15.血脂检验与临床应用

四、脂蛋白代谢酶
1. 脂蛋白脂酶
Lipoprotein lipase，LPL 甘油三酯水解酶，CM/VLDL代谢中重要 心、脂肪、骨骼肌细胞合成，与毛细血管内皮细 胞表面的糖萼结合，作用于CM及VLDL内核的TG， 释出游离脂酸(FFA) 一般血浆不含LPL，固定在内皮细胞表面，注射 肝素可释放
内容
一、血浆脂蛋白
二、载脂蛋白
三、脂蛋白受体
四、脂蛋白代谢酶
五、异常脂蛋白血症 六、血脂测定 七、分析前质量 八、临床应用须知
三、脂蛋白受体
脂蛋白受体决定了血浆中各种脂蛋白的代谢去向； 决定了血浆脂蛋白的水平，决定了该组织、细胞 摄取脂蛋白的种类和量
三、脂蛋白受体
1. LDL受体
（1）LDL受体结构 糖蛋白，836aa，115kD，18个O-2个N-连接寡糖， 5个域 域Ⅰ：富Cys,负电荷簇与配体apoB100或apoE中带 正电荷相结合 域Ⅱ：与小鼠上皮细胞生长因子前体高度同源 域Ⅲ：连接糖链，支撑作用 域Ⅳ：跨膜 域Ⅴ：胞浆 4个结合位点，即结合4 个apoB100,1个apoE
二、载脂蛋白
Apo B100及apo B48的生物合成 成人B100肝脏，B48小肠 胚胎早期，小肠亦能合成B100 mRNA6666位核苷酸C→U，2153Gln →终止密码 UAA
二、载脂蛋白
Apo B基因变异 (1)无β-脂蛋白血症：常染色体隐性遗传，少 见。脂肪吸收障碍，神经性运动失调，视网膜 炎性色素沉着及棘红细胞增多。血浆CHOL及TG 降低，无apoB,VLDL,LDL,CM,apoCⅢ1。 apoB基因突变
脂 蛋 白
载脂蛋白
内容
一、血浆脂蛋白
二、载脂蛋白
三、脂蛋白受体
四、脂蛋白代谢酶
五、异常脂蛋白血症 六、血脂测定 七、分析前质量 八、临床应用须知
一、血浆脂蛋白
1. 血浆脂ห้องสมุดไป่ตู้白的分类
Sf:Svedberg漂浮率表示上浮情况 血浆脂蛋白在密度为1.063的NaCl溶液中，26℃下， 在离心力作用下，每上浮10-13cm即为1Sf单位
三、脂蛋白受体
LDL受体对含apoB100的LDL，含apoE的VLDL、β– VLDL、VLDL残粒高亲和 VLDL受体仅对含 apoE 的脂蛋白VLDL、 β – VLDL、VLDL残粒高亲和，对LDL则显著低亲和 VLDL受体肝内无，广泛分布于心肌、骨骼肌、脂 肪细胞
三、脂蛋白受体
3. 清道夫受体
2. apo结构与功能
已发现20余种，主要有apo AⅠ、AⅡ、AⅣ、B100、 B48、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E 载脂蛋白的缺乏或异常是导致血脂异常及动脉粥 样硬化的重要原因
二、载脂蛋白
异构体：某一氨基酸取代 化学修饰： (1)糖基化：apoCⅢ Ser74羟基可与1或2分子唾液 酸结合形成apoCⅢ1或 apoCⅢ2 (2)脂酰化：apoAⅠ的软脂酰化 (3)磷酸化：apoB48-Ser羟基可与磷酸结合 (4)酶解：apoCⅡ在血浆中可被蛋白酶从其N端切 去六肽生成apoC Ⅱ1/2。
一、血浆脂蛋白
4. 脂蛋白的功能
CM： 运输外源性的甘油三酯至全身各 组织 VLDL：运输内源性的甘油三酯 LDL： 运输肝脏中的胆固醇酯至周围组 织，动脉内膜下积累 HDL： 将周围组织的胆固醇运输至肝 脏，形成胆汁酸以便清除
一、血浆脂蛋白
脂蛋白(a)：由TG、PL、CHOL、CE， apoB100，apo(a)组成。动脉粥样硬化的 独立危险因子
三、脂蛋白受体
三、脂蛋白受体
（2）清道夫受体的生理功能 氧化LDL可通过清道夫受体被巨噬细胞摄取， 使其堆积胆固醇转变为泡沫细胞；同时，巨噬 细胞通过清道夫受体摄取氧化LDL，然后移出 血管壁正是一种保护作用
内容
一、血浆脂蛋白
二、载脂蛋白
三、脂蛋白受体
四、脂蛋白代谢酶
五、异常脂蛋白血症 六、血脂测定 七、分析前质量 八、临床应用须知
一、血浆脂蛋白
