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重离子束辐照阿维菌素菌种选育与发酵工艺优化

重离子束辐照阿维菌素菌种选育与发酵工艺优化

1662023年4月下 第08期 总第404期学术研究China Science & Technology Overview0.引言阿维菌素是一种生物农药,符合世界农药发展趋势和我国产业政策。

被广泛用于动植物病害防治,是主要的生物农药和兽药品种之一,作为推荐使用的高效低毒的农药产品,具有较好的市场前景。

菌种选育常用的方法包括化学诱变、r-射线辐照诱变、基因重组等,重离子束辐照诱变具有周期短、稳定性好等优点,诱变选育阿维菌素菌种,不仅可以提高阿维菌素的产能,还使有效组分AVMB1a 组分比例显著提高。

1.菌种选育利用中国科学院近代物理研究所中重离子束辐照诱变的高产菌株。

首先在实验室对小 试基本条件进行验证,分别从温度、湿度、摇床转速、振幅、摇瓶容积、装液量等方面进行试验,确保实验室条件满足小试需求,再对重离子束诱变获得的菌株进一步分离纯化及筛选,获得性能相对稳定的高产菌株[1]。

1.1分离纯化将出发菌种铲取0.2cm 2~0.5cm 2大小菌苔制备单孢子菌悬液备用。

用十倍稀释法一次做10-2、10-3、10-4、10-5梯度。

用吸管吸取稀释液,滴加1滴(约0.3ml ~0.5ml)于各个平板中,涂布10-3、10-4、10-5梯度。

27.5℃±0.5℃恒温培养6d ~7d 后保存备用。

1.2 初筛挑选草帽型(如图1所示为菌落形态)、灰白色、饱满、较圆、直径0.25mm 以上形态较好的单菌落均匀涂于斜面。

27.5℃±0.5℃,湿度30%~40%,6d ~7d 后斜面具有如下特征:斜面表面全部长满均匀一致、灰白色孢子,斜面背面有微黄色色素扩散至琼脂中。

培养成熟的斜面保存备用。

种子摇瓶培养:250ml 三角瓶,装量40ml。

铲取F1代斜面0.5cm 2~1cm 2左右到种子摇瓶中,每支斜面接一支摇瓶。

恒温27.8℃~28.2℃,转速260转/min,振幅2.5cm,培养28h 后摘下备用。

阿维菌素催化加氢制备伊维菌素的研究

阿维菌素催化加氢制备伊维菌素的研究

阿维菌素催化加氢制备伊维菌素的研究摘要:伊维菌素是一种安全、广谱的抗寄生虫药物,目前已广泛用于人体及动物的抗寄生虫治疗。

伊维菌素主要采用对阿维菌素选择性催化加氢来制备。

对阿维菌素原材料处理后,当氢气压力0.6MPa,温度为45℃~50℃,反应时间4h,加氢反应活性达到最高,催化效果最高,转化率,选择性最高。

关键词:阿维菌素伊维菌素选择加氢原料处理伊维菌素是一种新型、广谱、高效、安全的杀虫杀螨剂[1],目前被广泛用于人体、动物和植物的杀虫剂、驱螨剂等。

在农业生产中用于去除作物的害虫害螨,兽医学上用于动物体内外驱杀寄生虫,医学上用于人体盘丝虫病的治疗[2-5]。

它是由美国Merck公司首先创制:由阿维菌素在甲苯溶液中通过Wilkinson催化剂选择加氢得到,产物为85%的伊维菌素和3%的3,4,22,23-四氢阿维菌素。

对于该催化选择加氢反应,在U,S专利4199569中[6]有较详细的阐述。

20世纪80年代后期,我国成功研制出了伊维菌素,并完成了新药的药理及临床治疗观察。

目前工业生产伊维菌素均采用阿维菌素选择催化加氢制得。

阿维菌素是阿佛曼链霉菌的生物发酵产物,它是一组有十六元环内酯与一个二糖所生成的苷,分子内有五个碳碳双键[7](图1)。

图1 阿维菌素分子结构阿维菌素是由八个组分(A1a、A1b、A2a、A2b、B1a、B1b、B2a、B2b)的混合物组成,商品用阿维菌素均指阿维菌素B1,其主要有效成分为阿维菌素B1a。

