常规硅藻检验法的改良
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参考文献
［1］Gill P，Jeffreys A J，Werrett D J. Forensic application of DNA‘fingerprints’［J］. Nature，1985，318（ 6046） ： 577-579.
［2］郑秀芬 . 法医 DNA 分析［M］. 北京： 中国人民公安大学 出版社，2002： 44-45.
［3］Tsukada K，Asamura H，Ota M，et al. Sperm DNA extraction from mixed stains using the Differex TM System［J］. Int Congr Ser，2006（ 1288） ： 700-703. （ 收稿日期： 2010-05-12）
1 材料与方法
2结果
1. 1 检材选择
样本只选取溺死者的肺组织和现场对照水样。 肺组织 两 份，每 份 100g； 现 场 对 照 水 样 两 份，每 份 500mL，分别用传统方法和改良方法检验。 1. 2 方法
1. 2. 1 传统检验方法 肺组织 将肺组织用蒸馏水冲洗后剪去外周组
织，取中心部位组织约 20g 置于 500mL 容量烧杯中充 分剪碎，将烧杯放在电炉上边加热边用玻棒搅拌，使 肺组织中的水份尽可能多的蒸发掉。冷却后加入3 ～ 5mL 无水乙醇并搅拌混匀，再加入 25 ～ 35mL 浓硝酸 混匀，放置于通风柜内，待其充分反应消化至棕色气 体和泡沫释放完毕为止。如果组织未完全消化，可再 将烧杯放在电炉上稍微加热，直至组织完全液化。将 破机处理的检液冷却后移入离心管内，加蒸馏水离心 2000 转 / min 、15min，去上清。如此反复多次，直至烧 杯内液体完全离心完毕，保留约 0. 3mL 沉淀液制片， 镜检［1］。
日常办案中，硅藻检验常用的方法是硝酸酒精破 机法，但如遇到脂肪的干扰，可能影响检验结果。为 了减少人体组织脂肪对硅藻检验的影响和对现场对 水样的快速处理，笔者对传统的硝酸破机法进行了改 良，使操作更为简单，适用，现报道如下。
溶解于丙酮中，最后将所有液体移入离心管内离心。 离心步骤同传统方法。
水样 对照水样破机处理的改良方法为煮沸法： 即把水样置于烧杯中直接加热煮沸，再将检液离心制 片，镜检。
工作实践证明，脏层胸膜在硝酸破机处理过程中 会产生一些炭末，影响对硅藻的镜检。另外，由于脏
层胸膜下的肺组织远离气管或支气管，属于循环的边 缘部位，此处检出硅藻的意义明显大于其它部位的肺 组织。所以，检验时的取材，应选择去掉脏层胸膜后 的边缘肺组织为佳，而非某些文献报道的中心部位的 肺组织。
工作实践证明，充分剪碎脏器组织并尽量加热蒸 发掉其中的水份，其作用是防止破机过程中产生过量 的泡沫，可以缩短破机液化处理的时间，但在加热蒸 发脏器中 的 水 份 时，不 能 加 热 过 度 导 致 脏 器 组 织 炭 化，否则会因炭末遮盖硅藻而影响镜检。如果在破机 过程中产生大量的泡沫并将溢出烧杯口外时，可以用 玻璃棒轻轻在杯中搅动，泡沫将很快塌陷消失。
比较水样的两种破机处理方法，经改良的煮沸法 操作简单，可以减少污染环节和缩短检验时间，此法 处理的硅藻镜检非常清晰，形态非常完整。
参考文献
［1］湖南省公安厅科技小组 . 硅藻检验在法医学上的应用 ［C］. 西安： 第一届全国法医学术讨论会论文选编，1981： 22-26.
［2］中华人民共和国公安部 . GA / T 813 － 2008 人体组织器官 中硝酸破机法检验［S］. 北京： 中国标准出版社，2008.
