精子冷冻贮存
精子冷冻贮存
6.1 引言
精子冷冻保存是男科实验室工作中的一个重要组成部分，特别对不孕不育门诊的男科实验室来说。
从19世纪40年代末起，人类就开始研究精子低温生物学。发现甘油能保护精子免受冷冻损伤，可以将人类精子冷藏在–79℃的干冰上(Polge et al., 1949; Bunge &herman, 1953; Bunge et al., 1954)。随着液氮广泛应用，人类精子冷冻贮存技术取得快速发展，在许多国家建立起商业用途的精子库和国际间合作服务项目(Perloff et al., 1964; David et al., 1980; Clarke et al., 1997; Leibo et al., 2002)。
由于采用不同的冷冻保护剂和不同冷冻程序，出现许多冷冻贮存实验设计方案。冻融后细胞存活率主要取决于细胞内冰晶形成量能降低至何种程度，通过选择恰当的冷冻保护剂和采用最适冷冻速率和复融速率来减少细胞内水形成冰晶提高细胞的存活率(Sherman, 1990; Keel & Webster, 1993; Watson, 1995)。特别在复融过程中，当精子处于–130℃（玻璃化转化状态的关键温度）以上时间太长，细胞内有害的冰晶增多发生重结晶。
人类精子能够耐受一定范围内的冷冻和复融率。它们对快速冷冻（冷体克）产生损伤不敏感，主要原因可能是精子细胞膜中脂质双分子层结构的不饱和脂肪酸增加细胞膜流动性。而且因为细胞内水分含量少（约为50%），精子比其它细胞更能耐受低温导致损伤。但是低温仍对精子功能仍产生不良影响，特别是对精子活力影响比较大。一般而言，只有大约50%的活动精子能在冻存后复苏保持活力(Keel & Webster, 1993)。优化精子冷冻保存方法减低对活动精子的损害从而提高妊娠率(Woodset al., 2004)。
影响供精人工授精的妊娠率的因素包括复融后精子质量、人工授精的时机，而最为关键的是受方因素如年龄，前次供精妊娠情况以及与排卵、子宫输卵管相关疾病(Le Lannou & Lansac, 1993)。如果精子保存方法合适，精子质量不会随着冻存时间的延长而下降。冷冻保存超过28年的精子仍能使妇女受孕分娩婴儿(Clarke et al., 2006; Feldschuh et al., 2005)。
精子冷冻可适用于很多情况（见表6.1），在某些特殊情况下，冻存过程需要进行一些更改（见章节6.2.2）。
框6.1 精子冷冻保存的适应症
供精
供精是对具有生育能力的供精者精液进行冷冻保存以便将来使用。供精者可由精子库或诊所进行招募，他们精子可以匿名使用。在某些替代的情况，受者也可了解供者的基本情况。供精可以用于AI、IUI、IVF、或者ICSI。
1．没有活精子或者不适合ICSI使用长头精子不育男性患者的伴侣，或冶疗失败，冶疗费用太高。
2．能传给下一代的遗传疾病。
3．血型不符导致婴儿溶血性贫血。
4．复发性流产，供精能提供成功妊娠。
5．想怀孕的单身育龄女性。
供精受孕需要严格遵守当地和国家关于遗传和传染病筛查的法律法规。
生育力保护
男性在进行有可能影响生育能力的活动之前，可以通过精液冷冻保存生殖能力。具体如下：
1．输精管切除（考虑到将来存在婚姻状态改变可能性或想再要一个孩子）。
2．接受有可能永久损害生精功能的细胞毒性药物或者放射治疗。
3．从事危险职业的工作如军队，在允许遗腹子出生的国家。
不孕症治疗
在以下情况下，可以进行精子冷冻以备AIH、IUI、IVF、或者ICSI治疗：
