猪胚胎培养常用配方
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0.1g
9
Cysteine
0.57mM
0.006g
10
超纯水
50ml
(5)猪洗清液（DPBS）（pH=7.8）
1
KCl
2.7mM
0.0201g
2
K3
MgCl2
0.5mM
0.0048g
4
NaCl
138.0mM
0.8065g
5
Na2HPO3·12H2O
8.1mM
0.2901g
0.0308g
8
L-glutamine
1.00mM
0.0073g
9
hypotaurine
5.00mM
0.0273g
10
BME amino acid*
20ml/L
1ml
11
MEM non-essential amino acid*
10ml/L
0.5ml
12
超纯水
50ml
*定容后加
（4）猪受精液（mTBM）
常用
（1）猪卵母细胞体外成熟培养液
1
TCM-199
0.95g
2
聚乙烯醇
0.1%
0.1g
3
D-葡萄糖
3.05 mM
0.0549g
4
丙酮酸钠
0.91mM
0.01g
5
NaHCO3
0.22g
6
青霉素
75μg/ml
0.0075g
7
链霉素
50μg/ml
0.005g
8
胱氨酸
0.57mM
0.006g
9
LH(100×)*
0.3mol/L
5.4651g
2
氯化钙
0.0147g
3
氯化镁
0.0020g
4
HEPES
0.0120g
注
氯化钙，氯化镁用皿称0.147g和0.20g。溶于1ml水作10*浓储，100ml体系加100μL。
细胞分离液配制
45%细胞分离液：用等量的90％细胞分离液与洗精液混匀，过滤除菌，4℃备用
90%细胞分离液：45ml Percoll加5ml lO×洗精液，混匀后，弃去3.75ml，再加3.75ml水，过滤除菌，4℃备用。
6
D-Glucose
5.6mM
0.1009g
7
Phenol Red
0.01mM
0.0004g
8
Na-pyruvate
0.33mM
0.0036g
9
青霉素
75μg/ml
0.0075g
10
链霉素
50μg/ml
0.005g
11
BSA
0.1%
0.1g
12
超纯水
100ml
电融合液（100ml）
1
Mannitol(甘露醇)
1
NaCl
113.1mM
0.3305g
2
KCl
3.0mM
0.0112g
3
CaCl2·2H20
7.5mM
0.0051g
4
Tris
20.0mM
0.1211g
5
Glucose
11.0mM
0.0991g
6
Na-pyruvate
5.0mM
0.0275g
7
caffeine
2.0mM
0.0194g
8
BSA
0.2%
1
NaCl
108.00mM
0.3156g
2
KCl
10.00mM
0.0373g
3
KH2PO4
0.35mM
0.0024g
4
MgSO4·7H2O
0.40mM
0.0024g
5
NaHCO3
25.07mM
0.1055g
6
Na-pyruvate
0.20mM
0.0011g
7
Ca-（lactate）2·5H2O
2.00mM
50μg/mL
10
FSH(100×)*
50μg/mL
11
EGF(1000×)*
10μg/mL
12
ddH2O
100ml
*临用四小时前加
（2）猪体外操作液
1
TCM-199
0.95g
9
0)2
NaHCO3
0.22g
3
Hepes
0.5958g
4
BSA
0.3g
5
ddH20
100ml
(3)猪胚胎培养液（PZM-3）
9
Cysteine
0.57mM
0.006g
10
超纯水
50ml
(5)猪洗清液（DPBS）（pH=7.8）
1
KCl
2.7mM
0.0201g
2
K3
MgCl2
0.5mM
0.0048g
4
NaCl
138.0mM
0.8065g
5
Na2HPO3·12H2O
8.1mM
0.2901g
0.0308g
8
L-glutamine
1.00mM
0.0073g
9
hypotaurine
5.00mM
0.0273g
10
BME amino acid*
20ml/L
1ml
11
MEM non-essential amino acid*
10ml/L
0.5ml
12
超纯水
50ml
*定容后加
（4）猪受精液（mTBM）
常用
（1）猪卵母细胞体外成熟培养液
1
TCM-199
0.95g
2
聚乙烯醇
0.1%
0.1g
3
D-葡萄糖
3.05 mM
0.0549g
4
丙酮酸钠
0.91mM
0.01g
5
NaHCO3
0.22g
6
青霉素
75μg/ml
0.0075g
7
链霉素
50μg/ml
0.005g
8
胱氨酸
0.57mM
0.006g
9
LH(100×)*
0.3mol/L
5.4651g
2
氯化钙
0.0147g
3
氯化镁
0.0020g
4
HEPES
0.0120g
注
氯化钙，氯化镁用皿称0.147g和0.20g。溶于1ml水作10*浓储，100ml体系加100μL。
细胞分离液配制
45%细胞分离液：用等量的90％细胞分离液与洗精液混匀，过滤除菌，4℃备用
90%细胞分离液：45ml Percoll加5ml lO×洗精液，混匀后，弃去3.75ml，再加3.75ml水，过滤除菌，4℃备用。
6
D-Glucose
5.6mM
0.1009g
7
Phenol Red
0.01mM
0.0004g
8
Na-pyruvate
0.33mM
0.0036g
9
青霉素
75μg/ml
0.0075g
10
链霉素
50μg/ml
0.005g
11
BSA
0.1%
0.1g
12
超纯水
100ml
电融合液（100ml）
1
Mannitol(甘露醇)
1
NaCl
113.1mM
0.3305g
2
KCl
3.0mM
0.0112g
3
CaCl2·2H20
7.5mM
0.0051g
4
Tris
20.0mM
0.1211g
5
Glucose
11.0mM
0.0991g
6
Na-pyruvate
5.0mM
0.0275g
7
caffeine
2.0mM
0.0194g
8
BSA
0.2%
1
NaCl
108.00mM
0.3156g
2
KCl
10.00mM
0.0373g
3
KH2PO4
0.35mM
0.0024g
4
MgSO4·7H2O
0.40mM
0.0024g
5
NaHCO3
25.07mM
0.1055g
6
Na-pyruvate
0.20mM
0.0011g
7
Ca-（lactate）2·5H2O
2.00mM
50μg/mL
10
FSH(100×)*
50μg/mL
11
EGF(1000×)*
10μg/mL
12
ddH2O
100ml
*临用四小时前加
（2）猪体外操作液
1
TCM-199
0.95g
9
0)2
NaHCO3
0.22g
3
Hepes
0.5958g
4
BSA
0.3g
5
ddH20
100ml
(3)猪胚胎培养液（PZM-3）