IQ TM5多重实时荧光定量PCR仪快速检测肠道病毒RNA及其临床意义
实时荧光RT-PCR快速检测肠道病毒RNA及其临床意义
所有数据 使用 Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ １ ５统 计 软 件 进 行
分析 ， 部采用 Ｙ 全 检 验 分 析 ， Ｐ＜ ０ ０ 以 ． ５为 差 异 具 有 统 计 学
检 测 ， 手 足 口病 的早 期 诊 断 、 疗 和 预 后 观 察 显 得 尤 为 重 要 。 对 治 本 文 应 用 实 时 荧 光 逆 转 录一 合 酶 链 反 应 （ Ｔ Ｐ Ｒ） 测 了 聚 Ｒ Ｃ 检 ２ ６份 手 足 口 病 患 儿 粪 便 、 脊 液 标 本 ． 别 测 定 肠 道 病 毒 ３ 脑 分 （ Ｖ） 用 型 （ 下 简 称 Ｅ 、 萨 奇 病 毒 Ａ 组 １ （ Ａ１ ） Ｅ 通 以 Ｖ） 柯 ６ Ｃ ６ 和
地 区手 足 口病 患 儿 中 Ｃ ６和 Ｅ １均 有 感 染 ， 以 Ｅ １为 Ａ１ Ｖ７ 但 Ｖ７
１ １ 标本 来源 ．
检测标本均来 自 ２ １ ０ ０年 ５ ～８月本院手足 口
主 。其 中有 ４例 标 本 同时 检 出 Ｅ １和 Ｃ ６ 表 明存 在 这 两 Ｖ７ Ａ１ ，
病住 院患儿 ， 集 粪便 及 脑脊 液 标 本 ２ ６份 ， 采 集 标 本 ３ 采 ３ 所 ｏ
３ ， 时满足两个条件 ， 实验有效 ， 则需重新检测 。 Ｏ同 则 否 １３５ 统 计学方法 ．．
意义 。
２ 结 果
习 ， 在 一 定 程 度 上 给 社 会 造 成 不 稳 定 的 因 素 。 特 别 是 ２ ０ 且 ０８ 年 ３ 在 安 徽 阜 阳 爆 发 的 手 足 口病 疫 情 ， 现 了部 分 死 亡 病 月 出
为 ９． ５ ； Ａｌ １ ４ Ｃ ６阳 性 ５ ６例 ， 阳性 率 为 ２ ． Ｏ ； Ｖ７ ３ ５ Ｅ １阳性 ８ ７例 ， 性 率 ３ ． ７ ， 中有 ４例 同 时检 出 Ｃ ６和 阳 ７ １ 其 Ａ１
荧光定量PCR技术在医学检测中的应用研究
荧光定量PCR技术在医学检测中的应用研究一、引言PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种能够扩增DNA 分子序列的技术，广泛应用于医学诊断、环境监测、生物学研究等领域。
其中，荧光定量PCR技术作为PCR技术的一种变种，具有高灵敏度、高特异性和高准确度等优点，在医学检测中得到广泛应用。
二、荧光定量PCR技术原理荧光定量PCR技术是一种基于荧光探针检测PCR扩增产物的技术。
当PCR反应进行到合成新链阶段时，荧光探针与PCR产物结合，导致荧光信号的释放。
通过检测反应体系中的荧光信号强度，可以确定模板DNA的初始数量和扩增情况。
具体而言，荧光定量PCR技术分为两类。
一类是多重实时荧光定量PCR技术（Real-time PCR），它可以同时检测多个抗原或位点，具有高通量、高速度和高灵敏度等特点。
另一类是数字PCR 技术（Digital PCR），它则可以对DNA分子进行分子计数，具有更高的准确性和可靠性。
三、荧光定量PCR技术在医学检测中的应用1. 检测病原体荧光定量PCR技术可以快速、准确地检测病原体，例如呼吸道病毒、肠病毒、流感病毒等。
采用多重实时荧光定量PCR技术可以实现多个病原体的同时检测，对于快速诊断和治疗有着重要意义。
2. 遗传疾病诊断荧光定量PCR技术可以对基因突变进行检测，为遗传疾病的早期诊断和治疗提供了有效手段。
例如，使用荧光定量PCR技术可以检测肌萎缩侧索硬化症相关基因的突变，为临床医学提供重要的参考数据。
3. 检测癌症荧光定量PCR技术可以检测肿瘤标志物，并对肿瘤进行定量分析。