中国法医学来自百度文库志 CHIN J FORENSIC MED 2011 年第 26 卷第 4 期
常规硅藻检验法的改良
林小健
（ 遵义市公安司法鉴定中心，贵州 遵义 563000）
【关键词】法医病理学； 溺死； 硅藻检验； 改良方法
【文献标识码】B
【文章编号】1001 － 5728（ 2011） 04 － 0325 － 02
现在市场上能够溶解脂肪的化学品很多，如洗衣 粉、肥皂、汽油和丙酮等等，但能够用于硅藻检验的却 很少。洗衣粉和肥皂会产生大量的泡沫； 汽油不溶于 水，如果用于溶解脂肪，还需要使用分液漏斗等仪器 对水相和有机相进行分离，操作较为麻烦。丙酮能溶 解油脂，并能与水互溶，实践证明能很好地应用于硅 藻检验。但在使用丙酮时要注意： 由于丙酮易挥发且 易燃，所以在检验时要避开火源，不能在高热条件下 使用，最好选择在有通风防尘条件的通风柜内进行。 肝、肾等脏器的处理与肺组织的检验方法相同。
笔者总结后认为，应用 DifferexTM系统法时需注意 以下几点： ①高速振荡时需保持离心管垂直，以便使 悬壁液体聚集在管底。②相分离和差速离心后进行 管壁洗涤时，需将液面界面处的细胞碎片彻底漂洗干 净，否则会导致混合分型，切记洗涤时不可扰动管底 沉淀。 ③ 管 盖 处 的 黄 色 消 化 液 在 漂 洗 前 应 用 KINWAP 无尘纸彻底吸取干净，吸取不彻底也会出现 混合分型。④DNA IQTM法提取时，特别是镜检精子量
【作者简介】林小健，男，主检法医师，主要从事法医物证和法 医病理损伤鉴定。E-mail： lin200320999@ sina. com
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中国法医学杂志 CHIN J FORENSIC MED 2011 年第 26 卷第 4 期
3讨论
内脏的硅藻检验方法，据文献报道，有化学消化 法、焚烧法、浸渍法、硅胶梯度离心法等［3］，报导中多 是采用实 验 动 物 或 新 鲜 尸 体 的 内 脏 标 本 进 行 研 究。 可能是由于标本脂肪含量较少，对检验结果产生的不 良影响较小的缘故，因而，文献很少提及脂肪对硅藻 检验的影响； 对水样的破机处理方法也常常一笔带 过。在笔者十余年的检案工作中，遇到的尸体 90% 以上都高度腐败，硅藻检验时，由于硅藻被包裹在大 量的脂肪里无法识别，很容易影响到检验结果的准确 性，从而影响到对案件的定性。所以，减少脂肪成份 对硅藻检验的影响，是鉴定结论准确性的关键。
经过对传统检验方法与改良检验方法进行比较， 前者脏器组织（ 尤其是严重腐败尸体） 中常常由于因 大量脂肪的存在，导致硅藻被部份甚至全部遮盖，硅 藻的检出率极低； 后者虽然不能将脏器组织中的脂肪 彻底去除掉，但制片镜检显示，改良处理后的检材，其 完整硅藻的检出率明显增加，可以充分保证检验结果 的准确性（ 图 1） 。另外，对对照水样进行煮沸法处理 的结果要优于硝酸破机法，硅藻的检出数量和形态的 完整度明显增加（ 图 2） 。
［3］祝 家 镇 . 法 医 病 理 学［M］. 北 京： 人 民 卫 生 出 版 社， 2000： 265. （ 收稿日期： 2010-05-27）
（ 上接第 310 页）
以及洗涤次数，从而影响到 DNA 提取的成功与否。 本研究通过 DifferexTM 系统法和 Chelex-100 法分
别提取 混 合 斑 样 本 的 精 子 DNA。 结 果 发 现，采 取 Chelex-100 法 时 样 本 出 现 混 合 型 的 机 率 远 超 过 DifferexTM系统法，这可能与 Chelex-100 法提取的精子 DNA 纯度不够（ 含有女性上皮细胞 DNA） 造成精子数 目相对低于 50000 个 / mL［3］有关，而采取 DifferexTM 系 统法时仅有 1 例样本出现混合分型。
水样 对照水样破机处理为传统硝酸破机法［2］： 即取水样 20mL，4000r / min 离心 15min，再用吸管吸去 上清液，往沉淀液中加入 5ml 分析纯硝酸，使充分反 应。后面离心取沉淀液的步骤同肺组织的处理。 1. 2. 2 改良检验方法
肺组织 对肺组织进行破机液化处理的方法同 传统检验方法。遂后在已液化处理的组织中加入等 量的丙酮混匀，静置约 20min，使检液中的脂肪尽可能
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较少时，95℃ 干浴 30min 这一步骤建议不可省略（ 作 业指导书中省略了此步） ，经笔者实验比较，样本经过 95℃ 干浴 30min 时电泳峰高在 2000RFU 以上，而省略 这一步骤时峰高则不到 1000RFU，有明显差别。
总的来说，Differex TM 系统法可以简单 高 效 的 获 取 精子 DNA，是一种在法医学性侵犯案件中具有很好应 用前景的方法。
［1］Gill P，Jeffreys A J，Werrett D J. Forensic application of DNA‘fingerprints’［J］. Nature，1985，318（ 6046） ： 577-579.