阿维菌素分子中含有5个碳碳双键(图1),在制备伊维菌素时,通过催化剂对阿维菌素B1a的C22=C23进行选择加氢制得,C22=C23是空间位阻最小且唯一处于顺式取代的双键,其次是位阻稍大的C3=C4双键,其余三个双键则位于一个刚性结构的16元环内酯内,加氢所需分子能量更高,在工业生产的反应条件下,未见其它加成副产物的生成,即其余三个双键未被打开[8]。

伊维菌素相比阿维菌素对哺乳动物的肌体组织有更强的渗透性,毒性更小,更加安全、高效[9]。

乙酰氨基阿维菌素的生产

乙酰氨基阿维菌素的生产

乙酰氨基阿维菌素的生产1.引言1.1 概述乙酰氨基阿维菌素是一种重要的抗生素,具有广谱抗菌活性,特别对于耐药菌株表现出较好的抑制作用。

它广泛应用于临床,用于治疗各种感染病症,如呼吸道感染、皮肤软组织感染和泌尿道感染等。

乙酰氨基阿维菌素的生产是一项复杂而精细的工艺,在医药行业具有重要意义。

乙酰氨基阿维菌素的生产工艺包括多个步骤,通常是通过微生物发酵来合成。

一般使用链霉菌属的菌株进行发酵,通过人工培养条件来促进菌株的生长和代谢产物的积累。

乙酰氨基阿维菌素的生产工艺涉及到发酵过程的优化、菌株的选育、培养基的配方、发酵条件的控制等多个方面。

通过合理地控制这些参数,可以提高乙酰氨基阿维菌素的产量和纯度,同时降低生产成本。

乙酰氨基阿维菌素的生产对医药行业具有重要意义。

首先,乙酰氨基阿维菌素是一种重要的治疗感染疾病的药物,能够有效地抑制病原微生物的生长,减轻患者的症状并缩短疾病的病程。

其次,乙酰氨基阿维菌素可以作为其他药物的辅助药物,提高治疗效果。

同时,乙酰氨基阿维菌素的生产也是医药工业的重要组成部分,对于推动医药工业的发展和促进经济增长具有积极作用。

未来乙酰氨基阿维菌素生产的发展方向主要包括两个方面。

一方面,通过优化生产工艺,提高乙酰氨基阿维菌素的产量和质量,降低生产成本。

另一方面,进一步研究乙酰氨基阿维菌素的药理作用和机制,探索其在其他领域的应用潜力。

随着科技的进步和医药领域的不断发展,相信乙酰氨基阿维菌素的生产将会取得更大的突破和进展,为人类健康事业做出更大的贡献。

文章结构部分的内容应该包括对整篇文章的组织和布局进行说明。

下面是对文章结构部分的一个示例描述:1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个主要部分。

1. 引言部分主要包括概述、文章结构和目的三个小节。

在概述部分,将介绍乙酰氨基阿维菌素这一化合物的背景和重要性。

在文章结构部分,将简要说明本文的整体组织结构。

在目的部分,明确本文旨在探讨乙酰氨基阿维菌素的生产工艺以及其对医药行业的意义。

抗生素杀虫剂:阿维菌素

抗生素杀虫剂:阿维菌素

抗生素杀虫剂:阿维菌素阿维菌素主要剂型有0.5%、0.6%、1%和1.8%乳油等,是一种新型抗生素杀虫剂,是土壤微生物灰色链霉菌发酵的代谢产物,具有广谱、高效、低残留和对人畜及环境安全等特点。

