酶活性测定方法及酶学分析类型(精)课件

特点： 优点是简单。 缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。
注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以30～60分 钟为宜。
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
（二）连续监测法
1、定义：测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。
2、原 理：
该方法每隔一定时间（10s～60s）测定一次底物或产 物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图 ，绘制反应速度曲线。
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
4、连续监测法的种类
• 1.直接连续监测法 要求底物或产物能够直接测 定
• 2.间接连续监测法 间接法又分为一步间接法和 酶偶联法。酶偶联法指在原来的反应体系中再加 入一些酶试剂，使加入的酶促反应和被测酶的酶 促反应偶联起来。最后的反应产物可直接监测， 进而推测出第一个酶的活性浓度。
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
3、特点： 在方法设计上，选择紫外吸收法或色原显色法
➢优点:
能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反应的线性期，结 果准确可靠，标本和试剂用量少，可在较短时间内完成测定。
➢缺点：
要求高，要求能够精确地控制温度、pH值和底物浓度等反 应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及自 动生化分析仪都能达到这些要求。
一、酶活性的测定方法
按照对酶 促反应时 间的选择 不同
固定时间法 连续监测法
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
（一）固定时间法
定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量 或产物的增加量。 分类：
终点法：在反应进行到预定时间后要终止反应。
两点法：该方法反应时间的预定是从t1～t2 。
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
5、酶活性浓度的计算
• 摩尔消光系数()的定义为在特定条件下，光径为 1.00cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00 mol/L时的吸光度。如用连续监测法测定在线性范 围内每分钟吸光度的变化(△A/min)，以U/L表示 酶活性浓度时，则按下式进行计算：
式中：V—反应体系体积(ml) --摩尔消光系数(cm2·mol-1) v—样本量(ml) L—比色杯光径(cm)
生物化学检验
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
酶活性测定方法及酶Fra Baidu bibliotek分析类 型
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
酶活性测定方法及酶学分析类型
酶学分析是20世纪70年代发展起来的一类 检测技术，包括酶活性测定和底物浓度测定两 大类型。酶活性的测定方法包括终点法和连续 监测法。
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
△A—吸光度变化 106为换算系数，将mol换算成mol
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)