细胞融合

足够的病毒聚集细胞 ——破坏质膜，细胞 间形成通道——细胞 融合——再生细胞壁 ——筛选
7.3.2.2化学法与物理法 采用化学诱导剂促使细胞融合
NaCO3诱导粉兰烟草 和郎氏烟草原生质体， 其对细胞无害，但是效 率低。 高PH的高浓度的Ca2+ 诱导融合，其能改变质 膜的表面电荷，利于细 胞融合。
突破了有性杂交方法的局限，克服了远缘杂交的 不亲和性，使远缘杂交成为可能，为制造单克隆 抗体提供了条件。成为研究细胞遗传、细胞免疫、 肿瘤和生物新品种培育的重要手段。 例如：利用动物细胞融合制备单克隆抗体
图示
第一小组成员： 吴艳玲 闭思琪 董梦思 高 玲 张媛媛 王 琪
谢谢！

本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为: 1. 鸡 血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴 别;2. 实验材料便宜、易得。细胞融合与否，可 通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。细胞内 只有一个核，定为未融合细胞;有二至多个核， 定为融合细胞。
思考题
1.法细胞融合的影响因素有哪些?
答：1. PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比;但 PEG的分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者，在实验 时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000，浓度一般为40~60%。2. PEG的 pH值: 经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。3. PEG的处理时间: 处理时间越长，融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。故一般将处理时间限 制在1分钟之内。本实验中细胞融合后无需继续培养, 故处理时间可适当放宽至 数分钟。4. 融合时的温度: 由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合 效果也与温度成正比。因此，为了获得更好的融合效果, 在细胞可能承受的温度 范围内可适当提高处理的温度。对于哺乳动物的细, 一般采用的温度为38~40℃。
2. 本实验中所用的PEG融合方法能否用于植物细胞?为什么? 答：本实验所用PEG融合方法不能直接用于未脱壁植物细胞的融合，因为植物 细胞具有细胞壁，PEG无法介导其细胞融合;但是，如果将植物细胞进行脱壁处 理后，则可使用PEG融合方法进行融合实验。
7.3.4植物原生质体融合
7.4细胞融合的意义


PEG诱导融合 着重弄清楚动物细胞 融合过程。见后面 PPT。 物理法：电融合法 电融合一般经过聚集， 细胞膜融合，异核体， 融合细胞四个阶段。
7.3.3动物细胞融合
利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。 学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的 膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双 层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复 时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟通, 从而造成相互接触的细胞之 间发生融合。 利用PEG介导细胞融合, 其融合效果受以下几种因素的影响。 1. PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比; 但PEG的分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二 者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000，浓度一般为 40~60%。 2. PEG的pH值: 经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。 3. PEG的处理时间: 处理时间越长，融合效果越好, 但对细胞的毒害也 就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。本实验中细胞融合后无 需继续培养, 故处理时间可适当放宽至数分钟。 4. 融合时的温度: 由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融 合效果也与温度成正比。因此，为了获得更好的融合效果 , 在细胞可能 承受的温度范围内可适当提高处理的温度。对于哺乳动物的细 , 一般采 用的温度为38~40℃。
7.3细胞融合
7.3.1融合材料 7.3.2细胞融合方法 7.3.3动物细胞融合 7.3.4人造细胞
细胞融合 定义：是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形 成一个细胞的技术。 基因相同的细胞融合成的细胞称为同核体，来自不同的基 因型的融合细胞则称为异核体。 对称融合即两个完整的细胞间的融合。 不对称融合即利用物理或化学方法使亲本的核或细胞质失 活后再与另外一个完整的细胞融合。 细胞融合过程： 靠近——接触——胞质接触——核融合——筛选鉴定
7.3.1融合材料
原生质体制备：酶解法
注意：对于植物细胞而言，才需用到此方式。请 分析植物细胞壁的成分。 原生质体纯化：离心法，漂浮法，离心和漂浮结 合法。
7.3.2细胞融合方法
7.3.2.1生物法

步骤
源自文库

病毒诱导细胞融合主要 是由于病毒会与宿主细 胞直接融合，同时进入 两个细胞就会打破细胞 膜的隔阂，引发细胞质 的交流。 常用灭活病毒：仙台病 毒，疱疹病毒，牛痘病 毒和副粘液病毒等。