［2］郑秀芬 . 法医 DNA 分析［M］. 北京： 中国人民公安大学 出版社，2002： 44-45.
［3］Tsukada K，Asamura H，Ota M，et al. Sperm DNA extraction from mixed stains using the Differex TM System［J］. Int Congr Ser，2006（ 1288） ： 700-703. （ 收稿日期： 2010-05-12）
1 材料与方法
2结果
1. 1 检材选择
样本只选取溺死者的肺组织和现场对照水样。 肺组织 两 份，每 份 100g； 现 场 对 照 水 样 两 份，每 份 500mL，分别用传统方法和改良方法检验。 1. 2 方法
1. 2. 1 传统检验方法 肺组织 将肺组织用蒸馏水冲洗后剪去外周组
织，取中心部位组织约 20g 置于 500mL 容量烧杯中充 分剪碎，将烧杯放在电炉上边加热边用玻棒搅拌，使 肺组织中的水份尽可能多的蒸发掉。冷却后加入3 ～ 5mL 无水乙醇并搅拌混匀，再加入 25 ～ 35mL 浓硝酸 混匀，放置于通风柜内，待其充分反应消化至棕色气 体和泡沫释放完毕为止。如果组织未完全消化，可再 将烧杯放在电炉上稍微加热，直至组织完全液化。将 破机处理的检液冷却后移入离心管内，加蒸馏水离心 2000 转 / min 、15min，去上清。如此反复多次，直至烧 杯内液体完全离心完毕，保留约 0. 3mL 沉淀液制片， 镜检［1］。
日常办案中，硅藻检验常用的方法是硝酸酒精破 机法，但如遇到脂肪的干扰，可能影响检验结果。为 了减少人体组织脂肪对硅藻检验的影响和对现场对 水样的快速处理，笔者对传统的硝酸破机法进行了改 良，使操作更为简单，适用，现报道如下。
溶解于丙酮中，最后将所有液体移入离心管内离心。 离心步骤同传统方法。
水样 对照水样破机处理的改良方法为煮沸法： 即把水样置于烧杯中直接加热煮沸，再将检液离心制 片，镜检。
工作实践证明，脏层胸膜在硝酸破机处理过程中 会产生一些炭末，影响对硅藻的镜检。另外，由于脏
层胸膜下的肺组织远离气管或支气管，属于循环的边 缘部位，此处检出硅藻的意义明显大于其它部位的肺 组织。所以，检验时的取材，应选择去掉脏层胸膜后 的边缘肺组织为佳，而非某些文献报道的中心部位的 肺组织。
工作实践证明，充分剪碎脏器组织并尽量加热蒸 发掉其中的水份，其作用是防止破机过程中产生过量 的泡沫，可以缩短破机液化处理的时间，但在加热蒸 发脏器中 的 水 份 时，不 能 加 热 过 度 导 致 脏 器 组 织 炭 化，否则会因炭末遮盖硅藻而影响镜检。如果在破机 过程中产生大量的泡沫并将溢出烧杯口外时，可以用 玻璃棒轻轻在杯中搅动，泡沫将很快塌陷消失。
比较水样的两种破机处理方法，经改良的煮沸法 操作简单，可以减少污染环节和缩短检验时间，此法 处理的硅藻镜检非常清晰，形态非常完整。
参考文献
［1］湖南省公安厅科技小组 . 硅藻检验在法医学上的应用 ［C］. 西安： 第一届全国法医学术讨论会论文选编，1981： 22-26.
［2］中华人民共和国公安部 . GA / T 813 － 2008 人体组织器官 中硝酸破机法检验［S］. 北京： 中国标准出版社，2008.
