海南罗非鱼无乳链球菌分离鉴定及其特性研究

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ａ ａａｔ ｅ 和海豚链球 菌 （ｔｐｏｏｃｓ ｎ ｅ 。 ｇ ｌｃａ ） ｉ Ｓｒ ｔ ｃ ｉ ） ｅ ｃ ｕ ｉａ 本研究在链球 菌病暴 发 区的罗非鱼病 鱼上分 离病 原菌， 通过生理生化 和 １ Ｓｒ Ｎ ６ Ｒ Ａ基 因序列分 析等方法 鉴 定其 种类 ， 并对分 离菌 株进行 了药 敏试验 及人 工感
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充血 、 身体难 以保持平衡 、 腹水 、 胆囊肿大等症状 。
收 稿 日期 ：０ １ ６—２ 修 回 日期 ：０ １ ７—２ ２ １ —０ ３； ２ １ —０ ８
水 生动 物致 病性 链 球 菌属病 原 菌种 群种 类 并不
） 、 无乳链球 菌 （ ｔｐ ｃｃｕ ｇ ｌｃａ ） 、 Ｓ ｅｔ ｏｃｓ ａａｔ ｅ 海豹链 ｒ ｏ ａ ｉ
作者简介 ： 周 清（９ ７一）女 ， ｊ， 力 为水 产 ｌ防治 １８ ， 硕 ：々 ； ＝
究 ， ｍａ ：ｈ“ ｉ ｈｓ ｎ＠ １６ ｒ１； Ｅ－ ｉ ｚＩ ｑＩ ｅｔ ｅ ．０－ ｌ １ １ ｏ ｇ ２ ｉ １
通 讯 作者 ： 锦 玉 （９ ３一）女 ， 江 湖州 人 ， 研 究 员 ，＿ 从 沈 １６ ， 浙 硕 ＿要 事 水 生 动 物 病 害 防治 研 究 ， ． ａｌｓ ｎｕ Ｉ６ “ｍ Ｅ ｍ ｉ ｊ ｙ ＠ ２ ． ：ｉ
第２ ９卷第 ２期
２１ ０ ２年 ４月
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牛 物 学 志
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海 南 罗 非 鱼 无 乳 链 球 菌 分 离 鉴 定 及 其 特 性 研 究
周 清 ， 锦玉 徐 沈 ， 洋。 姚嘉赞 潘 晓艺。 郝 贵杰。 尹文林 ， ， ， ，
（ ．宁波 大 学海 洋学 院 宁波 ３ ５ １ ； ．浙 江省淡 水水 产研 究所 ，浙 江湖 州 ３ ３ ０ ） １ １２ １ ２ １０ １
ｃｃｔ ｄｓａ ｃａ ） ｏｃｓ ｙｇ ｌ ｔ ｅ 等。迄今 为 止 ， 内外 报道 的 ｔ ａｉ 国 感 染 罗 非 鱼 的链 球 菌 主 要 有 无 乳 链 球 菌 （ ｔｐｏｏｃｓ Ｓｒ ｔ ｃｕ ｅ ｃ
２ ７
第２ ９卷第 ２期
２１ ０ ２年 ４月
生 物 学 杂 志
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球 菌 （ ｔｐｏｏ ｕ ｐ ｏａ ） Ｓｒ ｔ ｃ ｓ ｈｃｅ ｅ ｃｃ 和 停 乳 链 球 菌 （ ｔｐｏ Ｓｒ ｔ ｅ —
已 Ｓｒ ｔ ｃｕ ｎ ｅ ｃ 一 资助项 目： 湖州 市科技 攻关计划项 日（０ ０． Ｏ ） ２ １ （ ２ 及通威公 司资助 多 ， 报 道 的 主 要 有 海 豚 链 球 菌 （ ｔｐｏｏｃｓｉｉ Ｇ
