常规硅藻检验法的改良

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
参考文献
[1]Gill P,Jeffreys A J,Werrett D J. Forensic application of DNA‘fingerprints’[J]. Nature,1985,318( 6046) : 577-579.
[2]郑秀芬 . 法医 DNA 分析[M]. 北京: 中国人民公安大学 出版社,2002: 44-45.
[3]Tsukada K,Asamura H,Ota M,et al. Sperm DNA extraction from mixed stains using the Differex TM System[J]. Int Congr Ser,2006( 1288) : 700-703. ( 收稿日期: 2010-05-12)
1 材料与方法
2结果
1. 1 检材选择
样本只选取溺死者的肺组织和现场对照水样。 肺组织 两 份,每 份 100g; 现 场 对 照 水 样 两 份,每 份 500mL,分别用传统方法和改良方法检验。 1. 2 方法
1. 2. 1 传统检验方法 肺组织 将肺组织用蒸馏水冲洗后剪去外周组
织,取中心部位组织约 20g 置于 500mL 容量烧杯中充 分剪碎,将烧杯放在电炉上边加热边用玻棒搅拌,使 肺组织中的水份尽可能多的蒸发掉。冷却后加入3 ~ 5mL 无水乙醇并搅拌混匀,再加入 25 ~ 35mL 浓硝酸 混匀,放置于通风柜内,待其充分反应消化至棕色气 体和泡沫释放完毕为止。如果组织未完全消化,可再 将烧杯放在电炉上稍微加热,直至组织完全液化。将 破机处理的检液冷却后移入离心管内,加蒸馏水离心 2000 转 / min 、15min,去上清。如此反复多次,直至烧 杯内液体完全离心完毕,保留约 0. 3mL 沉淀液制片, 镜检[1]。
日常办案中,硅藻检验常用的方法是硝酸酒精破 机法,但如遇到脂肪的干扰,可能影响检验结果。为 了减少人体组织脂肪对硅藻检验的影响和对现场对 水样的快速处理,笔者对传统的硝酸破机法进行了改 良,使操作更为简单,适用,现报道如下。
溶解于丙酮中,最后将所有液体移入离心管内离心。 离心步骤同传统方法。
水样 对照水样破机处理的改良方法为煮沸法: 即把水样置于烧杯中直接加热煮沸,再将检液离心制 片,镜检。
工作实践证明,脏层胸膜在硝酸破机处理过程中 会产生一些炭末,影响对硅藻的镜检。另外,由于脏
层胸膜下的肺组织远离气管或支气管,属于循环的边 缘部位,此处检出硅藻的意义明显大于其它部位的肺 组织。所以,检验时的取材,应选择去掉脏层胸膜后 的边缘肺组织为佳,而非某些文献报道的中心部位的 肺组织。
工作实践证明,充分剪碎脏器组织并尽量加热蒸 发掉其中的水份,其作用是防止破机过程中产生过量 的泡沫,可以缩短破机液化处理的时间,但在加热蒸 发脏器中 的 水 份 时,不 能 加 热 过 度 导 致 脏 器 组 织 炭 化,否则会因炭末遮盖硅藻而影响镜检。如果在破机 过程中产生大量的泡沫并将溢出烧杯口外时,可以用 玻璃棒轻轻在杯中搅动,泡沫将很快塌陷消失。
比较水样的两种破机处理方法,经改良的煮沸法 操作简单,可以减少污染环节和缩短检验时间,此法 处理的硅藻镜检非常清晰,形态非常完整。
参考文献
[1]湖南省公安厅科技小组 . 硅藻检验在法医学上的应用 [C]. 西安: 第一届全国法医学术讨论会论文选编,1981: 22-26.
[2]中华人民共和国公安部 . GA / T 813 - 2008 人体组织器官 中硝酸破机法检验[S]. 北京: 中国标准出版社,2008.
