补肾活血汤结合组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

的发病 率 日益增 加 。 因关 节 软骨解 剖 位置 的特 殊 性 ， 使 其易 受 到机械 性创 伤 和炎 症 的损 害 ， 而发 展 为骨 进
关 节 炎 。关 节 软骨 不 含 有 血 管 、 经组 织 ， 神 对损 伤 的
修 复能 力极 其有 限 ， 目前 在 实 验 研 究 方 面 ， 用 组 织 采
Ｓ ｏ ｐｅ ． ｅ ｈｏ Ｉｏ ａｅ ｒ ｍ 一 ｍｏ ｔ — ｏｄ ｒ ｂ ｉ ｙ ａ ｃ ｍｂｉ ｔｏ ｅｈ ｄ ｏ ｅ ｉｙ ｇ ａ ｉ ｎ ｅ ｔｉ ａｉｎ ａ ｄｈ ｒ ｎ Ｃｓｃ ｍ ｌｘ Ｍ ｔ ｄｓ ｓ ｌｔ ｄ ｆｏ ａ ３ ｎｈ ｌ ａ ｂ ｔｂ ｏ ｎａｉｎ ｍ ｔ ｏ ｆｄ ｎｓｔ ｒ ｄ ｅ ｔｃ ｎｒｆ ｔｏ ｎｄ ａ ｅ ｅ ｔ ｕｇ ｃ ｌｕｒ ｔ ｅ ＢＭ Ｓ ｓ ｈｅ ｉ ｐａ ｅ ｎ ｏ ｒ ｂｂｔ ｎｅ ａ ｔｌｇ ｄ ｆ ｃｓ ｕ ｔ ｅ，ｈ Ｃｓ ｗａ ｔ ｎ ｍ ｌｎｔｄ ｉ ｔ ａ ｉ ｋ ｅ ｃ ｒｉ ｅ ｅ ｅ ｔ．Ｃｈｉｅ ｅ ｍ ｅ ｉ ｉｅ Ｂｕ ｈｅ ｈ ｘ ｄ ｃ ｃｉ ｗａ ｉ ｅ ， ａ ｎ ｓ ｄ ｃｎ ｓ ｎ ｕｏ ｕｅ ｅ ｏ ｔ ｏｎ ｓ ｇ ｖ ｎ ｗｈｉｈ ｃ
方 法 取 兔 骨 髓 基 质 干 细胞 进 行 密 度 离 心 法 结 合 贴 壁 培 养 法 体 外 增 殖 后 ， 合 于 改 建 后 的 脱 细 胞 真 皮 基 质 （ ｃｌ ｌ ｅｍ ｌ ａ 复 ａｅｕａ ｄｒ ａ ｍ — ｌ ｒ
ｔｘ Ａ Ｍ） 体 上 ， 入 到 兔 膝 关 节 软 骨 缺 损 ， 以 中药 补 肾 活 血 汤 灌 胃为 复 合 组 ， 设 立 单 纯 中 药 组 、 纯 干 细 胞 复 合 体 组 、 ｒ ，Ｄ 载 ｉ 植 并 并 单 空
ｓ ｒｅ ｓ Ｂｕ ｈ ｎ ｏ ｕ ｃ ｃ ｉｎ ＋ ｓｅ ｃ ｌ ｇ ｏ ｐ． ｅ ｓｕｄ ｌｏ ｓ ｔＢｕｓ ｎｈ ｘ ｃ ｃ ｉｎ ｇｒｕ ｃ ｍｐｏ ｉｅ ｇ ｏ ｐ ａ ｄ ｂｌｎ ｒ ｕ ｅｖ ｄ ａ ｓ ｅ ｈｕ ｘ ｅ ｄｅ ｏ ｔｏ ｔ ｍ ｅｌ ｒ ｕ Ｔｈ ｔ ｙ ａｓ ｅ ｈｅ ｕｏ ｕｅ ｄｅ ｏ ｔｏ ｏ ｐ， ｏ ｓｔ ｒ ｕ ｎ ａ ｋ ｇ ｏ ｐ