例如，在乳腺癌的筛查中，可以采用荧光定量PCR技术检测乳腺癌相关基因的表达情况，为肿瘤的早期诊断和治疗提供参考数据。
4. 检测基因表达荧光定量PCR技术可以对基因表达进行定量检测，为研究基因功能及表达调控提供了有效手段。
例如，在研究心脏病发病机制中，可以采用荧光定量PCR技术检测心脏病相关基因的表达情况，从而揭示其发病机制。
实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展
实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR，Real-time qPCR）是一种通过荧光信号实时测量PCR产物累积量的技术，可以在PCR反应过程中实时监测PCR 产物的数量。
这种技术结合了常规PCR技术的放大特异性和荧光标记探针的特异性探测，使得PCR分析更加准确、精确。
实时荧光定量PCR技术广泛应用于基因表达分析、病原体检测、细胞检测、突变分析等领域。
下面将分别介绍该技术在不同领域的应用研究进展。
在基因表达分析中，实时荧光定量PCR可用于测量特定基因在不同组织或不同发育阶段中的表达量。
该技术的灵敏度高、动态范围广，并可同时分析多个基因。
通过实时监测PCR产物的累积，可以获得准确的基因表达水平。
实时荧光定量PCR还可以用于研究非编码RNA的表达，如长非编码RNA（lncRNA）和微小RNA（miRNA）。
在病原体检测中，实时荧光定量PCR可用于快速、准确地鉴定和定量各类病原体。
各类病毒、细菌、真菌等的快速检测和定量分析。
由于实时荧光定量PCR具有高灵敏度和高特异性，能够在短时间内完成大量样本的分析，广泛应用于临床诊断和食品安全领域。
在细胞检测中，实时荧光定量PCR被用于检测细胞中的特定基因表达水平，并研究基因在细胞中的调控机制。
通过测量细胞内转录因子基因的表达变化，可以了解基因调控网络的变化情况。
在突变分析中，实时荧光定量PCR可用于检测某一基因的突变频率，如药物抗性相关基因的突变频率。
通过实时监测突变型和野生型基因的相对数量，可以计算出突变频率，为个性化药物治疗提供参考。
实时荧光定量PCR技术具有高灵敏度、高特异性、高准确度和高通量性等优点，在生命科学研究和临床应用中发挥着重要作用。
随着技术的不断进步和应用领域的不断拓展，实时荧光定量PCR技术在分子生物学领域的应用前景将更加广阔。
Biorad IQ5实时荧光定量PCR仪
仪器功能介绍：Biorad IQ5实时荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台, 将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可以动态观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物逐渐增加的情况。
PCR实验结束后可以马上得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。
可用于核酸定量、基因表达水平分析、基因突变检测、GMO检测及产物特异性分析等多种研究领域。