一、血浆脂蛋白
一、血浆脂蛋白
一、血浆脂蛋白
2. 脂蛋白结构与组成
三脂酰甘油及胆固醇酯为内核，载脂蛋白、磷 脂及胆固醇则以单分子层与内核相连系，覆盖 于脂蛋白表面。 例：LDL结构：分子量300万，球状，直径22nm， 其内核由1500个胆固醇酯分子构成，表面覆盖 有磷脂（800个分子）、胆固醇（500个分子） 及1分子apo B100。
血脂检验及临床应用
于嘉屏
血脂组成
脂质
胆固醇 游离胆固醇 胆固醇酯 磷 脂 卵磷脂 溶血卵磷脂 脑磷脂 神经磷脂 甘油酯 一酰甘油 二酰甘油 三酰甘油 糖 酯 脂肪酸 各种脂肪酸
AⅠ、A-Ⅱ、A-Ⅳ、B-100、 B-48、 Lp(a)、C-Ⅰ、C-Ⅱ、C-Ⅲ、D、 E、 E-Ⅱ、E-Ⅲ、E-Ⅳ
血 脂 组 成
二、载脂蛋白
(2)载脂蛋白 B LDL重要组成蛋白质，也存在于CM及VLDL，LDL中 95％apoB100 Apo B的结构 糖蛋白，半乳糖、甘露糖、氨基葡萄糖及唾液酸 10％ apoB100由肝脏合成，550kD，4536aa apoB48由小肠合成，550kD×48％
二、载脂蛋白
Apo B100含40％α-螺旋，25％β-片层，35％不 规则 具有多个疏水结构域，9个由22个aa组成的重复 序列，双性α-螺旋 N端1000aa外，含多个富含Pro序列，与β-片层 及β-转角有关 与脂质结合牢固，不易分开，难以交换
四、脂蛋白代谢酶
（4）LPL的基因变异 LPL缺乏症： 血浆CM及VLDL分解代谢障碍，清除延缓， 乳糜状，TG高，腹痛，常伴急性胰腺炎，常染 色体隐形遗传，1/1000 000 LPL的基因变异
四、脂蛋白代谢酶
（3）apoCⅡ对LPL的激活
二者结合增加LPL对TG及磷脂的亲和力 高浓度NaCl(1mol/L)能抑制LPL的活性，产物FFA也可抑制， 鱼精蛋白抑制 apoC ⅡN端1～50位aa系与脂蛋白中脂质的结合部位， 43～50aa可与磷脂酰胆碱结合，53～79aa为活化LPL所必 需，除去C端Gly-Glu-Glu,激活能力减少95％，55～57aa 可与LPL结合，改变LPL空间结构，增加活性 apoCⅢ抑制LPL活性，是apoC Ⅱ的非竞争性抑制剂，
体外：乙酰化LDL可以非常高的速率被巨噬细胞摄 取，导致巨噬细胞堆积脂类，并呈泡沫样外观。 发现乙酰乙酰化、琥珀酰化、与丙二醛、硫酸右 旋糖苷等结合的LDL均可与巨噬细胞以高亲和力结 合，总称清道夫受体
三、脂蛋白受体
（1）清道夫受体结构 453aa， 域Ⅰ:N-末端胞浆域，与包涵素结合 域Ⅱ：跨膜 域Ⅲ：糖链 域Ⅳ：三股索状结构 域Ⅴ：胶原蛋白样三联体螺旋 域Ⅵ：C端，富含Cys
二、载脂蛋白
(2)低β-脂蛋白血症：apoB,VLDL,LDL,CM显著 降低，apoB37。 已发现10多种基因变异、缺失或蛋白截短 (3)家族性apoB100缺陷引起的高胆固醇血症： LDL异常导致受体结合下降，引起LDL代谢障碍， 血浆LDL及CHOL升高，频率1/500。3500位密码 子CGC→CAG，导致Arg→Gln
二、载脂蛋白
两类结构域： ①Ser蛋白水解酶样，C端，与纤溶酶原高度相似 （94％），纤溶酶原Arg560-Val561可被裂解成 活性的纤溶酶，而apo(a)Ser代替Arg。 ②Kringle样，具有三个内二硫键的三环结构， 含有Lys结合区，可与纤维蛋白的Lys结合。 apo(a)含二种，1个Ⅴ37个Ⅳ，还有一Cys，可与 apoB100形成-S-S-
二、载脂蛋白
Apo B100共含25Cys，4对-S-S-，16个N-糖苷键 与LDL受体结合区域位于羧基末端 C端结构域含三个肝素结合区，成簇的正电荷 aa，如化学修饰，可阻断与受体结合。3500位 aa突变Arg→Gln，则不结合
二、载脂蛋白
Apo B的基因结构及染色体定位 2p23→ter，43kb，含29个外显子及28个内含子。 -128到-86bp之间含调控基因 B48,250kD，相当于B100N端1～2152aa序列。 羧基末端含双性α-螺旋及疏水的β-片层 缺乏与LDL受体结合的结构域 血浆含量低，B100的0.1%
