益气复脉胶囊中五味子醇甲的含量测定-精选文档

益气复脉胶囊中五味子醇甲的含量测定

为控制益气复脉胶囊的质量指标，笔者建立了益气复脉胶囊中北五味子主要成分五味子醇甲的反相高效液相色谱法

（RP-HPLC含量测定方法，以有效控制该制剂的质量，为新药

开发提供试验数据。

1.仪器和试剂

1.1 仪器

SP D-IOAvp检测器（日本岛津）、LC-1OATV p高压泵（日本

岛津）、工作站：N2010色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究院）、UV- 1 700型紫外分光光度计（日本岛津）。

1.2 试剂与用药

乙醚、甲醇（色谱纯）、超纯水、五味子对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号：110857-200405 供含量测定用）。

益气复脉胶囊：海口奇力制药XX公司生产。规格：每粒重

0.37g ，批号：120201 。

2. 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

取五味子醇甲对照品适量，加流动相溶解并稀释制成一定浓

度的溶液。取上述溶液，以流动相为空白，在200nm- 400nm范

围内扫描，试验结果表明五味子醇甲在250nm处附近有最大吸

收。同时，参考中国药典2005 年版一部五味子药材标准中五味子醇甲含量测定的检测方法，拟选用250nm作为本品检测波长的选择。

2.1.2流动相的选择

流动相1：甲醇- 水=73：27；检测波长为250nm色谱柱为

Shimadzu VP-ODS (150X 4.6mm) 日本岛津），进行检测，结

果五味子醇甲色谱峰的保留时间为 4.399min ，与相邻杂峰的分

离度为1.177〈1.5 ，拖尾因子为 1.050 ，理论塔板数为

3709.8>2500；试验结果表明色谱条件不能满足含量测定的要求，

因此暂不选用该流动相体系。

流动相2：甲醇- 水=65：35；检测波长为250nm色谱柱为

Shimadzu VP-ODS (150X 4.6mm 日本岛津），进行检测，结

果五味子醇甲色谱峰的保留时间为 6.886min ，分离度为5.278 ，

拖尾因子为0.994 ，理论塔板数为3001.4>2500；试验结果表明

该色谱条件可满足含量测定的要求，因此，决定选用该流动相体

系。

2.2色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以Shimadzu VP-ODS

（150X 4.6mm （日本岛津）为色谱柱；流动相为甲醇-水=65: 35;检测波长为250nm流速：1.0ml/min，柱温：30C。理论

板数按五味子醇甲峰计应不低于2500，五味子醇甲峰与各其他

成分峰的分离度应符合要求。

2.3

溶剂空白试验 表 1.2 进样精密度测定结果

试验结果表明，其RSD 为0.23% 2.10.1 色谱条件与

取甲醇 20ul 注入液相色谱仪。试验结果表明溶剂对本品含 量测定无干扰。 2.4 阴性样品试验

按处方工艺自制成不含五味子药材的阴性样品， 同含量测定 项下供试品溶液的制备方法，制备成阴性样品溶液。取 20ul 注 入液相色谱仪。 试验结果表明阴性样品溶液对本品含量测定无干 扰。

2.5 线性关系试验

精密称取于60C 真空干燥至恒重的五味子醇甲对照品

5.3mg ,置于50ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，

置于 10ml 容量瓶中， 加甲醇稀释至刻度。 取上述溶液各 20ul 注 入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表 1.1 ，如下图：

表 1.1 线性关系试验结果

经线性回归分析，在10.60〜31.80 U g/ml 范围内，直线方

程 Y=91289x+10392， r=0.9999 ，线性关系良好。

2.6 进样精密度试验

取重复性试验项下的一份供试液， 连续进样 6 针，记录色谱

图。试验测定结果见表 1.2：

制成母液。分别精密量取上述母液

1.0 、1.5 、

2.0 、2.5 、

3.0ml

系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水=65：35为

流动相；Shimadzu VP-ODS （150X 4.6mm （日本岛津）为色谱

柱；检测波长为250nm流速为 1.0ml/min ;柱温为30C。理论

板数按五味子醇甲峰计应不低于2500[7] 。

2.10.2 对照品溶液的制备

精密称取五味子醇甲对照品 5.0mg，置50ml量瓶中，用甲

醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶液5ml 至25ml 量瓶中，用甲醇定容，即可。（每1ml溶液中含五味子醇甲20.00 U g）。

2.10.3 供试品溶液的制备

取重量差异项下的本品，研细，精密称定约0.8g，置25ml

量瓶中，加水约20ml，超声处理使完全溶散，放冷，加水稀释

至刻度，摇匀。精密量取上述溶液10ml，置分液漏斗

醚提取5次，每次15ml，合并醚液，用水洗涤2次，每次10ml, 水洗涤液再用乙醚10ml回提一次，合并醚液，60C〜80C减压浓缩至干，残渣加甲醇适量使溶解，并分次转移至10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.10.4 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 U l，注入液相

色谱仪，测定，即得。

精密称取样品，照含量测定项下的方法测定，结果见下表

2.10.5 含量测定结果