1. 严重少精子症或者精液中活动精子间断出现。
2．不育症的治疗效果不能持久，如生殖管道堵塞手术再通或者是下丘脑垂体性腺发育不良的促性腺激素治疗。
3．通过辅助方法收集到的精液，如脊髓受损的病人辅助射精，逆行射精病人尿液中收集精子，或者通过手术方式从生精管道中收集精子。
4．在辅助生育治疗过程在取卵日或者AIH日不能留取新鲜的精液。
阻断传染性疾病的传播
经抗逆转录病毒治疗的HIV感染患者，没有检出病毒的精液可以冷冻保存，这些精子可用于IUI，IVF，或者ICSI，这样就能够避免妻子在受孕过程中受HIV
感染危险。
注1：在保存生育力或者不育症治疗中的精子冷冻，尽可能保存够10次或以上人工受精使用的精子量，这样才能够提高妊娠成功率。而异常精液为AIH而冻存多份精液并不见得很有用。
注2：在ICSI过程中1个精子就足够让1个卵子受精，所有的活动精子都值得冻存。注3：在进行有可能造成不育的治疗前，冻存精液有很大的心理意义，因为这样能够让病人对未来充满希望。病人在接受细胞毒性药物治疗或者放射治疗的之前，应该把精液冻起来，因为这些治疗过程都对精子有害。所有需要进行放化疗的病人都应尽可能的保存精子。
人类精子冷冻和贮存是一个很复杂的过程，实验室工作人员不仅需要有高度的责任感，而且需要对综合风险进行评估。
框6.2 冻存和贮存人类精子的风险评估
在评估人类精子冷冻和贮存过程中危险因素时，应该充分考虑下列内容。
材料
1．为了保证冷冻的精子不会被偷盗或者受火灾损害，需实施关于容器、样本、冷冻室的物理安全，同时也要保证液氮的供应。
2．选择合适的器械。
3．液氮存储和转移系统。
人员安全和保护措施
1．个人防护用具。
2．检测液氮量不足的警报系统和低氧环境的警报系统。
交叉感染的风险
为了减少贮存样本间通过贮存容器交叉感染传染性微生物（如HIV、乙肝、丙肝病毒），需考虑下列几个方面：
1．存储器的类型：小瓶或麦管和封口方法。
2．存储介质：液氮或者液氮蒸汽。
3．对高危险的样本（已知感染病毒或怀疑感染病毒样本）使用的存储方法和程序。
冷冻样本的安全：
1．为了防止样本全部丢失，把样本分开放在不同的地方。
2．在每一个处理步骤中都进行双人核对。
3．使用明显的标记和识别条码。
对存贮的样品和材料进行定期核查。
注1：用液氮蒸汽取代液氮进行样本保存时能够减少交叉感染的风险。然而，不同的样本形态和位置可能引起温度梯度。在个别情况有可能达不到–100 ℃以下(Tomlinson, 2005)。所以当使用液氮蒸汽来保存样本时，必须确保温度低于–130 °C，尽量避免温度对细胞的损害。
注2：液氮存储中，使用隔热树脂玻璃制备的密封试管可以达到防泄露、防病毒、防细菌，并且可以在–196°C下不变形。
6.2 精液冷冻方法
有很多方法都可以进行精子冷冻，下边将列出具体的常用冷冻保护剂和冷冻过程中的机器控制。
6.2.1 标准步骤
6.2.1.1 制备冷冻保护剂GEYC
1．在65ml的无菌蒸馏水中加入1.5g葡萄糖和1.3二水三羧酸柠檬酸钠。
2．混入15ml的甘油。
3．加入1.3g的甘氨酸，等完全溶解后用0.45-μm的细孔过滤器过滤。
4．加入20ml的新鲜蛋黄（从特制的无菌蛋中提取）：洗净鸡蛋把蛋壳剥去，用注射器穿刺鸡蛋膜取到蛋黄，一般一个鸡蛋取10ml的蛋黄。
5．在56℃水浴箱中孵育40分钟，并且要时不时搅拌一下。
6．检测溶液中的pH值，如果pH值超出6.8-7.2之间范围，这样的溶液是不理想的，应该丢弃重新制备，因为可能加错试剂或试剂量。
7．在此阶段，细菌培养进行无菌检测。
