大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.

试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

（一）概述

大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：

O

OH

R 2

OH

R 1

12-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH

大黄素(Emodin)

橙色针晶 256~257℃ -H

-CH 2OH 芦

荟

大

黄

素

(Aloe-emodin)

橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H

-CH 3

大黄酚(Chyrsophanol)

金色片状结

晶

196℃

大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。 （二）实验目的和要求

1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。

2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。

3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。

4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。 （三）实验方法

1．大黄总蒽醌苷元的提取

大黄粗粉（100g）

加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，

水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。

残渣氯仿提取液（约450ml）

注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。2．总蒽醌苷元分离方案的设计

①大黄总蒽醌苷元的纸色谱

②蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验

③最佳萃取剂及其用量的确定

各种萃取剂用量的确定

新分离方法的设计

蒽醌类成分的分离与精制

大黄酸的分离与精制

将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。

大黄素的分离与精制

将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。

芦荟大黄素的分离和精制

余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。

④大黄酚和大黄素甲醚的分离——磷酸氢钙柱色谱

蒽醌类成分的鉴定

①纸色谱鉴定

②IR光谱解析

（四）实验指导

1．本实验讲解要点及注意事项。

①PH梯度萃取的原理及注意事项。

②如何设计萃取分离方案的程序与方法。

③蒽醌化合物红外光谱的特点。

④分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。

⑤缓冲液的配制和碱液的配制要准确，严格注意检查。

每步萃取时，利用纸色谱检查跟踪萃取效果，如未达到预想效果应及时纠正。2．实验报告要求

①记录大黄总蒽醌的提取方法。

②总蒽醌的纸色谱检查结果（附色谱图）。

③总蒽醌的缓冲纸色谱结果，并说明它对总蒽醌分离方案设计有何启示。

④记录总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量），及各分离物粗品的纸色谱检查结果，与原设计有何出入，原因何在？

⑤记录大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及纸色谱、红外光谱的鉴定结果。