性能与特点:阿维菌素是一种抗生素类杀虫、杀螨、杀线虫剂,属昆虫神经毒剂。

作用机理是干扰害虫神经生理活动,刺激释放γ-氨基丁酸,作用于神经与肌肉接头,增加氯离子的释放,抑制神经接头的信息传递,导致害虫和害螨出现麻痹而中毒死亡。

阿维菌素具有胃毒和触杀作用,杀虫、杀螨活性高,比常用农药高5至50倍,用药量仅为常用农药的1%至2%。

但阿维菌素无内吸及熏蒸作用,对尚未完成胚胎发育的卵无效,但对即将孵化的卵有一定的杀伤作用。

喷雾后对叶片有很强的渗透作用,残效期长,并可渗入植株体内杀死叶片表皮下的害虫,且受降雨的影响小。

螨成虫、若虫中毒后,麻痹,不活动,停止取食,2至3天后死亡。

因不引起昆虫迅速脱水,所以作用速度缓慢。

阿维菌素对捕食性昆虫和寄生性天敌没有直接触杀作用,因植物表面残留少,因此,对益虫的损伤小。

与常用有机磷、拟除虫菊酯类农药和杀螨剂无交互抗性。

在土壤内被土壤吸附,不会移动,并且被微生物分解,因而在环境中无累积作用。

阿维菌素可用于防治多种园林植物上的螨虫、鳞翅目、同翅目和鞘翅目的主要害虫。

特别适合于防治对其他类型农药已产生抗药性的害虫,但不宜连续使用,也要轮换用药。

使用技术:害螨幼螨、若螨发生期,用1.8%阿维菌素乳油7000 至9000 倍液均匀喷雾防治;防治木虱时,用1.8%阿维菌素乳油6000 至8000 倍液;防治棉铃虫用1.8%阿维菌素乳油2000 至4000 倍液;防治桃潜叶蛾时,用1.8%阿维菌素乳油3000 至4000 倍液;防治桃小食心虫、李小食心虫等食心虫类害虫,在幼虫孵化初期,用1.8%阿维菌素乳油3000 至4000 倍液;园林植物生长期防治根结线虫时,用1.8%阿维菌素乳油1000 至1500 倍液灌根。

阿维菌素的发酵

阿维菌素的发酵

阿维菌素的发酵一、实验目的学习阿维菌素的发酵过程二、实验原理阿维菌素的发酵共分三大工序:菌种、发酵、提取。

配合三个工序进行分析化验和有关产物测定。

衡量抗生素发酵液中抗菌物质的含量称效价。

抗生素效价测定可采用化学法或生物效价测定法。

本实验采用高效液相色谱法测定抗生素的效价。

三、实验材料1. 菌株阿维菌素链霉菌斜面菌种。

2. 培养基培养阿维菌素链霉菌所用的斜面培养基、分离培养基、种子培养基、发酵培养基。

见附录Ⅲ。

3. 仪器及药品接种环,培养皿,三角瓶,摇床,离心管,高效液相色谱柱,漩涡振荡器,微孔滤膜,淀粉酶,丙酮,乙酸乙酯,无菌水。

四、实验方法1. 实验用菌种的制备(1)单孢子悬液的制备向阿维菌素链霉菌孢子斜面中加入10mL无菌水,用接种环刮取孢子,震荡打碎,过滤得到单孢子悬液。

(2)自然分离将得到的单孢子悬液稀释,分别涂布于含有分离培养基的平皿中,在28℃条件下培养7~9天。

2. 发酵培养基和待检测发酵液样品的制备(1)水解淀粉的制备称取玉米淀粉200g,先加入少量水混合均匀,加热使其糊化,降温至60℃,然后在糊化的淀粉液中加入的淀粉酶,恒温搅拌10min,最后加热至沸腾状态,保温5min,使残留的淀粉酶失活,降温待用。