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菌 同 源 性 高达 １０ ， 一 步确 定 分 离 菌株 为 无 乳 链 球 菌 。 人 工 感 染 显 示 分 离菌 株 对 小 白 鼠 和 罗 非 鱼 均 具 有 致 病 ０％ 进 性 ， 小 白 鼠 的 Ｌ ５ １０ｘ１ Ｃ Ｕ ｍ 对 体 重 为 ５０ ２ ｇ的 罗非 鱼 的 Ｉ 为 １７ ９×１ Ｆ ／ Ｌ 分 离 菌株 对 Ｄ０ ． 为 ０ Ｆ／ｌ ， ０ ｇ± ０ Ｄ ．２ ０Ｃ Ｕ ｍ 。
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２０ ０ ９年 ， 几乎整个华南 地 区养 殖 的罗非 鱼都暴 发 了大规模链球菌病 ， 该病一直未能得 到很 好 的防治 ， 被
广大养殖户称为 “ 绝症 ” 病鱼死 亡 率达 ８ ％ 以上 ， ， ０ 给
养 殖 户 造 成 了 巨 大 的 经 济 损 失 。病 鱼 出 现 突 眼 、 盖 鳃
对氯霉素 、 青霉素 Ｇ、 呋喃妥 因等敏感 ， 对丁胺 卡那 、 链霉素 、 卡那霉素等 不敏 感。
关键 词 ： 非 鱼 ； 乳 链 球 菌 ； 定 ； 病 性 罗 无 鉴 致
中 图 分 类 号 ： ９９ ９ ；９ １４ Ｑ ３ ．６ ￥４ ．２
文 献 标 识 码 ： Ａ
文章编号 ： ９ ２ ５—１３ （ ０ ２ ０ ０ ２ ０ ７ ６ ２ １ ） ２— ０ ７—０ ４
对 分 离菌 株 的 １Ｓｒ Ｎ 基 因进 行 Ｐ Ｒ 扩 增 和 测 序 ， 得 序 列 已登 录 到 Ｇ ｎ ａｋ 登 录 号 为 Ｈ ６ ５ ８ ， Ｇ ｎ ａ ｋ ６ Ｒ Ａ Ｃ 所 ｅＢｎ ， Ｑ ４ ９ ３ 与 ｅＢ ｎ
中收录 的链球 菌 １ Ｓｒ Ｎ ６ Ａ基 因进 行比对并构建 系统进化树 ， Ｒ 结果表明 ， 离菌株 的 １ Ｓｒ Ｎ 分 ６ Ａ基 因序列与无乳链球 Ｒ
染 实验 ， 以期 为 罗 非 鱼 链 球 菌 病 的 防 治 和 进 一 步 研 究
弓 物 Ｐ ５ 一 ＡＧ ＧＧ Ｇ Ｔ Ｃ ＧＣ Ｇ Ａ一 。 ５ Ｌ Ｉ ２： Ａ ＧＡ Ｔ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｃ ３ ０
Ｐ Ｒ反应体 系 ： 板 Ｄ Ａ １ Ｌ Ｔ ｑ酶 ０ ５ Ｉ 、０Ｘ Ｃ 模 Ｎ 、 ａ ． Ｌ １ ｘ Ｔ ｑｂ ｆ ｒ ， 、 ａ ｕｆ Ｌ 引物各 １／ 、Ｎ Ｐ１ｔ 、 纯水 ４ ． ｅ ５／ ， ｄＴ ｘ 超 Ｌ Ｌ ０５ ｔ ； ｘ 反应 条件 ：４ Ｌ ９ ℃预变性 ５ｍｎ ９ ｏ ４ Ｓ５ ｏ ０Ｓ ｉ； Ｃ ４ ，２Ｃ ６ ， ４
摘 要 ： 海 南 省 惠 暴发 性 疾 病 的 罗非 鱼 （ ｉ ｐａ 上 分 离 出 ｌ株 细 菌 Ｈ Ｉ Ｙ ．， 分 离 菌株 进 行 了鉴 定 及 致 病 性 从 Ｔｌ ｉ） ａ Ｎ Ｉ 对 Ｆ ４
和药物敏 感性研究。通过形 态学观 察和 生理 生化鉴定 ， 结果显示 ， 离菌株 为无乳链球 菌（ ｔｐｏｏｃｓ ｇ ｌｃａ ） 分 Ｓ ｅｔ ｃｔ ａ ｔ ｅ 。 ｒ ｃ ａａ ａ ｉ