8．在此阶段，也可以进行精子毒性试验检测。
9．把溶液分装到2ml的试管中，并且保存于–70℃下。
10．在3个月内用完。
同GEYC相似的冷冻保护剂已经有商品供应。
6.2.1.2 在精液标本中增加冷冻保护剂
1．复苏冷冻保护剂，升温至室温并且混合，升温到37℃的效果最好。
2．在精液中添加冷冻保护剂需要很小心，因为高浓度的甘油会对精子有害。
3．可以一边滴一边旋转，也可以用吸管上下混匀，或者逐渐加入5滴后在室温下搅拌5分钟，最终GEYC与精液的比例是1：2。
4．加完GEYC后，需要在30-35°C的温箱里孵化5分钟。
6.2.1.3 分装精液到试管中
1．传热性能好而且便于保存的0.5ml塑料试管比较常用。塑料小瓶适合存储量比较多的样本。
2．把精液-GEYC混合液放入精液管或者冷冻管中。应该应用真空装备或者适配器进行分装。
6.2.1.4 密封麦管
在棉花和羊毛之间有若干聚乙烯乙醇粉末塞子的试管能够在精液装满时自动聚合粉末。
1．轻拍试管的一侧让试管底层有1cm的空气。
2．通过沾湿无菌聚乙烯酒精密封粉末对试管进行密封，并且放置在1cm的水中。
3．因为密封粉末可能会被某些病菌感染，所以加热密封法似乎比较受欢迎。
4．此外，可以把样本存储在塑料管或者安培中，常常不会超多90%的体积。
5．把试管外面的水擦干，然后用70%的酒精或者其它清洁剂。
6.2.1.5 应用程序冷冻仪冷冻精子
程序冷冻仪控制流进冷冻室的液氮蒸汽量来冷冻精子。
1．把麦管或者冷冻管放到程序冷冻仪中，并按照操用说明激活程序。
2．最常用的程序是按照每分钟1.5℃的速率从20℃降到–6℃，然后以每分钟6℃的速度降到–100℃，整个过程大概需要40分钟。在转到液氮之前，需要在–100℃下放置30分钟。
3．不同实验室根椐自身经验有可能会使用更复杂的方法(Pérez-Sánchez et al., 1994)。
6.2.1.6 手工冷冻法
手工冷冻法不像程序冷冻仪易于控制，但也能得到良好的结果。在这个过程中有很多方法可以选择。
1．麦管应先在–20℃的冰箱中放置30分钟，然后在–79℃的干冰中放30分钟。最后放入–196℃的液氮。
2．麦管从-20℃冰箱移入另一个-70℃冰箱，或移入-80℃至-100℃的小容器颈部的液氮蒸气和空气的混合气体内篮子放置10-15分钟后投入液氮中，也可以通过放置在大容器的液氮上方10-20cm悬挂支架，放置1小时形成温度梯度层。6.2.1.7 冷冻精液贮存
1．把冷冻麦管放入塑料存储管内，并插入更大的存储筒里。
2．把冷冻管用夹子加到固定的存储罐中，这个方法使用于在气体中，因为冷冻管没有非常密封。
3．在液氮中保存这些冷冻小管。
6.2.1.8 冷冻精液运输
目前市场上已经存在用于转运冷冻精子的商用托运罐，这些托运罐通过液氮汽化可以让保持低温几天到几个星期不等。
注：在转运过程中需要严格遵循当地的、国家的、以及国际上关于液氮和人类生物样本的转运条例。
6.2.1.9 冷冻精子复苏
1．在使用前，从液氮或者氮气罐中拿出需要用的试管然后放在薄纸或者试管架上，这样在6分钟内就可以达到室温。而冷冻管需要花比较多时间。
2．在10分钟内，用无菌剪刀把麦管尾部去掉，并放入受精管中备用，或者检测复苏后精子活动率。
3．如果是用快冻法进行冷冻则复苏时用快复苏法(Verheyen et al., 1993)。
4．应用小剂量多步骤稀释法把冷冻保护剂除开，这样能够避免不恰当渗透压并且能够提高妊娠率。
6.2.2 严重少弱精子症和手术取到精子的冷冻方法