(2)液体发酵铲取面积为×㎝2大小的斜面培养物,将其接种至种子瓶的培养基中,28℃摇床培养22h 后,按发酵摇瓶装料体积的5%接种至发酵瓶中,28℃培养9天。

(3)检测发酵液中阿维菌素样品的制备取5mL摇瓶发酵液于离心管中,3000r/m离心10min,弃去上清夜。

在发酵液的沉淀物(菌丝体)中加入2mL丙酮,在漩涡式混合器上震荡1min,静置10min,如此重复3次。

然后加入3mL乙酸乙酯,震荡1min,静置10min,3000r/m离心10min,最后小心地吸取其中的上清夜作为样品,待检测。

3. 阿维菌素含量的测定利用高效液相色谱法(HPLC)检测(1)HPLC条件色谱柱:Kromasil C18 5μm 200×流动相: CH2OH∶H2O﹦88∶12(V/V)流速:min检测波长:244nm(2)标准曲线的测定配制一系列不同浓度的阿维菌素B1标准溶液(500~3000μg/mL),分别取各浓度标准溶液的过滤液5μL注入高效液相色谱仪中,测定其吸收峰值面积,然后对浓度(Y)和吸收峰面积(X)进行一元线性回归,得到一元线性回归方程。

阿维菌素发酵过程液体特性分析

阿维菌素发酵过程液体特性分析

阿维菌素发酵过程液体特性分析作者:向华平来源:《中国化工贸易·上旬刊》2019年第01期摘要:在15L发酵罐中放入阿维菌素进行发酵培养,研究发酵液的流体特性,发酵液的流变特性分析从两方面进行,一种是生物量,另一种是菌丝形态,在此基础上进一步分析参数变化。

实验结果显示,阿维菌素发酵液具有剪切稀化特性,具有一定的规律变化,如:表观粘度和稠度系数。

阿维菌素发酵过程如果是在高溶氧条件下进行,那么,前期发酵液流体特性及反应器流场的监控非常必要。

关键词:阿维菌素;流体特性;流场监控1材料与方法1.1菌种和培养基菌种斜面培养基(%):酵母膏0.1,麦芽糖0.1,胰蛋门胨0.2,葡萄糖0.4,琼脂粉1.5; 灭菌前pH7.2。

种子培养基(%):淀粉3.0,黄豆饼粉1.1,花生饼粉1.0,酵母膏0.4,CoCl20.003,a-淀粉酶3 u/g淀粉;灭菌前pH7.6。

发酵培养基(%):淀粉13.0,黄豆饼粉2.55,酵母粉1,氯化钴0.0021,自来水配制,灭菌前pH6.8-7.0。

1.2培养方法种子培养:借助无菌接种铲将成熟斜面上的孢子接种于种子培养摇瓶中,并放于28℃摇床上培养48h。

发酵:发酵培养基的摇瓶中接种种子液,容量为50mL,接种量为5%。

摇床在220r/min 下,温度28℃。

15L发酵罐培养:摇瓶菌丝体接种,接种量5%,培养温度280C,装量IOL。

对参数进行在线测量和计算,如:尾气氧、温度、CO2、OUR、CER、RO等。

1.3分析方法分析方法是将2.5mL发酵液中加入甲醇振荡,待20分钟后过滤,最后测定效价。

采用微量注射器对20μL样品中的滤液准确吸附,并注入高效液相色谱仪。

根据积分面积,发酵效价采用外标法计算。

发酵液流变参数的测定:取3mL左右发酵液倒人适配器中,根据发酵液粘度高低没定测定流变的控制程序,即确定初始转速和最终转速及转速增量,平稳时间。

将测定数据保存备用。

1.4阿维菌素发酵实验方案①搅拌转速相同条件下,反应器内产生相同平均剪切力;②实验操作中剪切力可忽略,在此基础上确定操作工艺。

阿维菌素发酵车间实习报告

阿维菌素发酵车间实习报告

实习单位:XX生物制药有限公司实习时间:2023年X月X日至2023年X月X日实习岗位:阿维菌素发酵车间操作员一、实习目的通过本次实习,我旨在深入了解阿维菌素的发酵工艺流程,掌握发酵车间的操作规范和安全知识,提高自己的实际操作能力和团队协作精神,为今后从事生物制药行业打下坚实基础。