肾活 血 汤 主 要 成 分 有 熟 地 、 仲 、 杞 子 、 碎 补 、 丝 子 、 杜 枸 骨 菟 归 尾 、 药 、 茱 萸 、 花 、 活 、 苁 蓉 等 中 药 。 由北 京 中 医 药 没 山 红 独 淡 大 学 东 直 门 医 院 中药 制 剂 室按 传 统 方 法 制 备 提 供 。全 方 按 严 格 中药 提 取 工 艺 制 成 ０ ７４ ． ０ ｇ生 药 ／ 升 的供 试 药 液 （ 临 床 毫 合
２ 实验方法 ： １ 骨髓 间充质 干细胞 的体外 培养增 殖 ： ． （） 取
３～ ４月 龄 健 康 家 兔 ， ％ 戊 巴 比妥 钠 ３ ｍ ／ ｇ 耳 缘 静 脉 麻 醉 ３ ０ ｇｋ，
后 ， 无 菌条 件 下 用 Ｉ ｌ 素 （ ００ ／ １预 处 理 过 的 １ 在 ｍ肝 ３０ Ｕ ｍ ） ６号 穿 刺 针 （ 止 吸 收 黏 稠 骨 髓 时候 出 现 针 道 内溶 血 ） 兔 股 骨 大 粗 防 从 隆处 抽 取 骨 髓 ３—５ ， 入 １ ０ ３／ ｌ的 ｐｒｏ ｍｌ加 ．７ｇｍ ｅｃｌ 离 液 ， １分
ｗａ ｏ ｎｔｄ ｔ ｖ ｌ ｔ ｈ ｅ ａ ｒｎ ｆｅ ｔ．Ｒｅ ｕｌｓ Ａｆｅ ２ ｗｅ ｋｓ ｔ ｆ ｃｓ ｉ ｈ Ｂｕｓ ｅ ｈｕ ｘ ｅ ｄ ｃ ｃｉ ｎ ＋ ｓｅ ｓ ｃ ｕ ｅ ｏ ｅ ａｕａｅ ｔ ｅ ｒ ｐ ｉｉｇ ｅｆｃ ｓ ｔ ｔ ｒ １ ｅ ，ｈｅ ｄｅｅ ｔ ｎ ｔ ｅ ｈ ｎ ｏ ｕ ｅ ｏ ｔｏ ｔ ｍ ｃ ｌ ｒ ｕ ｓ ｅｌｇ ｏ ｐ ｗａ ｆｌｅ ｔ ａｉ ｅ ｃ ｒｉａ ｅ — ｌ ｉｓ ｉ ｄ ｗｉｈ ｈｙ ｌｎ ａｔｌ ｇ ｌ ｉ ｔｓｕｅ ； ａ ｉａ ｅ ａ ｕｂ ｈ ｎｄ ａ ｎｅｔｓ ｕｅｗｅｅ ｂａ ｉａｌ ｅ ｉｅ ｋｅ ｃ ｒ ｌ ｇ ｎｄ ｓ ｃ ｏ ｒ ｌｂｏ ｉｓ ｒ ｓｃ ｌｙｒ ｐａｒ ｄ；ｒ ｐａｒｏ ａｔｌ ｇ ｎｈｉｔｍ ｏｐｈ ｌ ｔ ｅ ｉ ｆｃ ｒｉａ ｅ ｉ ｓｏ ｒ ｏ — ｏ ｙ ｗａ ｕｐ ｒｏ ｏ ｏ ｈ ｒ ｇ ｏ ｓ ｇ ｓ ｓ ｅ ｉｒ ｔ ｔ ｅ ｒｕｐ ．Ｃｏｎｃｕｓｏ ｌ ｉ ｎ ＢＭＳＣｓ ｏ ｐ ｅ ｃ ｎ ｅ ａ ｒａ ｔｃ ｌ ｒ ｃ ｒｉａ ｅ ｅｅ ｔ ｉ ｒ ｂ ｔ ，ａ ｉ ｓ ｍｅ ｃｎｅ ｃ ｍ ｌ ｘ ａ ｒ ｐ ｉ ｒｉｕ ａ ａ ｔ ｇ ｄ ｆｃ ｓ ｎ ａ ｂｉｓ ｎｄ Ｃｈｎｅ ｅ ｌ ｄｉｉ Ｂｏ ｈｅ ｓ ｎｈｕ ｘ ｅ ｄｅ ｏ ｔｏ ａ ｒ ｍ ｏｅ ｃ ｒｉａ ｅ ｒ ｐ ｉ ｎｄ ｉ ｏ ｕ ｃ ｃｉ ｎ ｃ ｎ ｐ ｏ ｔ ａ ｌｇ ｅ ａｒ ａ ｍｐｒ ｖ ｈｅ ｑ ａ ｉｙ ｏ ｅ ｉ． ｔ ｏ ｅ ｔ ｕ ｌｔ ｆｒ ｐａｒ Ｋ ｅ ｒ Ｂｏ ｒｏ ｓｒ ｍａ ｔ ｍ ｅ ｌ ｙ ｗｏ ｄｓ ｎｅ ｍａ ｒ ｗ ｔｏ ｌｓｅ ｃ ｉｓ；Ａｒｉｕｌｒ ｃ ｒｉａ ｅ； ｆｃ ；Ｂｕ ｈｅ ｈ ｘ ｅ ｄｅ ｏ ｔｏ Ｒａ ｂ ｔ ｔｃ ａ ａ ｌ ｇ Ｄｅｅ ｔ ｔ ｓ ｎ ｕｏ ｕ ｃ ｃ ｉｎ； ｂ ｉ
（ ｏ ｔ ｌｇｏ ｐ ． ｒｈ ｌｇｃ ｌ ｂ ｅｖ ｔ ｎ ａ ｄｈｓｏｏ ｉａ ｘ ｍｉａｉｎｗｅｅｐ ｒｏｍｅ ｅ ａｒｄｔ ｓ ｅａ ４， １ ｅ ｓ Ｗａ ｉ ｎ ｃ ｒ ｃ ｎｒ ｒｕ ） Ｍｏｐ ｏｏ ｉａ ｓｒａｉ ｎ ｉ ｌｇｃ ｌ ａ ｎ ｔ ｒ ｅｆｒ ｄｉ ｒｐ ｉｅ ｉ ｕ ｔ ８，２ｗｅ ｋ ． ｋｔ ｉｓｏｅ ｏ ｏ ｏ ｔ ｅ ｏ ｎ ｓ ａ
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司提供 。
其 对骨 髓基 质 干细胞 复合 体 修复 软 骨缺损 的影 响 ， 进
行 了如 下实 验 。
材 料 与 方 法
１ 实 验 材 料 ： １ 动 物 ：４只 ， ． （） ２ ３～４月 龄 健 康 新 西 兰 大 耳 白兔 ， 雄 不 限 ， 重 ２ ０～ ． ｋ ， 雌 体 ． ２ ５ ｇ 由北 京 海 淀 兴 旺 实 验 动 物
・
论
善 ・
Ｊ ｅＲ ，ｐ０１ ｏ４Ｎ． ｄ ｅ Ｓ １， １０ ｏ Ｍ ｓ ｅ２ Ｖ ． ９
补 肾 活 血 汤 结 合 组 织 工 程 软 骨 修 复 兔 膝 关 节 软 骨 缺 损
李春 根 宋 广 明 康 晓 乐 叶 超 陈 江
摘 要 目 的 进 一 步 验证 补 肾 活 血 汤 对 骨 髓 基 质 干 细 胞 （ ＭＳ ｓ 复 合 体 修 复 兔 关 节 软 骨 缺 损 的 影 响 ， 价 修 复 效 果 。 Ｂ Ｃ） 评
白组 为 对 照 组 。４ ８ １ 、、２周 后 分 别 对 修 复组 织 进 行 形 态 学 观 察 及 组 织 学 检 查 。 进 行 Ｗａｉ ｎ 评 分 ， 察 其 体 内修 复 关 节 缺 损 效 ｋ ａｉ ｔ 观 果。结果 术后 ｌ ２周 ， 合 组 的 缺 损 由透 明软 骨 样 组 织 充 填 ， 骨 及 软 骨 下 骨 组 织 基 本 修 复 ， 复 的 软 骨 组 织 在 组 织 形 态 学 上 优 复 软 修
于 其 他 各 组 。结 论
骨 髓 基质 干细 胞 复 合 体 能修 复家 兔 膝 关 节 软 骨 缺 损 ， 补 肾活 血 汤 能 促进 软 骨 的修 复 ， 提 高 了修 复 质 量 。 中药 且