1．只有很少的活动精子的精液以及从生殖道中取到的精子悬液可以冻存起
来用于ICSI。
2．如果有必要，可以把精液在1500g的离心力下离心10分钟，制成最小0.4ml，按照上文所述添加GEYC。
3．附睾穿刺液、睾丸提取物或经过上游法或者密度梯度法形成其它精子悬液，用含人血清白蛋白的精子培养液（HEPES缓冲体系）重悬，这样重悬后的精子液就可以加入TGG冷冻保护剂，或者含有人血清白蛋白的冷冻保护剂。
6.2.2.1 TGG
1．在40ml的无菌台氏溶液（见附录4、章节4.9）中加入5ml浓度为100mg/ml 的人白蛋白，0.9g葡萄糖和5ml甘油。然后使用0.45-μm的细孔过滤器过滤溶液。
2．分装成2ml每份在–70℃下保存。
6.2.2.2 步骤
1．如果样本多于2ml，或者只有很少量精子那么应该在室温下在1500g离心力下离心5分钟。
2．吸掉上清液仅留1ml，重新悬浮精子后测定活动精子的百分比，如果非常少量活动精子出现在样本中压片计数活精子数。
3．复融2mlTGG。
4. 1：1等体积往精子制备液中加入TGG, 并混匀。
5．包装在麦管或试管中像上文所说的方法冷冻，如果麦管没有装满，那么需要加盖以免在冷冻时飘浮在液氮上。
6.2.3 麦管标签和记录
用完整的编码系统来标记麦管或试管是很重要的。用实验室数据表格和电脑数据库中代码来保证供精者匿名情况。关健是每个供精者都有一个独自的和安全的代码。现有很多潜在的代码系统，最基本的要求是保证每个供者或冻精客人都有自己独有的代码。以下的代码系统基本可以满足临床要求。
1．每个匿名的供精者分配两个字母代码如（AA,AB, AC ... BA ...等，直到ZZ结束，其后使用新的方法）。
2．3个字母代码用于已经名字的冻精者和供者如AAA, AAB...。
3．供精者每次捐赠的精液则用跟在个人代码后面的数字来表示。例如供精
者BT的第8份供精可以表示为BT-8。
4．用黑色不可擦的标记笔在麦管或试管写上字母代码或数字代码，或者贴上专门用液氮的标签。
5．贮存麦管的小筒也应做上标签，包含贮存样本的数目及代码的信息。
6．贮存筒，微筒，麦管的颜色，麦管封口粉的色彩也是快速识别的标记。
7．当冻存的精子使用后应及时更改数据库中麦管或试管的记录。
注：所有涉及到精液标本的识别的步骤，包括样本接受、处理样本、麦管贴签、放入冷冻箱内、复融样本及丢弃样本都应该双人核对，并且核对过程在实验室记录中登记。而且每一位工作人员一次最好仅处理一份精液样本。
（张爱军）
精子冷冻保护剂
精子冷冻保护剂 简介： 正常精液是一种混合物，在射精时由睾丸和附睾的分泌物及悬浮其中的精子与前列腺、精囊腺和尿道球腺的分泌物混合而成，最终射出的混合物是一种粘稠的液体。精子分析的方法有很多，其中可通过培养进行检测。 Leagene 精子冷冻保护剂主要由甘油、葡萄糖、枸橼酸钠、抗生素等组成，经无菌处理，其基本原理是在细胞冷冻过程中随着温度不断下降，细胞外液中作为各种电解质溶剂的水分首先形成细小的颗粒状冰晶，导致细胞外水份减少，电解质浓度增加，细胞外液渗透压升高，，用冷冻过程中产生的渗透压的梯度使细胞皱缩，而不损伤细胞。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)人类精液快速冷冻步骤 1、精液取出后，在37℃的水浴箱中液化。 2、精液液化后按照WHO 的标准进行常规分析，包括精液量、颜色、气味、PH 值、液化状况、精子密度、活动率、圆细胞数等，并做好相关记录。 