沉默氯离子通道蛋白1基因表达对胃癌细胞的影响
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
㊀㊀基金项目:河南省基础与前沿技术研究计划项目(１３２３００４１０１０６)
作者单位:４７１００３㊀洛阳ꎬ河南科技大学第一附属医院肝胆外科通讯作者:马鹏飞ꎬ电子信箱:８１２８３３２５９＠ｑｑ.ｃｏｍ
沉默氯离子通道蛋白１基因表达对胃癌细胞的影响
马鹏飞㊀孙君军㊀郑幼伟㊀刘伟峰㊀张晓辉㊀张小博
摘㊀要㊀目的㊀观察沉默细胞内氯离子通道蛋白１(ｃｈｌｏｒｉｄｅｃｈａｎｎｅｌｐｒｏｔｅｉｎ１ꎬＣＬＩＣ１)的基因表达后对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞增值㊁侵袭㊁迁移以及周期和凋亡的影响ꎮ方法㊀化学合成针对ＣＬＩＣ１的靶向ｓｉＲＮＡ(ＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡ组)ꎬ以转染脂质体试剂细胞(ＭＯＣＫ组)和空白细胞(ＣＴＲＬ组)作为对照ꎮ用ＭＴＴ㊁流式细胞术以及Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ分别观察细胞的增值㊁周期㊁凋亡㊁侵袭和迁移能力的变化ꎮ结果㊀转染２４ｈ㊁４８ｈ和７２ｈ后ꎬＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡ组与ＭＯＣＫ组㊁ＣＴＲＬ组相比ꎬ其增殖能力均显著增强(Ｐ<０.０５)ꎻ转染４８ｈ后ＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡ组Ｇ２/Ｍ期细胞明显增多(Ｐ<０.０５)㊁凋亡率显著降低(Ｐ<０.０５)㊁侵袭及迁移细胞数明显下降(Ｐ<
０ ０５)ꎮ结论㊀ＣＬＩＣ１在胃癌的发生㊁发展及侵袭迁移中过程发挥重要作用ꎮ
关键词㊀胃癌㊀ｓｉＲＮＡ㊀ＣＬＩＣ１中图分类号㊀
Ｒ７３㊀㊀㊀㊀文献标识码㊀
Ａ㊀㊀㊀㊀ＤＯＩ㊀１０.１１９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１６７３￣５４８Ｘ.２０１８.１０.０２４
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＳｉｌｅｎｃｉｎｇＣｈｌｏｒｉｄｅＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＣｈａｎｎｅｌⅠＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｔｈｅＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ.㊀ＭａＰｅｎｇｆｅｉꎬＳｕｎＪｕｎｊｕｎꎬＺｈｅｎｇＹｏｕ￣
ｗｅｉꎬｅｔａｌ.ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙꎬＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＨｅｎａｎ４７１００３ꎬＣｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｌｅｎｃｉｎｇＣＬＩＣ１ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｍｉｇｒａｔｏｎꎬｉｎｖａｓｉｏｎꎬｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｎｄ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＢＧＣ－８２３.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｓｉＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇＣＬＩＣ１ｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＢＧＣ－８２３ｃｅｌｌｓꎬｗｈｉｌｅＢＧＣ－８２３ｃｅｌｌｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００ａｎｄｖａｃａｎｔＢＧＣ－８２３ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌｓ.ＵｓｉｎｇＭＴＴａｎｄｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙꎬｗｅｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｐｏｐｔｏｓｉｓꎬｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆＢＧＣ－８２３ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌｉｃ１ｇｅｎｅｗａｓｉｎｈａｂｉｔｅｄ.Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｃｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎｗａｓａｓｓｅｓｓｅｄｂｙｔｒａｎｓｗｅｌｌｃｈａｍｂｅｒ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＣｏｍｐａｒｅｄＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐｗｉｔｈＭＯＣＫｇｒｏｕｐａｎｄＣＴＲＬｇｒｏｕｐꎬａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｉｎｇ２４ｈꎬ４８ｈａｎｄ７２ｈｗｉｔｈＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡꎬｔｈｅｅｎｅｒｇｙｏｆｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＢＧＣ－８２３ｃｅｌｌｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ(Ｐ<０.０５).Ａｆ￣ｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｉｎｇ４８ｈｗｉｔｈＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡꎬｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｃｅｌｌｓｉｎＧ２/Ｍｐｅｒｉｏｄｉｎｃｒｅａｓｅｄ(Ｐ<０.０５)ꎬｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｅｌｌｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｒｅｍａｒｋａｂｌｙ(Ｐ<０.０５).Ａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｃｅｌｌｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｄｒａｓｔｉｃａｌｌｙ(Ｐ<０.０５).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＣＬＩＣ１ｍａｙｐｌａｙ
ａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ.
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＧａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎻｓｉＲＮＡꎻＣＬＩＣ１
㊀㊀胃癌在全球癌症致死原因中排第２位ꎬ在我国更是高发[１]ꎮ复发和转移是导致其治疗失败的重要原因ꎬ如何抑制肿瘤细胞侵袭和转移是治疗胃癌亟待解决的问题ꎮ氯离子通道蛋白１(ＣＬＩＣ１)在正常胃组织中有少量的表达ꎬ而在胃癌组织中过表达ꎬ并且ＣＬＩＣ１与淋巴结和周围神经的侵袭㊁迁移及病理分期密切相关ꎬ提示它是一个潜在的肿瘤标志物[２]ꎮ本研究中ꎬ笔者通过ＲＮＡ干扰技术沉默胃癌细胞中ＣＬＩＣ１的表达ꎬ探讨其发生㊁发展机制ꎮ
材料与方法
１.试剂和材料:脂质体２０００(Ｌｉｐｏ２０００)购自美
国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司ꎻＭＧＣ－８２３购自中国科学院上海
细胞库ꎻ周期和凋亡试剂盒购自南京ＫｅｙＧＥＮ公司ꎻＴｒａｎｓｗｅｌｌ购自美国Ｃｏｒｎｉｎｇ公司ꎻＭＴＴ(噻唑蓝)购自美国Ｓｉｇｍａ公司ꎮ
２.胃癌细胞ＭＧＣ－８２３的培养:将ＭＧＣ－８２３培养于３７ħꎬ５％ＣＯ２饱和湿度的培养箱内培养ꎬ细胞培养液ＤＭＥＭ中加入１０％胎牛血清ꎮ
３.ｓｉＲＮＡ合成:参照文献[３]于上海吉玛公司合成适宜的ｓｉＲＮＡ片段ꎮ
４.细胞转染与分组:实验分为３个组:①空白对照组(ＣＴＲＬ组)ꎻ②脂质体对照组(ＭＯＣＫ组)ꎻ③ＣＬＩＣ１ｓｉＲＮＡ组ꎻ用Ｌｉｐｏ２０００做瞬时转染ꎻ参照前期实验[３]用标记带有荧光的阴性对照ｓｉＲＮＡ优化转染条件ꎬ评价转染效率ꎻ用实时定量ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测沉默前后ＣＬＩＣ１基因及蛋白的表达情况ꎮ
５.噻唑蓝(ＭＴＴ)法检测细胞增殖:转染后分别于
７８