二、载脂蛋白
(3)载脂蛋白(a) 脂蛋白(a):Lp(a)中除apoB100及脂质外，还有 apo(a),与apoB100-S-S-相连 Apo(a)的结构 单链，具多态性，300～800kD，含糖28％，8 ％α-螺旋，21％β-片层，71％不规则，易溶 于水。 与纤维蛋白溶酶原（791aa）碱基序列高度相 似， apo(a) 4529aa
二、载脂蛋白
apo(a)的生理功能
(1)抑制纤维蛋白溶解，促进血凝 (2)促进所携带的CE为组织细胞摄取利用：介导与LDL 受体结合，也促进动脉粥样硬化斑块形成。
LP(a)与动脉粥样硬化
独立危险因子 可通过受体途径进入巨噬细胞引起CE在细胞内堆积。 含唾液酸多，负电荷，比LDL更易结合 设想：LP(a)进入动脉壁，可与纤维蛋白的Lys结合， 复合物沉积在动脉壁而变硬。同时抑制纤溶酶原的激 活，阻滞血凝块的清除。
内容
一、血浆脂蛋白
二、载脂蛋白
三、脂蛋白受体
四、脂蛋白代谢酶
五、异常脂蛋白血症 六、血脂测定 七、分析前质量 八、临床应用须知
二、载脂蛋白
（Apolipoprotein，apo）
1. 载脂蛋白的功能
输送和结合脂溶性化合物 修饰并影响有关酶 作为脂蛋白结构的主干
调节脂蛋白代谢 对组织受体的识别
二、载脂蛋白
二、载脂蛋白
(1)载脂蛋白AⅠ apoAⅠ主要存在于HDL中，占其蛋白质总量的 60～70％，在CM中亦有少量 apoA Ⅰ的结构 243aa，28kD，富含Thr,Met，N-Asp，C-Gln，不 含Cys,Ile
二、载脂蛋白
二、载脂蛋白
apoAⅠ的功能 (1)维系HDL结构，结合及转运脂质 (2)激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶LCAT (3)作为HDL受体的配体，参与识别 (4)是胆固醇的接受体 (5)apoA Ⅰ变异 由肝和小肠合成，半寿期45天
四、脂蛋白代谢酶
（1）LPL的结构 448aa，30kb，10个外显子，11个内含子，8号 染色体 N端50aa可能是LPL与apoCⅡ结合的部位 与肝素亲和力大，肝素可稳定其结构，清除延 迟
四、脂蛋白代谢酶
（2）LPL的性质 糖蛋白，55～75kD，含糖3～10％ LPL不具胆固醇酯酶活性，但具有较弱的磷脂 酶AI的活性。 LPL对不同碳链长短的TG水解活性依次为 8:0>10:0>12:0>6:0>14:0>18:0 LPL对不饱和脂酸所构成的TG水解活性依次为 18:1>18:3>18:2>14:0>16:0>18:0
一、血浆脂蛋白
一、血浆脂蛋白
3. 脂蛋白的化学组成
蛋白质 胆固醇 甘油三酯 (%) 游离(%) 酯化(%) (%) 乳糜微粒(CM) 1-2 1-3 2-4 80-95 VLDL(pre-β) 6-10 LDL（β） 18-22 HDL（α） 45-55 4-8 6-8 3-5 16-22 45-50 15-20 45-65 4-8 2-7 磷脂 (%) 3-6 15-20 18-24 26-32
二、载脂蛋白
Apo B的生理功能 (1)维系VLDL、LDL及CM的结构，结合及转运脂质 (2)可与肝素及特异蛋白聚糖结合：7个结构域， 富含碱性aa，可协助富含TG的CM及VLDL与毛细血 管内皮细胞结合，脂蛋白脂酶作用。可与动脉壁 的蛋白聚糖及糖胺多糖结合，沉积，动脉粥样硬 化 (3)与LDL受体结合：VLDL覆盖
三、脂蛋白受体
三、脂蛋白受体
（2）LDL受体基因 4.5kb，18个外显子，17个内含子，19号染色体 （3）LDL受体的生命周期和功能
三、脂蛋白受体
三、脂蛋白受体
2. VLDL受体
域Ⅰ：配体结合结构（55％相同） 域Ⅱ：EGF前体结构（52％相同 域Ⅲ：含糖基结构（19％相同） 域Ⅳ：跨膜结构（32％相同） 域Ⅴ：胞液结构（46％相同）