二、实习内容1. 发酵工艺流程学习在实习期间,我首先学习了阿维菌素的发酵工艺流程。

该流程主要包括以下步骤:(1)菌种活化:将阿维菌素链霉菌斜面菌种接种到种子培养基中,进行活化培养。

(2)种子扩大培养:将活化后的菌种接种到发酵培养基中,进行扩大培养。

(3)发酵:将扩大培养后的菌种接种到发酵培养基中,进行发酵生产。

(4)提取与纯化:将发酵液进行提取、纯化,得到阿维菌素产品。

2. 发酵车间操作规范学习在发酵车间实习期间,我了解了以下操作规范:(1)发酵车间应保持整洁、干净,定期进行消毒。

(2)操作人员应穿戴防护服、手套、口罩等个人防护用品。

(3)发酵过程中,应严格控制温度、pH值、溶解氧等参数。

(4)发酵过程中,应密切观察菌种生长情况,及时调整发酵条件。

3. 发酵设备操作学习在实习期间,我学习了以下发酵设备的操作:(1)发酵罐:了解发酵罐的结构、工作原理及操作方法。

(2)搅拌器:掌握搅拌器的安装、调试、操作及维护。

(3)温度控制器:学习温度控制器的使用方法,确保发酵过程中温度稳定。

(4)pH值控制器:了解pH值控制器的原理及操作方法,保证发酵过程中pH值稳定。

4. 安全知识学习在发酵车间实习期间,我学习了以下安全知识:(1)发酵车间应定期进行安全检查,消除安全隐患。

(2)操作人员应熟悉各种危险品的性质及应急处置方法。

(3)发生事故时,应立即启动应急预案,确保人员安全。

三、实习收获1. 理论联系实际通过本次实习,我将所学的理论知识与实际操作相结合,加深了对发酵工艺流程的理解。

2. 操作技能提升在实习过程中,我熟练掌握了发酵车间的操作规范和设备操作方法,提高了自己的实际操作能力。

变温控制工艺在阿维菌素发酵中的应用

变温控制工艺在阿维菌素发酵中的应用

变温控制工艺在阿维菌素发酵中的应用摘要:本实验针对在阿维菌素发酵过程不同阶段,采用变温控制对发酵效价的影响进行了研究。

结果表明,在发酵过程前期(0~72h)温度控制在28.0±0.5℃,中期(73h~168h)提高温度至29.0±0.5℃,发酵后期(168h~240h)温度控制在28.0±0.5℃,得到的发酵液平均效价提高18.7%。

关键词:变温控制恒温控制阿维菌素发酵抗生素发酵一般不能在整个发酵周期内只选一个恒定的培养温度,因为适合于菌体生长的温度不一定p1 材料1.1 菌种阿佛曼链霉菌(S.avermitilis ZH 63-42),购自中科院微生物研究所。

1.2 发酵培养基配方玉米淀粉130g、豆饼粉25g、酵母粉8g、硫酸铵0.25g、碳酸钙0.5g、2.5%氯化钴溶液1ml、1.5%钼酸钠溶液1ml、0.35%硫酸锰溶液1ml、淀粉酶0.05g,用纯净水定容至1000ml,调pH至7.4。

1.3 主要实验设备全温摇瓶柜:HYG-A型,太仓市实验设备厂;HPLC:岛津色谱仪,反向Cl8柱,检测波长245nm,流速1.0ml/min,柱温30℃,进样量30μl。

2 实验方法2.1 摇瓶制备将配好发酵摇瓶培养基分装于250ml三角瓶中,装量为每瓶35ml,在121℃灭菌30分钟。

将同一斜面上面积为0.50cm2的孢子接入种子摇瓶,在摇床上摇48h,而后以5%的接种量接入发酵摇瓶,摇10天。

2.2 温度控制对照组的采用28.0±0.5℃的恒温控制;实验组分前、中、后三个阶段,每次对一个阶段实行29.0±0.5℃的变温控制,其他两个阶段保持28.0±0.5℃的恒温控制。