关 节 软骨 缺 损 补 肾 活 血 汤 兔
Ｌ ｉ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
关 键 词 骨髓 基 质 干 细 胞
植 物 与宿 主形成 良好 的结合 。 骨 髓 间充质 干细胞 的含 量极 少 ， 因此有效 的分离 方法非 常重 要 ， 实验 利用 骨髓 中细胞 成分 的 比重不 本 同和贴 壁 生长 的特性 ， 采用 比重为 １ ０ ３的 Ｐ ｒ ｌ细 ．７ ｅｃ ｌ ｏ 胞分离液进行贴 壁培养分离法 和密度 梯度离 心法来 体
能 较好 地修 复实 验 性 软 骨 缺 损 。中药 复 方 在 临床 治疗 骨 关节 炎 ， 保护 软骨 及 软骨修 复 方面有 一 定 的疗
效 。本 研究 自２ １ ０ ０年 ４～ ８月应 用 补 肾活 血 汤 ， 观察
供 ； ｅｃｌ淋 巴 细 胞 分 离 液 （ ． ７ ｇｍ１ 由美 国 Ｐ ａｍ ｃａ公 Ｐ ｒｏ ｌ １０ ３／ ） ｈｒ ａｉ
随着社 会经 济 的发展 ， 活水 平 的提 高 以及人 口 生
老 龄化 现象 ， 以关节 软骨 退 变为 主要 表现 的骨 关节 炎
养 殖 场 提 供 ， 格 证 号 ： Ｃ Ｘ（ ） ０ ６—０ ０ 。 实 验 过 程 中 合 Ｓ Ｘ 京 ２０ ０６ 对 动 物 处 置 符 合 动 物 伦 理学 要 求 ， 合 ２０ 符 ０ ６年 科 学 技 术 部 发 布的《 于 善待 实验动 物 的指导 性意见 》 （ ） 试 药 物 ： 关 。 ２受 补
作 者 单 位 ：０ ７ ０ 北 京 中 医药 大 学 东 直 门 医院 骨 科 １０ ０
・
１０ ｒｍｎ离 心 ２ ｍｉ， 集 最 上 层 培 养 液 中及 培 养 液 一分 离 ５ ０／ ｉ ０ ｎ收
６２ ・
医 研 杂 ２１年９ 第４卷 第９ 学 究 志 ０１ 月 ０ 期
方 向分 化 ， 同时修 复 软 骨 和软 骨 下 骨 的损 伤 ， 移 能 使
工 程学 方法 ， 以骨 髓 间充 质 干 细胞 为 种 子 细 胞 ， 实 证
成 人 日用 量 的 ８倍 ） （ ） 要 试 剂 ： 糖 Ｄ Ｍ 和 胎 牛 血 。 ３ 主 低 ＭＥ 清 由杭 州 四季 青 公 司 提 供 ； ｓｏ Ｍａｓｎ三 色 染 色 试 剂 盒 由上 海 虹
桥 医 用 试 剂 研 究 所 提 供 ； 蛋 白 酶 一Ｅ Ｔ 由 Ｇ ｂ ｏ公 司 提 胰 Ｄ Ａ ｉｃ