3、提前将冷冻保护剂复温至室温。 4、将精液与冷冻保护剂按的比例混匀，并分装于冷冻管中，冷冻管做好标记。 5、将冷冻管置入4℃冰箱。 6、将冷冻管置入－80℃液氮蒸气。 7、将冷冻管投入液氮中冻存。 (二)人类精液程序冷冻步骤 1、精液取出后，在37℃的水浴箱中液化。 2、精液液化后按照WHO 的标准进行常规分析，包括精液量、颜色、气味、PH 值、液化状况、精子密度、活动率、圆细胞数等，并做好相关记录。 3、提前将冷冻保护剂复温至室温。 4、将精液与冷冻保护剂按的比例混匀，并分装于冷冻管中，冷冻管做好标记。 5、将冷冻管置于程序冷冻仪中，开始程序冷冻。冷冻程序如下：编号 名称CZ0150Storage 精子冷冻保护剂 100ml -20℃ 使用说明书1份
精子冷冻贮存
精子冷冻贮存 6.1 引言 精子冷冻保存是男科实验室工作中的一个重要组成部分，特别对不孕不育门诊的男科实验室来说。 从19世纪40年代末起，人类就开始研究精子低温生物学。发现甘油能保护精子免受冷冻损伤，可以将人类精子冷藏在–79℃的干冰上(Polge et al., 1949; Bunge &herman, 1953; Bunge et al., 1954)。随着液氮广泛应用，人类精子冷冻贮存技术取得快速发展，在许多国家建立起商业用途的精子库和国际间合作服务项目(Perloff et al., 1964; David et al., 1980; Clarke et al., 1997; Leibo et al., 2002)。 由于采用不同的冷冻保护剂和不同冷冻程序，出现许多冷冻贮存实验设计方案。冻融后细胞存活率主要取决于细胞内冰晶形成量能降低至何种程度，通过选择恰当的冷冻保护剂和采用最适冷冻速率和复融速率来减少细胞内水形成冰晶提高细胞的存活率(Sherman, 1990; Keel & Webster, 1993; Watson, 1995)。特别在复融过程中，当精子处于–130℃（玻璃化转化状态的关键温度）以上时间太长，细胞内有害的冰晶增多发生重结晶。 人类精子能够耐受一定范围内的冷冻和复融率。它们对快速冷冻（冷体克）产生损伤不敏感，主要原因可能是精子细胞膜中脂质双分子层结构的不饱和脂肪酸增加细胞膜流动性。而且因为细胞内水分含量少（约为50%），精子比其它细胞更能耐受低温导致损伤。但是低温仍对精子功能仍产生不良影响，特别是对精子活力影响比较大。一般而言，只有大约50%的活动精子能在冻存后复苏保持活力(Keel & Webster, 1993)。优化精子冷冻保存方法减低对活动精子的损害从而提高妊娠率(Woodset al., 2004)。 影响供精人工授精的妊娠率的因素包括复融后精子质量、人工授精的时机，而最为关键的是受方因素如年龄，前次供精妊娠情况以及与排卵、子宫输卵管相关疾病(Le Lannou & Lansac, 1993)。如果精子保存方法合适，精子质量不会随着冻存时间的延长而下降。冷冻保存超过28年的精子仍能使妇女受孕分娩婴儿(Clarke et al., 2006; Feldschuh et al., 2005)。 精子冷冻可适用于很多情况（见表6.1），在某些特殊情况下，冻存过程需要进行一些更改（见章节6.2.2）。
稀少精子冷冻技术