2.3 变温阶段的时间分配根据微生物生长曲线的特点,将变温控制的前期定为培养过程的0~72h,中期定为培养过程73h~168h,后期定为培养过程169h~240h。

2.4 实验数据的可信性和可比性措施每个阶段的变温均进行7次试验,实验组和对照组的摇瓶都为5瓶;接种时,两组摇瓶采用同一菌种和同批培养基;实验组和对照组分别放到两个同一型号摇瓶柜中的相同位置,B1a效价为考虑失水量进行折算后的数据。

阿维菌素生产工艺流程图

阿维菌素生产工艺流程图
3%-4%活性炭脱色3%-4%活性炭脱色
温度60~80℃
附表阿维菌素生产工艺流程图2805培养1012天27285272855060h200320h过滤b1a质量100120倍乙醇120150热风干燥浸取三次温度80蒸发b1a质量56倍甲苯乙醇回收80热水脱糖6085蒸发b1a质量3倍乙醇甲苯回收晶体78倍乙醇晶体ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ10倍乙醇34活性炭脱色34活性炭脱色温度6080菌悬液种子培养液发酵液菌丝体浸取液蒸发液脱糖液浓缩液三次晶干燥粉碎混合出发菌株生产斜面成品包装一次结晶二次结晶三次结晶
附表:阿维菌素生产工艺流程图
28℃±0.5℃
培养10-12天
27-28.5℃27-28.5℃
50-60h200-320h
过滤B1a质量100-120倍乙醇
120-150℃热风干燥浸取三次
温度≤80℃蒸发B1a质量5~6倍甲苯
乙醇回收80℃热水脱糖
60~85℃蒸发B1a质量3倍乙醇
甲苯回收
晶体7-8倍乙醇晶体9-10倍乙醇

阿维菌素生产工艺

阿维菌素生产工艺

04
阿维菌素生产质量控制
质量控制标准
纯度要求
阿维菌素产品的纯度应达到95%以上 ,以确保产品的稳定性和有效性。
微生物限度
阿维菌素中不得含有对人和动物有害 的微生物,应严格控制微生物限度。
安全性评估
阿维菌素应经过安全性评估,确保产 品在使用过程中不会对人体和环境造 成危害。
稳定性评估
阿维菌素应经过稳定性评估,确保产 品在储存和使用过程中不会发生变质 或降低效价。
化学合成设备
对于部分阿维菌素产品,还需要进 行化学合成,所需的设备包括反应 釜、冷凝器、真空泵等。
设备选型与配置
根据生产规模和工艺要求选择合适的 设备型号,确保设备性能稳定可靠, 能够满足大规模生产的需要。
合理配置设备,确保生产流程顺畅, 提高生产效率。同时要注重设备的维 护和保养,延长设备使用寿命。
03
阿维菌素的衍生物和类似物的 研究与开发,将进一步拓展阿 维菌素的应用领域和市场空间 。
02
阿维菌素生产工艺流程
发酵工艺流程
01
02
03
04
菌种制备
选择适合阿维菌素生产的菌种 ,并进行种子培养,为发酵过
程提供足够的菌体量。
种子扩大培养
将制备好的菌种进行扩大培养 ,使菌体量达到发酵所需的浓
度。
发酵过程
质量影响因素及控制措施
原料质量
确保原料质量符合标准, 是保证阿维菌素产品质量 的前提。应对原料进行质 量检查和控制。
生产工艺
阿维菌素的合成过程中, 应严格控制反应条件和操 作参数,以确保产品质量 和稳定性。
储存条件
阿维菌素应在适当的温度 和湿度条件下储存,以保 持其稳定性和效价。应定 期检查储存条件并记录。

阿维菌素水乳剂配方及工艺

阿维菌素水乳剂配方及工艺

阿维菌素水乳剂配方及工艺武辉上海万金助剂有限公司阿维菌素是由日本北里大学大村智等和美国Merck公司首先开发的一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物,由链霉菌中灰色链霉菌Streptomyces avermitilis 发酵产生。

