光激化学发光的应用教材

样品臂 枪头架 微孔板
试剂臂 试剂仓
试管架 废物盒
紧急暂停按钮
开关机按钮
试剂托盘 样本架
试剂仓
样本仓
此微孔板非彼ELISA板
未包被任何抗原/抗体
LiCA HT 均相发光免疫分析仪
上盖板 托盘
通用液位置
清洗液位置
HT微孔板槽
放置好微孔板
LiCA HT 单光子计数器
1、高功率激光管发出的激发光经平面反射镜反射进去微孔板微孔，激发时间为0.5—1s （时间可调） 2、受激发的微孔，移动两个孔距进入CPM光敏面区开始发光，同时CPM开始读光子数，读数 时间为0.3—1s（时间可调）
LiCA技术原理——夹心法
感光微粒— 亲和素
Hale Waihona Puke 生物素Anti-HBs激发光 680 nm
HBsAg
发光微粒Anti-HBs
发射光 610 nm
200nm
激发光 680 nm
200nm
发射光 610 nm
感光微粒— 亲和素
生物素标记 抗体
含待测抗原
发光微粒标记 抗体
激发光 680 nm
感光微粒— 亲和素
更换通用液
若需要更换通用液时，切换至HT面板，查看 通用液剩余次数，手动把通用液的黑色盖子 拨开，倒置插入过液/过气针内（有落空感 觉），点击“更换通用液”，两分钟内待更 换完毕，点击“确定”即可
结果导出
实验完成后，切换至任务界面，状态选择 “全部”，类型选择“样本”，项目选择 “全部”，历史查询选择“今天”，点击 “导出LIS”，保存至LIS信息系统接收文件夹 内；
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耗材准备
点击“弹出SP”按钮，从冰箱取出试剂托盘，开 试剂盖，点击“试剂”界面，查看试剂信息（对 未扫入试剂，采取手工输入或更换试剂位置处理）
在SP加样仪上查看加入足量枪头和微孔板（若遇 到有微孔板前面有已使用的孔位，先到“SP微孔 板”界面，选择废弃孔位，点击“禁用选中”）
在HT面板查看通用液次数是否够本次试验使用启 动加样
1、校准品、校正液、质控品最少不低于250ul，故一瓶能用 5次左右，上机前保证没有气泡；标本量最少不低于200ul （看该标本所做项目来定）；标本离心时尽可能时间长点， 确保血清内无血丝等影响结果的因素；
2、定标时，容易忘记的是根据说明书输入浓度和在试剂界 面选择试剂条码处点击定标；
3、SP加样仪可以加样完成后，即可关机，而HT原则上是 24小时上不关机；
工作 原理
基本 结构
LiCA
操作 使用
维护 保养
操作使用
开机
开启SP加样仪、电脑主机、显示器电源 电脑桌面双击“LiCA Touch”图标，输入用户
名1，密码1
样本输入
批量输入：对已占用试管架输入无效，必须从空试 管架输入样本输入
依次点击：批量输入→起始管架号→起始编号→结 束编号→选择项目→点击确定；
校准品说明书输入浓度和验证码→点击保存→点击 确定；定标 2、点击到“试剂”界面，选中定标项目试剂条码， 右键单击“定标”，为定标项目分配试管架号； 3、点击“试管架”界面，在“空闲”处加载定标 架及校正液管架号，确定试管类型（科室试管类型 选“0”类，厂家校准品、质控品、校正液选“1” 类）；乙肝两对半校准品管架号为100号。
单击“试管架”界面，在空闲处加载样本管架号， 选择容器类型“0”类（同时加载校正液管架号 100），点击确定；（确保本界面的样本位置与SP 加样仪样本区的位置一致）
切换至任务界面，选择为“等待”状态，核对样本 信息无误
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单个项目录入
批量录入
批量录入
定标
依次点击： 1、设置校准品→设置浓度→选中定标项目→根据
操作流程示意图
样品的准备 平衡校准品/定标品
开机
前期准备 新批号试剂
定标过期
是 是 定标
校准
输出结果
转板
HT工作
SP工作
工作 原理
基本 结构
LiCA
操作 使用
维护 保养
日保养
实验结束，进行日保养：
1、点击SP“弹出SP”，取出试剂旋上试剂盖， 放回冰箱，把标本归位；按右边黄色按钮听 到“嘀”一声关机，倒掉废枪头；
LiCA-HT 光激化学发光的应用
LiCA HT 均相发光免疫分析仪
LiCA SP 移液工作站
工作 原理
基本 结构
LiCA
操作 使用
维护 保养
在均相条件下，将待测样品与含有发光材料的发光微球（纳 米级）以及含有感光材料的感光微球（纳米级）等试剂进行 混合，由于在发光微球与感光微球表面连接有生物活性分子 （抗体或抗原等），可以直接或间接地捕捉待测样品中的靶 分子，从而形成发光微球、靶分子和感光微球的免疫夹心复 合物。
生物素标记 抗体
不含待测抗原
发光微粒标记 抗体
LiCA技术原理
——两种微粒
感光微粒
发光微粒
➢ 直径：200nm ➢ 包被亲和素 ➢ 红色激光680nm照射
释放单线态氧
➢ 直径：200nm ➢ 用于包被抗体/抗原 ➢ 接受单线态氧
产生610nm光
工作 原理
基本 结构
LiCA
操作 使用
维护 保养
LiCA SP 移液工作站
掀开HT分析仪外盖，检查清洗液量（无清洗液时， 用蒸馏水代替）
启动加样
点击“启动加样”按钮，切换至SP微孔板界 面，查看排板信息
转移
加样完成后，音乐响起，先转移微孔板至HT （微孔板顺序，SP从里到外，HT从左到 右），安放听到“嘀”一声响，点击“完 成”，切换至HT面板，查看整体进度时间， 由仪器自动完成温育I、加样、温育II、读数 等步骤；
激发光照射后，感光微球被诱导激活，并释放高能态的活性 氧分子。该高能态的活性氧分子在近距离被发光微球俘获， 从而传递能量以激活发光微球中的发光化合物。数微秒后， 发光微球中的发光化合物将释放出高能级红光，用单光子计 数器测定这些高能级光子，并通过电脑将光子数换算为靶分 子浓度。而当样本不含靶分子时，无法形成免疫夹心复合物， 虽然在激发光照射下活性氧离子从感光微球中释放，但无法 到达发光微球，即在液相中迅速淬灭，检测时则无高能级红 光产生。
2、切换至HT面板，点击“重置微孔板”， 取出微孔板，关闭HT微孔板，倒掉HT废液；
3、单击软件左上角仪器图标，选择“退出” 系统，确定，关闭电脑；
周保养
SP：用纱布沾少量的无水乙醇，清洗两臂的 加样枪金属枪头；
HT:一周周期完成实验时，抽空检查清洗液瓶 内的容量是否少于瓶的1/4；
注意事项