中国法医学来自百度文库志 CHIN J FORENSIC MED 2011 年第 26 卷第 4 期
常规硅藻检验法的改良
林小健
( 遵义市公安司法鉴定中心,贵州 遵义 563000)
【关键词】法医病理学; 溺死; 硅藻检验; 改良方法
【文献标识码】B
【文章编号】1001 - 5728( 2011) 04 - 0325 - 02
现在市场上能够溶解脂肪的化学品很多,如洗衣 粉、肥皂、汽油和丙酮等等,但能够用于硅藻检验的却 很少。洗衣粉和肥皂会产生大量的泡沫; 汽油不溶于 水,如果用于溶解脂肪,还需要使用分液漏斗等仪器 对水相和有机相进行分离,操作较为麻烦。丙酮能溶 解油脂,并能与水互溶,实践证明能很好地应用于硅 藻检验。但在使用丙酮时要注意: 由于丙酮易挥发且 易燃,所以在检验时要避开火源,不能在高热条件下 使用,最好选择在有通风防尘条件的通风柜内进行。 肝、肾等脏器的处理与肺组织的检验方法相同。
笔者总结后认为,应用 DifferexTM系统法时需注意 以下几点: ①高速振荡时需保持离心管垂直,以便使 悬壁液体聚集在管底。②相分离和差速离心后进行 管壁洗涤时,需将液面界面处的细胞碎片彻底漂洗干 净,否则会导致混合分型,切记洗涤时不可扰动管底 沉淀。 ③ 管 盖 处 的 黄 色 消 化 液 在 漂 洗 前 应 用 KINWAP 无尘纸彻底吸取干净,吸取不彻底也会出现 混合分型。④DNA IQTM法提取时,特别是镜检精子量
【作者简介】林小健,男,主检法医师,主要从事法医物证和法 医病理损伤鉴定。E-mail: lin200320999@ sina. com
·325·
中国法医学杂志 CHIN J FORENSIC MED 2011 年第 26 卷第 4 期
3讨论
内脏的硅藻检验方法,据文献报道,有化学消化 法、焚烧法、浸渍法、硅胶梯度离心法等[3],报导中多 是采用实 验 动 物 或 新 鲜 尸 体 的 内 脏 标 本 进 行 研 究。 可能是由于标本脂肪含量较少,对检验结果产生的不 良影响较小的缘故,因而,文献很少提及脂肪对硅藻 检验的影响; 对水样的破机处理方法也常常一笔带 过。在笔者十余年的检案工作中,遇到的尸体 90% 以上都高度腐败,硅藻检验时,由于硅藻被包裹在大 量的脂肪里无法识别,很容易影响到检验结果的准确 性,从而影响到对案件的定性。所以,减少脂肪成份 对硅藻检验的影响,是鉴定结论准确性的关键。
经过对传统检验方法与改良检验方法进行比较, 前者脏器组织( 尤其是严重腐败尸体) 中常常由于因 大量脂肪的存在,导致硅藻被部份甚至全部遮盖,硅 藻的检出率极低; 后者虽然不能将脏器组织中的脂肪 彻底去除掉,但制片镜检显示,改良处理后的检材,其 完整硅藻的检出率明显增加,可以充分保证检验结果 的准确性( 图 1) 。另外,对对照水样进行煮沸法处理 的结果要优于硝酸破机法,硅藻的检出数量和形态的 完整度明显增加( 图 2) 。
[3]祝 家 镇 . 法 医 病 理 学[M]. 北 京: 人 民 卫 生 出 版 社, 2000: 265. ( 收稿日期: 2010-05-27)
( 上接第 310 页)
以及洗涤次数,从而影响到 DNA 提取的成功与否。 本研究通过 DifferexTM 系统法和 Chelex-100 法分
别提取 混 合 斑 样 本 的 精 子 DNA。 结 果 发 现,采 取 Chelex-100 法 时 样 本 出 现 混 合 型 的 机 率 远 超 过 DifferexTM系统法,这可能与 Chelex-100 法提取的精子 DNA 纯度不够( 含有女性上皮细胞 DNA) 造成精子数 目相对低于 50000 个 / mL[3]有关,而采取 DifferexTM 系 统法时仅有 1 例样本出现混合分型。
水样 对照水样破机处理为传统硝酸破机法[2]: 即取水样 20mL,4000r / min 离心 15min,再用吸管吸去 上清液,往沉淀液中加入 5ml 分析纯硝酸,使充分反 应。后面离心取沉淀液的步骤同肺组织的处理。 1. 2. 2 改良检验方法
肺组织 对肺组织进行破机液化处理的方法同 传统检验方法。遂后在已液化处理的组织中加入等 量的丙酮混匀,静置约 20min,使检液中的脂肪尽可能
·326·
较少时,95℃ 干浴 30min 这一步骤建议不可省略( 作 业指导书中省略了此步) ,经笔者实验比较,样本经过 95℃ 干浴 30min 时电泳峰高在 2000RFU 以上,而省略 这一步骤时峰高则不到 1000RFU,有明显差别。
总的来说,Differex TM 系统法可以简单 高 效 的 获 取 精子 DNA,是一种在法医学性侵犯案件中具有很好应 用前景的方法。
相关文档
最新文档