连接,利用这个特性可以 降低克隆时载体DNA的背景。
AP催化机理
虽然不同的酶的结构有 差异,但起反应活性中 心都是一样的,含有一 对Zn(Ⅱ)离子和一个 Mg(Ⅱ)离子
两个锌离子分别与三个氨基酸残基配位并构成催化活性位点, 直接与底物末端磷酸根基团结合。 镁离子不直接参与催化作用,只起到稳定酶结构的作用。
磷酸二酯酶
磷酸二酯酶(PDEs)具有水解细胞内第二信使 (cAMP,环磷酸腺苷或cGMP,环磷酸鸟苷)的功能, 降解细胞内cAMP或cGMP,从而终结这些第二信 使所传导的生化作用。 cAMP和cGMP对于细胞活 动起着重要的调节作用。而其浓度的调节主要由 核苷酸环化酶的合成和磷酸二酯酶(PDEs)水解作 用之间的平衡决定断。 磷酸二酯酶包括催化水解核酸的一系列酶,如5′磷酸二酯酶、3′-磷酸二酯酶、核糖核酸酶(RNase)、 脱氧核糖核酸酶(DNase)等。
磷酸酯酶的性质
磷酸酯酶
定义
能水解有、机磷酸酯类化合物磷酸酯键的酶。 磷酸酯酶通常是指催化正磷酸酯化合物水解的
酶类总称,或者说是水解磷酸酯及多聚磷酸化合 物酶类的总称。有时也分别称为磷酸酯酶和多磷 酸酶。前者主要包括磷酸单酯酶类和磷酸二酯酶
Hale Waihona Puke Baidu
类。后者有三磷酸腺苷酶、焦磷酸酶、偏磷酸酶
等。
磷酸单酯酶
三磷酸腺苷酶
ATP酶,又称为三磷酸腺 苷酶,是一类能将三磷酸腺 苷(ATP)催化水解为二磷 酸腺苷(ADP)和磷酸根离 子的酶,这是一个释放能量 的反应。在大多数情况下, 能量可以通过传递而被用于 驱动另一个需要能量的化学 反应。
跨膜ATP酶需要ATP水解所 产生的能量,因为这些酶需要 做功:它们逆着热力学上更容 易发生的方向来进行物质运输, 换句话说,以膜为参照,它们 可以将物质从低浓度的一边运 送到高浓度的一边。这一过程 被称为主动运输。
焦磷酸酶是一种催化一分子 焦磷酸盐转化为两分子磷酸 盐离子的酶。 这是一个高放能的反应,因 此此反应可偶联到一些热力 学上不利的转化,以便驱动 这些转化进行到完全。此酶 的功能乃是在脂代谢(包括 脂合成与讲解)、钙吸收以 及骨形成和DNA合成中扮演 重要角色,其他生物化学转 化也是如此。
上图为从嗜热高温球菌中分离得 到的无机焦磷酸酶的结构
PDEs是一个多基因的大家族,它包括 11型共30余种具有不同底物专一性、 酶动力学特征、调控特点以及细胞与 亚细胞分布区域不同的磷酸二酯酶同 功酶 PDEs拥有相似的结构,均包含调 控和催化两个功能区域。 PDEs具有不同的底物专一性:PDEs 4、 7、8专一作用于cAMP,而PDEs 5、6、 9则选择性地作用于cGMP。PDE3以相 似的亲和力与cAMP和cGMP结合,但 相对较步地水解cGMP,因而在功能上 被视作对cAMP专一,cGMP通过与酶 作用部位的竞争性结合而起负调控因 子作用。PDEs 1和.2既能水解cAM[ , 又能水解cGMP,但PDE1因其亚型不 同,对两种底物绽挥不同的水解效能。 PDEs的氨基端调控区域具有高度异源 性,反映PDE家族成员的不同的辅助 因子。
磷酸单酯酶:仅能催化酯化一次的磷酸基,即 把磷酸单酯化合物中磷酸单酯键切断而使磷酸 基游离。根据它们对所作用的底物的专一程度, 可把它们分为特异性和非特异性两种。 磷酸单酯酶有专一性较低的酸性磷酸酯酶和碱 性磷酸酯酶。
酸性磷酸酯酶
酸性磷酸酯酶(acid phosphatase ACP)是指一组 非特异性磷酸酯酶,在酸性条件下能水解各种 磷酸脂。ACP分布广泛,它能够催化磷酸单酯 键的水解并释放无机磷酸,是生物磷代谢的重 要酶类,ACP活性的高低与人和动物的病理状 态密切相关。酸性磷酸酶是溶酶体的标志酶。 溶酶体作为细胞内起消化功能的细胞器,含有 大量酸性水解酶,在细胞内外物质代谢过程中 起着十分重要的作用。