中国法医学来自百度文库志 CHIN J FORENSIC MED 2011 年第 26 卷第 4 期
常规硅藻检验法的改良
林小健
（ 遵义市公安司法鉴定中心，贵州 遵义 563000）
【关键词】法医病理学； 溺死； 硅藻检验； 改良方法
【文献标识码】B
【文章编号】1001 － 5728（ 2011） 04 － 0325 － 02
现在市场上能够溶解脂肪的化学品很多，如洗衣 粉、肥皂、汽油和丙酮等等，但能够用于硅藻检验的却 很少。洗衣粉和肥皂会产生大量的泡沫； 汽油不溶于 水，如果用于溶解脂肪，还需要使用分液漏斗等仪器 对水相和有机相进行分离，操作较为麻烦。丙酮能溶 解油脂，并能与水互溶，实践证明能很好地应用于硅 藻检验。但在使用丙酮时要注意： 由于丙酮易挥发且 易燃，所以在检验时要避开火源，不能在高热条件下 使用，最好选择在有通风防尘条件的通风柜内进行。 肝、肾等脏器的处理与肺组织的检验方法相同。
笔者总结后认为，应用 DifferexTM系统法时需注意 以下几点： ①高速振荡时需保持离心管垂直，以便使 悬壁液体聚集在管底。②相分离和差速离心后进行 管壁洗涤时，需将液面界面处的细胞碎片彻底漂洗干 净，否则会导致混合分型，切记洗涤时不可扰动管底 沉淀。 ③ 管 盖 处 的 黄 色 消 化 液 在 漂 洗 前 应 用 KINWAP 无尘纸彻底吸取干净，吸取不彻底也会出现 混合分型。④DNA IQTM法提取时，特别是镜检精子量
【作者简介】林小健，男，主检法医师，主要从事法医物证和法 医病理损伤鉴定。E-mail： lin200320999@ sina. com
·325·
中国法医学杂志 CHIN J FORENSIC MED 2011 年第 26 卷第 4 期
3讨论
内脏的硅藻检验方法，据文献报道，有化学消化 法、焚烧法、浸渍法、硅胶梯度离心法等［3］，报导中多 是采用实 验 动 物 或 新 鲜 尸 体 的 内 脏 标 本 进 行 研 究。 可能是由于标本脂肪含量较少，对检验结果产生的不 良影响较小的缘故，因而，文献很少提及脂肪对硅藻 检验的影响； 对水样的破机处理方法也常常一笔带 过。在笔者十余年的检案工作中，遇到的尸体 90% 以上都高度腐败，硅藻检验时，由于硅藻被包裹在大 量的脂肪里无法识别，很容易影响到检验结果的准确 性，从而影响到对案件的定性。所以，减少脂肪成份 对硅藻检验的影响，是鉴定结论准确性的关键。
经过对传统检验方法与改良检验方法进行比较， 前者脏器组织（ 尤其是严重腐败尸体） 中常常由于因 大量脂肪的存在，导致硅藻被部份甚至全部遮盖，硅 藻的检出率极低； 后者虽然不能将脏器组织中的脂肪 彻底去除掉，但制片镜检显示，改良处理后的检材，其 完整硅藻的检出率明显增加，可以充分保证检验结果 的准确性（ 图 1） 。另外，对对照水样进行煮沸法处理 的结果要优于硝酸破机法，硅藻的检出数量和形态的 完整度明显增加（ 图 2） 。
［3］祝 家 镇 . 法 医 病 理 学［M］. 北 京： 人 民 卫 生 出 版 社， 2000： 265. （ 收稿日期： 2010-05-27）
（ 上接第 310 页）
以及洗涤次数，从而影响到 DNA 提取的成功与否。 本研究通过 DifferexTM 系统法和 Chelex-100 法分
别提取 混 合 斑 样 本 的 精 子 DNA。 结 果 发 现，采 取 Chelex-100 法 时 样 本 出 现 混 合 型 的 机 率 远 超 过 DifferexTM系统法，这可能与 Chelex-100 法提取的精子 DNA 纯度不够（ 含有女性上皮细胞 DNA） 造成精子数 目相对低于 50000 个 / mL［3］有关，而采取 DifferexTM 系 统法时仅有 1 例样本出现混合分型。
水样 对照水样破机处理为传统硝酸破机法［2］： 即取水样 20mL，4000r / min 离心 15min，再用吸管吸去 上清液，往沉淀液中加入 5ml 分析纯硝酸，使充分反 应。后面离心取沉淀液的步骤同肺组织的处理。 1. 2. 2 改良检验方法
肺组织 对肺组织进行破机液化处理的方法同 传统检验方法。遂后在已液化处理的组织中加入等 量的丙酮混匀，静置约 20min，使检液中的脂肪尽可能
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较少时，95℃ 干浴 30min 这一步骤建议不可省略（ 作 业指导书中省略了此步） ，经笔者实验比较，样本经过 95℃ 干浴 30min 时电泳峰高在 2000RFU 以上，而省略 这一步骤时峰高则不到 1000RFU，有明显差别。
总的来说，Differex TM 系统法可以简单 高 效 的 获 取 精子 DNA，是一种在法医学性侵犯案件中具有很好应 用前景的方法。