仪器主要技术参数：主要性能五色荧光PCR系统，可实现5重PCR，可同时检测5个靶基因有梯度PCR功能，可以同时运行8个不同的温度完全试剂开放，各种科研和临床试剂适用适用于多种荧光方法，如Taqman，Molecular Beacon，双FRET探针，SYBR Green I等采用普通的PCR薄壁管、96孔板等，消耗品成本低主要技术要求样品容量：96×0.2ml样品体积：10-100μl光源：卤钨灯检测器：高灵敏CCD升降温速度：3.3℃/sec温控范围：4-100℃温度准确性：±0.3℃温度均一性：±0.4℃温度梯度功能：同时运行8个不同的温度；梯度温控范围：40 -99℃；梯度温差范围：1 - 25℃激发/发射波长范围：400-700nm灵敏度：能检测人类基因组中单拷贝IL-1β基因动态范围：9个数量级激发/发射滤光片：含5套预装滤光片：FAM/SYBR GREEN，HEX/TET/VIC/JOE，TAMRA/Cy3，Texas Red/ROX，Cy5数据分析：可同时分析5色荧光PCR数据；仪器使用注意事项：1.本设备必须使用规格为200 uL的八连管或者96孔反应板；2.加样操作时请戴手套，保持八连管或者96孔反应板盖部清洁，以免影响荧光读取；3.实验数据请使用实验中心专用优盘拷贝，请勿私自使用个人优盘拷贝。
实时荧光定量PCR仪
实时荧光定量PCR仪仪器原理及应用实时荧光定量PCR仪是一种基于PCR技术的分子生物学仪器。
它可以实时监测PCR 反应过程中的荧光信号，从而实现对靶标DNA的定量分析。
该仪器的原理基于原始的聚合酶链式反应（PCR）技术，通过PCR产生的DNA序列与特定荧光探针的结合，释放出荧光信号进行定量测量。
实时荧光定量PCR仪在生物医学研究、基因表达分析、病原体检测等方面具有广泛的应用。
通过该仪器，科研人员可以快速、准确地检测靶标DNA的含量，并获得相应数据用于后续分析。
仪器特点实时荧光定量PCR仪具有以下几个特点：1. 高灵敏度实时荧光定量PCR仪可以检测非常低浓度的靶标DNA，甚至达到单个分子的级别。
这一特点使得该仪器在医学诊断和疾病早期检测中具有很大潜力。
2. 高准确性该仪器采用荧光定量技术，能够实时监测PCR反应过程中的荧光信号，从而避免了传统PCR反应后的测量误差。
同时，实时荧光定量PCR仪还具有内标校正功能，能够准确地计算出靶标DNA的含量。
3. 广泛应用实时荧光定量PCR仪在生物医学领域有着广泛的应用。
它可以用于基因表达分析、病原体检测、遗传疾病的检测等方面。
同时，该仪器还可以应用于农业科学、环境监测、食品安全等领域。
使用方法使用实时荧光定量PCR仪进行实验需要以下步骤：1. 样本制备首先需要从待测样品中提取目标DNA，并进行纯化和扩增。
这一步骤可以根据具体实验目的选择不同的提取方法。
2. 反应液的配置将所需的PCR反应药物配置出合适的反应液。
其中包括靶标DNA的引物和荧光探针，以及聚合酶和其他辅助物质。
3. 仪器设置将PCR反应液加入到实时荧光定量PCR仪的孔板或管条中，然后将样品放入仪器中。
根据实验需要设置合适的温度和时间条件。
4. 实时检测启动仪器后，开始进行PCR反应和实时荧光检测。
仪器会不断地记录PCR反应过程中的荧光信号，并将数据输出保存。
5. 数据分析使用相应的分析软件对实时荧光定量PCR仪的输出数据进行处理和分析。
实时荧光定量RT—PCR检测结直肠癌外周血hTERT mRNA的表达及临床意义
２ 结果
１２ １ 主 要 试 剂 仪 器 总 Ｒ Ａ提 取 试 剂 盒 采 用 ．． Ｎ Ｑ Ａ ｍ Ｎ ｌ ｄ Ｍ ｎ （ ＩＧ Ｎ，Ｖ ｌ ｃ ，Ｃ ； Ｉａ ｐ Ｒ Ａ Ｂｏ ｉｉ Ｑ Ａ Ｅ ｏ ａ ｎｉ Ａ） ｅ ａ
平 均 （３ ２土１ ． ） ， 中结 肠 ４ ５． ４７岁 其 １例 ， 肠 ４ 直 ２例 ；
ＡＣ ＝样 品 ｃ 均值 一内参 照 ｃ 均 值 ， ＡＣ ＝ＡＣ ｔ ｔ ｔ Ａ ｔ ｔ
一
（ 随机 阴 性 对 照 样 品 ｃ 均 值 一该 样 品 内参 照 Ｃ ｔ ｔ
高分 化 ３ ７例 ， 中分 化 ２ ４例 ， 分 化 ２ 低 ２例 ；Ｎ 分 ＴＭ 期： Ｉ期 ２ ， ４例 Ⅱ期 ２ 例 ， １ Ⅲ期 ２ ， ０例 Ⅳ期 １ 。 ８例
一
１ ７２ 一 ２