稀少精子冷冻技术 薛松果 临床应用价值高： 男方因素约占不孕症病因的30-40％，无精症约占男方因素的10％左右。1992年Palermo等首先将卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)技术应用于临床，解决了男性严重少、弱、畸形精子症患者不能生育子代的难题。而ICSI技术结合显微外科取精术如附睾精子抽吸术(microsurgical epididymal sperm aspiration，MESA)、经皮附睾穿刺取精术(percutaneous epididymal sperm aspiration，PESA)和睾丸精子抽取术(testicular sperm extraction，TESE)则使无精症患者养育遗传学子代成为可能。 然而，MESA、PESA和TESE等都是创伤性手术，多次反复手术可能造成睾丸、附睾组织纤维化，导致不可逆的睾丸萎缩、生精功能退化，为了尽可能地减少患者反复穿刺取精的痛苦，更好地保全男性的生精功能，医学工作者试图对无精子症患者诊断性穿刺或ICSI治疗周期剩余的微量活动精子进行冷冻保存，在女方采卵当日将复苏后存活的精子用于ICSI，这将大大提高该类患者辅助生育治疗的灵活性和可靠性。 技术难度大： 但是，传统的精子冷冻采用 1.8mL的冷冻管(Cryovial)或0.25－0.5mL麦管(Straw)作为冷冻载体，冷冻/复苏过程还需要对精子作2-3次离心洗涤，每一步操作都会造成精子不同程度的损失。而睾丸或附睾穿刺获得的精子一般数量少、活力差，常规冻存复苏后，往往难以找到足够的活动精子进行ICSI，所以传统方法不适用于对穿刺获得的精子进行冷冻保存。 现状：
精子保存的一般步骤
保存的一般步骤 （一）精子的收集 禁欲期（通常为 3～ 5d）后，用**方法将精子收集于 10～ 20mL 无菌的聚丙烯样品收集容器中。要求禁欲期是为了更好地冷冻保存样品。通常而言，这样的精子与收集前禁欲期较短及不规则的精子相比，冷冻保存后的特性更恒定且更完善。 射出的精液是液态的，但正常情况下立即凝聚成胶状。凝聚后的精液通常在 30min内液化，此时就可测定其体积。为了使精子获得最大的冷冻存活力，应在收集精液后 1min内开始对液化精子进行冷冻保存处理。 （二）体积的丈量 体积可用较准的加样器或带针头的 5mL 注射器来丈量，有时也可根据收集精液前后采样瓶的重量之差来计算。取 0.1～ 0.2mL 精液作精液分析（活动精子的百分数及其质量、精子密度等，参见本书有关章节），此外尚需取出一些精液，同时以用来做筛选某种性传染疾病的检测、进行某些检测以筛选导致性病的微生物如奈瑟淋球菌等（详见有关章节）。 （三）甘油化 甘油作为冷冻保护剂，可以分步方式直接加入到未经处理的精液之中。每次加入后混匀，时间间隔为 1min；或间接地作为扩张液或基液的组分，经稀释后逐步加入精液。而在美国与加拿大，40% 以上的著名精子库，仍单独使用甘油作为冷冻保护剂，而越来越多的新的精子库则使用扩张剂，尤其是含甘油的两性离子缓冲系统。 甘油化的条件不一定涉及温度的特殊条件（除了室温之外）和接触时间（除了加入甘油及混匀所需时间之外）。 （四）包装和存活力观察 甘油化的精液可吸入塑料吸管（可用封口剂，加热，或用尼龙塞来密封）或放入玻璃安瓿（用火焰封口），也可放入塑料冷冻管（冷冻小瓶）后用螺口盖拧紧。每份冷冻精液的体积通常是 0.4～ 0.8mL，这可作为人工授精的一个单位。当然假如合适，人工授精也可能使用一个单位以上的精液，选择用于冷冻保存精子的容器是很重要的。这种容器应是易于标记、操纵、储存，同样也应具有很好的生物兼容性以及抗压性能。高质量的聚丙烯吸管或小瓶看来最符合这些标准，而没有易碎及被洗涤剂污染等玻璃容器所具有的缺点。 放入液氮冷冻之前，除了要对被冷冻和储备的精子进行分装以外，还需预备一份质量控制检测样品。对收集后未经处理的精液、用冷冻保护剂处理过的精液以及储存前、冻融后的精液均应观察其中的活动精子及其活动力。通过观察能追踪冷冻保存各阶段的精子生存情况，并能确保了解冷冻精子的存活能力。