天然阿维菌素中含有8个组分,即A1a、A1b、A2a、A2b、B1a、B1b、B2a和B2b。

因为B1a生物活性最高,目前市售阿维菌素原药是以Avermectin B1a的含量来标定,且以阿维菌素结晶粉和油膏两种型态进行销售,在市场销售量约各占一半。

阿维菌素结晶粉外观为白色或黄白色,比重1.16,熔点150~155℃,蒸气压1.5×10-9Pa,21℃时溶解度在水中为10微克/升,丙酮中100毫克/毫升,乙醇中20毫克/毫升,甲醇中19.5毫克/毫升,氯仿中25毫克/毫升,环己烷中6毫克/毫升,异丙醇中70毫克/毫升,煤油中0.5毫克/毫升,甲苯中350毫克/毫升。

阿维菌素属高毒杀虫剂。

原药大鼠急性经口LD50为l0毫克/千克,兔急性经皮LD50大于2000毫克/千克,大鼠急性经皮LD50大于380毫克/千克,大鼠急性吸入LC50大于5.7毫克/ 升。

[1]阿维菌素油膏通常含量在4~11%之间,一般为重结晶提取阿维晶粉后母液。

阿维晶粉贮存易分解,阿维油膏则贮存稳定。

依据上述阿维菌素性质特点,且考虑到绿色环保、经济成本和制剂工艺便利等因素,阿维油膏适合加工的主要剂型选择有水乳剂、微乳剂和微胶囊悬浮剂等,首选水乳剂剂型;而阿维晶粉则适合加工成悬浮剂、水乳剂、微乳剂和微囊悬浮剂等,重点在悬浮剂。

阿维油膏目前主要加工剂型为乳油,由于阿维油膏含量差异较大,不同原药生产厂家工艺不同,通常乳油加工配方还需相应调整,造成制剂质量差异较大。

加工成水乳剂就目前配方技术已能很好解决上述问题,下述阿维菌素水乳剂配方通用性强,适用于不同厂家产不同含量阿维油膏,利于工厂化生产。

阿维菌素是一种叫做阿佛曼链霉菌或灰色链霉菌的微生物发酵产物

阿维菌素是一种叫做阿佛曼链霉菌或灰色链霉菌的微生物发酵产物

阿维菌素是一种叫做阿佛曼链霉菌或灰色链霉菌的微生物发酵产物。

由于其中没有活的微生物,所以不算微生物源杀虫剂。

它含有多种杀虫成分,其中B1a的药性最强并以它来计算药剂的有效含量。

阿维菌素的第一个特点是高效并能杀死多种害虫,包括鳞翅目、双翅目、同翅目、鞘翅目害虫和叶螨、锈螨,还是杀灭多种寄生线虫的高效药剂;第二个特点是与其他杀虫剂的药性不一样,不易产生抗药性;第三个特点是安全,由于喷到植物表面的药剂能够很快分解,所以对天敌比较安全,对环境少污染,即使使用过量10倍也不会引起植物药害。

缺点:一是杀死害虫的速度较慢,害虫吃了阿维菌素,先是行动迟缓,不取食,2~4天后才死亡,农民朋友往往以为药效不好;二是原药毒性大,各种成药都以低的有效成分含量来降低药剂的毒性级别,但使用中仍需注意安全。

阿维菌素虽然是好药也不能滥用。

目前它还是比较贵的,一般在蔬菜田用于防治小菜蛾、菜青虫、潜叶蝇、夜蛾、叶螨,在果树上防治各种螨、锈壁虱、木虱、粉蚧以及蚜虫和鳞翅目害虫,以及在其他作物上一些难于用其他药剂控制的或已经对常用药剂产生抗、耐药性的害虫,如棉叶螨、棉铃虫。

能用其他药剂的地方尽可能不用这种药剂,也算是一种保护吧。

近年研发了一系列含阿维菌素的混合杀虫剂,如与各种菊酯类药剂混用,与毒死蜱混用等等,往往能够起到加速害虫死亡速度;增加触杀或其他作用方式;延缓害虫产生耐药性的效果,值得应用。