Ｃｈｎ Ｊ Ｌ ｂ Ｄｉ ｎ， ｇ ｓ ， ０ ０， ｌ１ Ｎｏ ８ ｉ ａ ａ Ａｕ ｕ ｔ ２ １ Ｖｏ ４， ． ｇ
文章编号 ：０ ７ ２７ ２ １）８ ２２ ２ １０ —４８ （００ ０ —１７ —０
实 时荧 光 定 量 Ｒ —Ｃ ＴＰ Ｒ检 测 结 直 肠 癌 外 周 血 ｈ Ｅ ＴｍＲ Ａ 的表 达 及 临床 意 义 ＴＲ Ｎ
Ａ ６／ ２ ０比值 和 Ｒ Ａ浓度 。 ２０Ａ ８ Ｎ
１２ ３ 实 时荧 光 定量 ．．
Ｒ ．Ｃ ＴＰ Ｒ根据 Ｇ ｎ ａｋ中 的 ｅＢ ｎ
注： 与对照组 比较 ， ＊Ｐ＜０ ０ ．５
定量PCR技术对临床医学的意义
定量PCR技术对临床医学的意义定量PCR技术有操作方便、好学易懂、检测精确、出结果快而可靠等优势；尤其适合临床应用和推广。
核酸是生物大分子，是一切生物的遗传物质，担负着生命信息的储存和传递。
核酸分为两种，DNＡ和RNA。
DNA分子由两条螺旋的多核苷酸链组成，两条链的碱基通过腺嘌呤（A）―胸腺嘧呤（T），鸟嘌呤（G）―胞嘧呤（C）之间的氢键连接在一起。
这两条链是互补的。
DNA以半保留方式进行复制。
病原体基因扩增常用于检测及鉴定微生物，评价治疗反应和检测耐药性突变等。
对感染性疾病的评价PCR已证明在许多情况下较传统方法更为优越，尤其是在鉴定不易培养，生长缓慢或不能培养的病原体时候，PCR可以快速（1~2小时内）提供诊断结果，并能同时分析多种样品；同时PCR不受药物治疗的干扰，可在治疗开始后确定感染原，为用药提供可靠的参考。
PCR几乎可以用任何组织或体液，包括新鲜与存档的手术标本来诊断疾病。
DNA是相对稳定的分子，可从木乃伊或冷冻的组织中获取标本。
指数扩增使得PCR具有极高的灵敏性，而独特的引物使用使其具有高度的特异性，且引物的使用保障了PCR技术不象其他传统的检测方法为提高特异性而牺牲灵敏性。
目前PCR应用于临床主要集中在从病原体和患者基因组中扩增与检测具有诊断参考价值的DNA片段。
定量PCR技术对临床应用的实际意义：一．早期诊断免疫学主要是抗原抗体反应，应用于临床通常是在体内产生抗体以后，而许多病原体的抗体产生存在较长的“窗口期”，不利于对疾病的早期诊断；但PCR方法直接检测病原体的DNA/RNA，能大大缩短“窗口期”。
以HCV为例，免疫学检测的“窗口期”平均长达70天，而荧光PCR可将“窗口期”缩短59天，显然有利于疾病的早期诊断。
对于乙肝、丙肝和艾滋病患者，目前临床上最常用的检测手段就是血清免疫学检测，也就是检测患者对病毒侵染机体产生的免疫反应，因此血清学检测指标可间接反映病毒的感染情况；而DAN/RNA则直接反映病毒本身在机体内的存在情况。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析实时荧光定量PCR（real-time PCR）是一种用于检测病毒感染的高灵敏度、高特异性的技术。
人巨细胞病毒（HCMV）是一种常见的病毒，感染者多数无症状，但对于免疫功能低下的患者，特别是器官移植患者和艾滋病患者，HCMV感染可能导致严重的并发症。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染具有重要的临床意义。
实时荧光定量PCR可以及时准确地检测人巨细胞病毒感染。
实时PCR技术具有高度敏感性和特异性，能够快速准确地检测HCMV的DNA，对于早期发现感染和进行干预治疗具有重要意义。
通过实时PCR检测，可以及早发现感染，及时采取有效措施，避免病毒的进一步扩散和感染的恶化。
实时荧光定量PCR可以指导临床治疗。
对于患者感染了HCMV的情况，实时PCR检测可以帮助医生及时调整治疗方案。
在器官移植术后感染HCMV的患者，通过实时PCR检测可以监测病毒载量的变化，指导抗病毒药物的使用和剂量的调整，从而提高治疗的效果，降低药物的副作用。