冷冻保存精子,把“根”留住
冷冻保存精子，把“根”留住 利用“精子银行”留“根” “不等了，我们离婚吧!”在男科门诊常常能够听到这种无奈的话语。结婚多年的夫妻，因为丈夫的精液质量问题(无精子、少精、弱精、畸形精子等)而最终导致劳燕分飞。“精子荒”已经成为一个严峻的社会问题。当代男人的精子和生育能力正在经受严峻的考验，许多男人不约而同地将自救措施瞄准了“精子银行”或“精子库”，希望将自己的生育种子寄存在那里，以备不时之需。所谓“精子银行”或“精子库”，就是指超低温冷冻存放精子的地方和设备。 精液冷冻是保存生育能力的一个有效办法，在接受具有生殖毒性药物和仪器治疗前先保存精子，已成为一种选择。目前认为，“精子银行”主要适合于下列几类人： 第一，对于那些还没有完成“传宗接代”任务，而又处在高危因素笼罩下的男人来说，“精子银行”可以起到储备生育能力的作用，防止因为某些损害因素，包括药物、手术、损伤等造成的生育能力的永久性丧失。例如某些即将长期接触有害睾丸健康的特殊职业(辐射和放射线等)人群，因某些疾病(恶性肿瘤)不得不使用损害
睾丸的化疗药物，不得不手术切除睾丸(睾丸肿瘤)等的 人群，可以预先冷冻精液，起到“生殖储备”的作用。 这也是使用“精子银行”的主要人群。 第二，“精子银行”可作为用于治疗男性不育症的 手段，可以多次保存少精子症者的精液，起到积少成多 的作用，最后可以“集中优势兵力”，用于人工授精， 期望一举获得成功。另外，“精子银行”也是计划生育 措施顺利实行的有力保证。 精子冷冻安全，并非人人需要 低温冷藏的精子具有较高的质量和安全性，在零下196摄氏度的低温下可以将精子良好保存达数十年之久，且这些精子仍然具有生育能力。在低温保存过程中，还 可以淘汰许多发育异常的精子。一些携带传染性病原体 的献精员，例如艾滋病病毒携带者，也可以在精子冷藏 保存过程被发现而淘汰其精液。因此，采用“精子银行”的精子是比较安全且让人放心的，获得怀孕者自然流产 机会少，出生孩子畸形者少，后代素质高。 从理论上讲，所有男人的精子都可以保存在“精子 银行”里，从而使生育能力获得万无一失的保障。以现 今的科学技术，保存精子已经是非常简单的常规手段， 费用(每年2000～3000元)也可以承受，但并不是所有的男人都需要“精子银行”的帮助。
小鼠胚胎-精子冷冻保种申请表-清华大学试验动物中心
小鼠胚胎/精子冷冻保种申请表 需要填写的资料： 说明： 1.*表示必须填写； 2.保种方式的选择：我们采用精子冻存和胚胎冻存的方法进行保种；假如为杂合子，雄性数量≥3 只并且可以和B6交配做净化，我们推荐安乐死一只雄鼠使用精子冻存的方式保种，可以有效控制保种周期，不受雌鼠排卵多少的限制。 3.保种对提供小鼠的要求： 精子冻存 冷冻精子需要提供的小鼠信息：阳性纯合子雄鼠，2-3只，12-18W（最佳），生育能力良好，在实验前7d内进行过成功交配，而在3d内未交配过；冻存2只/品系，20个麦管。 费用：200元/麦管 冷冻的流程和所需的时间： 1)提前1周邮件预约申请，写明小鼠品系名称、数量、出生日期、所在位置。 2)通过申请后安排实验，精子冻存后至少1周进行复苏检测实验（1麦管）。 3)等待代孕小鼠生仔（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，（一周内反 馈检测结果。） 冷冻后的保存：液氮中保存 终生免费保存。 精子复苏（除复苏检测外） a、外来精子复苏 提前1周邮件预约申请，写明小鼠冻精信息（品系，数量），送达时间。