另外,从品种开发上,一种叫做甲氨基阿维菌素苯甲酸盐,另一种叫做富表甲氨基阿维菌素的类似药剂已经经过试验证实比阿维菌素的杀虫活性更高,对人畜毒性更低,有很好的应用前景。

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阿维菌素的发酵
阿维菌素的发酵
阿维菌素的发酵
一、实验目的
学习阿维菌素的发酵过程
二、实验原理
阿维菌素的发酵共分三大工序:菌种、发酵、提取。

配合三个工序进行分析化验和有关产物测定。

衡量抗生素发酵液中抗菌物质的含量称效价。

抗生素效价测定可采用化学法或生物效价测定法。

本实验采用高效液相色谱法测定抗生素的效价。

三、实验材料
1. 菌株阿维菌素链霉菌斜面菌种。

2. 培养基培养阿维菌素链霉菌所用的斜面培养基、分离培养基、种子培养基、发酵培养基。

见附录Ⅲ。

3. 仪器及药品接种环,培养皿,三角瓶,摇床,离心管,高效液相色谱柱,漩涡振荡器,微孔滤膜,淀粉酶,丙酮,乙酸乙酯,无菌水。

四、实验方法
1. 实验用菌种的制备
(1)单孢子悬液的制备
向阿维菌素链霉菌孢子斜面中加入10mL无菌水,用接种环刮取孢子,震荡打碎,过滤得到单孢子悬液。

(2)自然分离
将得到的单孢子悬液稀释,分别涂布于含有分离培养基的平皿中,在28℃条件下培养7~9天。

2. 发酵培养基和待检测发酵液样品的制备
(1)水解淀粉的制备
称取玉米淀粉200g,先加入少量水混合均匀,加热使其糊化,降温至60℃,然后在糊化的淀粉液中加入0.6g的淀粉酶,恒温搅拌10min,最后加热至沸腾状态,保温5min,使残留的淀粉酶失活,降温待用。

(2)液体发酵
铲取面积为0.5×0.5㎝2大小的斜面培养物,将其接种至种子瓶的培养基中,28℃摇床培养22h后,按发酵摇瓶装料体积的5%接种至发酵瓶中,28℃培养9天。

(3)检测发酵液中阿维菌素样品的制备
取5mL摇瓶发酵液于离心管中,3000r/m离心10min,弃去上清夜。

在发酵液的沉淀物(菌丝体)中加入2mL丙酮,在漩涡式混合器上震荡1min,静置10min,如此重复3次。

然后加入3mL乙酸乙酯,震荡1min,静置10min,3000r/m离心10min,最后小心地吸取其中的上清夜作为样品,待检测。

3. 阿维菌素含量的测定
利用高效液相色谱法(HPLC)检测
(1)HPLC条件
色谱柱:Kromasil C18 5μm 200×4.6mm
流动相: CH2OH∶H2O﹦88∶12(V/V)
流速:1.0mL/min
检测波长:244nm
(2)标准曲线的测定
配制一系列不同浓度的阿维菌素B1标准溶液(500~3000μg/mL),分别取各浓度标准溶液的过滤液5μL注入高效液相色谱仪中,测定其吸收峰值面积,然后对浓度(Y)和吸收峰面积(X)进行一元线性回归,得到一元线性回归方程。

(3)效价的计算方法
将乙酸乙酯萃取所得的上清夜用0.45μm的微孔滤膜过滤,准确吸取滤液5μl注入HPLC中,记录色普图,将B1峰面积代入上述的回归方程中,计算得到发酵液中B1组分发酵单位(μg/mL)。

4. 发酵液中菌体浓度的计算
取体积为V1(mL)的发酵液,3000r/m离心10min后,得到上清夜的体积计量为,V2(mL),那么发酵液的菌体浓度为:
菌体浓度=[(V1-V2)/ V1]×100%
五、实验报告
绘制标准曲线,并记录实验结果。

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