实时荧光定量PCR可以评估预后和预测疗效。
HCMV感染往往与预后密切相关，感染程度越重，预后越差。
通过实时PCR检测可以定量监测病毒的载量，评估感染的程度，为临床预后评估提供依据。
在治疗过程中，实时PCR检测还可以监测病毒载量的变化，评估治疗的效果，及时发现治疗失败或复发，指导调整治疗方案。
实时荧光定量PCR可以帮助研究HCMV感染的流行病学和病毒学特征。
通过大规模实时PCR检测，可以了解HCMV感染的流行病学特征，如感染的年龄分布、季节分布、地域分布等，有助于制定相关的预防和控制策略。
实时PCR检测还可以对HCMV的病毒学特征进行深入研究，如病毒基因型、毒株变异等，为病毒特异性治疗的研究提供基础数据。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染具有重要的临床意义。
通过该技术的应用，可以及时准确地检测HCMV感染，指导临床治疗，评估预后和预测疗效，以及开展相关的流行病学和病毒学研究。
检测病原的多重荧光pcr技术
检测病原的多重荧光pcr技术
近年来，随着生物技术的不断发展，多重荧光PCR技术在检测病原体方面发挥着越来越重要的作用。
多重荧光PCR技术是一种高效、快速、灵敏的分子生物学方法，能够同时检测多种病原体，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
这项技术的发展，为疾病的快速诊断和病原体的快速鉴定提供了重要的手段。
多重荧光PCR技术的原理是利用多种荧光标记的引物和探针，能够同时检测多种病原体的核酸序列。
通过这种技术，可以在同一反应体系中同时检测多种病原体，大大提高了检测效率和准确性。
与传统的PCR技术相比，多重荧光PCR技术具有更高的灵敏度和特异性，能够在较短的时间内完成对多种病原体的检测。
多重荧光PCR技术在临床诊断中具有广泛的应用前景。
例如，在疾病的早期诊断和治疗中，能够快速、准确地确定病原体的种类和数量，有助于制定更加有效的治疗方案。
此外，多重荧光PCR技术还可以用于监测病原体的变化和流行病学调查，为疾病的预防和控制提供重要的数据支持。
除了在临床诊断中的应用，多重荧光PCR技术还在食品安全、
环境监测和生物恐怖袭击等领域具有重要价值。
通过对多种病原体
的快速检测，可以有效预防疾病的传播和扩散，保障公共健康安全。
总的来说，多重荧光PCR技术作为一种高效、快速、灵敏的检
测方法，为病原体的快速鉴定和疾病的早期诊断提供了重要的技术
支持。
随着技术的不断进步和完善，相信多重荧光PCR技术将在各
个领域发挥越来越重要的作用，为人类健康和社会稳定做出更大的
贡献。
实时荧光定量PCR技术在病毒载量监测中的应用
实时荧光定量PCR技术在病毒载量监测中的应用实时荧光定量PCR技术（Real-time PCR，RT-PCR）是一种快速、灵敏、特异的分子生物学检测技术，已经在病毒载量监测中得到广泛应用。
本文将介绍RT-PCR技术的原理和特点，以及其在病毒载量监测中的应用。
一、RT-PCR技术原理及特点RT-PCR技术是一种基于PCR技术的升级版，可以实时监测PCR 反应过程中产生的DNA量。
其原理主要包括三个步骤：逆转录、扩增和检测。
首先，逆转录过程将RNA模板转录成互补的DNA（cDNA）。
逆转录酶会在反应体系中将RNA作为模板合成相应的cDNA，从而方便后续的扩增反应。
然后，在扩增步骤中，特定引物与模板DNA结合，并以DNA聚合酶为媒介，在不断提高的温度下，进行多轮循环扩增，产生指数级增加的DNA拷贝数。
最后，通过使用特异性荧光探针或SYBR Green等荧光染料进行检测，可实时监测PCR反应体系中的DNA数量。