从接收之日起，1周内安排复苏实验 精子复苏采用体外受精的方式得到2-cell期胚胎，输卵管移植生仔。（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，一周内反馈检测结果。） 费用：IVF 500元，IVF用B6（含激素）40元/只，移植用受体单侧100元/只，双侧180元/只，试剂和人工费100元。 如需其他品系雌鼠，需从外单位订购。 b、动物中心精子复苏 提前1周邮件预约申请，写明复苏品系。 精子复苏采用体外受精的方式得到2-cell期胚胎，输卵管移植生仔。（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，一周内反馈检测结果。） 费用：IVF 500元，IVF用B6（含激素）40元/只，移植用受体单侧100元/只，双侧180元/只，试剂和人工费100元。 注意事项： 1. 运输过程中：请使用专业运输工具（航空罐）进行运输，运输过程中请避免磕碰，注意液氮充足。 2. 由于各家单位使用冷冻精子的方法和试剂并不相同，请一定提供冷冻和复苏的protocol作为参考，且不保证100%复苏成功。截止2015年9月，我们复苏精子平均成功率是40%。 胚胎冻存 品系内冻存需要提供的小鼠信息：雄鼠2-3只12-18W,雌鼠至少10只，3-4W或9-12W。正常情况下可冻存200枚胚胎左右。 费用3000元/品系。 与B6冻存：雄性小鼠，2-3只12-18W，中心提供雌性B6小鼠3-4W，30只。正常情况下可冻存500-600枚胚胎左右。 费用3000元/品系+B6费用40元/只。 c．冷冻流程和所需时间 提前1周邮件预约申请，写明小鼠品系名称、数量、出生日期、所在位置。 通过申请后一周左右安排实验，胚胎冻存采用体外受精的方式得到2-cell期胚胎，玻璃化冻存。胚胎冻存后至少1周进行复苏检测实验（1个冻存管，30 -50枚胚胎/管） 复苏回收的成活2-cell，采用输卵管移植到代孕母鼠体内，19.5天生仔，1-12天剪尾通知取回检测，（一周内反馈检测结果。） 冷冻后的保存：液氮中保存 终生免费保存。 胚胎复苏（除复苏检测外） a、外来胚胎复苏 提前1周邮件预约申请，写明小鼠冻存胚胎信息（品系，数量）送达时间。 从接收之日起，1周内安排复苏实验，输卵管移植生仔。（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，一周内反馈检测结果。） b．动物中心胚胎复苏 提前1周邮件预约申请，写明复苏品系。 通过申请后1周左右安排复苏实验，输卵管移植生仔。（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，一周内反馈检测结果。） 费用：移植用受体单侧移植100元/只，双侧移植180元/只，试剂和人工费100元。 注意事项： 1.运输过程中：请使用专业运输工具（航空罐）进行运输，运输过程中请避免磕碰，注意液氮 充足。 2.由于各家单位使用冷冻精子的方法和试剂并不相同，请一定提供冷冻和复苏的protocol作 为参考，且不保证100%复苏成功。截止2015年9月，我们复苏胚胎平均成功率是60%。