荧光信号与PCR反应的进程成正比，从而实现定量测量。
RT-PCR技术具有高度的灵敏度和特异性，可以在短时间内全面检测病毒载量。
此外，RT-PCR技术还具有高通量、高自动化和高精确性的特点，能够满足大规模病毒监测的需求。
二、RT-PCR技术在病毒载量监测中的应用1. 临床诊断RT-PCR技术可用于临床中的病毒性疾病的早期诊断。
例如，在新型冠状病毒（COVID-19）疫情期间，RT-PCR技术被广泛用于检测感染者的样本，快速准确地筛查出阳性患者，为及时隔离和治疗提供了重要依据。
2. 疫苗研发在疫苗的研发过程中，RT-PCR技术也扮演了重要角色。
通过检测动物试验阶段的病毒载量，研究人员可以评估候选疫苗的效果，为下一步研发提供依据。
此外，RT-PCR技术还可以对疫苗生产过程中的原材料和成品进行监测，确保疫苗质量。
3. 病毒追踪在流行病学调查和疫情溯源中，RT-PCR技术可以追踪病毒的传播路径和变异情况。
通过对不同地区、不同时期样本的病毒载量进行监测，可以及时发现病毒的变异和不同毒株的传播情况，为疫情防控提供指导。
应用实时荧光PCR检测不同时期艾滋病患者肠道菌群量的变化及意义
应用实时荧光PCR检测不同时期艾滋病患者肠道菌群量的变化及意义王丽娜;吴翠松;陈薇薇【摘要】目的应用实时荧光PCR技术分析处于感染各期的艾滋病患者主要肠道菌群的变化,研究艾滋病对肠道微生态的损害及其发病机制.方法收集急性感染期、无症状期、艾滋病期患者大便标本各10份,对照组为观察组的配偶或工友共30例.提取细菌基因组DNA,应用实时荧光定量PCR反应测定双歧杆菌属、乳酸杆菌属、大肠杆菌、粪肠球菌及屎肠球菌5种细菌的数量.结果较常对照组艾滋病患者组双歧杆菌属、乳酸杆菌属的数量明显减少;而大肠杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌的数量显著增多,形成的差异具有统计学意义(P<0.05).结论艾滋病患者肠道发生微生态失衡,出现微生态紊乱,由此引发内源性感染而危及生命.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2018(016)001【总页数】2页(P33-34)【关键词】获得性免疫缺陷综合征;AIDS;荧光定量PCR;肠道菌群【作者】王丽娜;吴翠松;陈薇薇【作者单位】江苏大学附属镇江三院艾滋病科,江苏镇江212005;江苏大学附属镇江三院艾滋病科,江苏镇江212005;江苏大学附属镇江三院艾滋病科,江苏镇江212005【正文语种】中文【中图分类】R512.91艾滋病（AIDS）是一种获得性免疫缺陷综合征，因较高传染性和不可治愈性引起极高的关注。
艾滋病患者会出现的各种严重并发症及肿瘤，预后极差，使其成为严重威胁我国人民的公共卫生问题。
目前已经影响到了国民经济发展和全社会稳定[1]。
本实验采用实时荧光PCR（real-time fluorescener）方法将艾滋病患者与正常对照者粪便中的五种细菌进行定量检测，与正常对照组进行比较，分析肠道菌群变化的差异，为临床诊疗进行治疗提供一定的理论依据。
1 资料与方法1.1 研究对象1.1.1 观察组：2010年1月至2016 年1月镇江市第三人民医院诊治的急性感染期、无症状期、艾滋病期患者大便标本各10份，共30例，男性22例，女性8例，年龄19～56岁，平均年龄（36.05±8.93）岁，粪便采样前4周内未使用抗生素或微生态制剂；其C淋巴细胞数在（0～676）×106/L，并且无慢性腹泻症状。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析引言人巨细胞病毒（HCMV）是一种广泛存在于人类群体中的病毒，几乎所有的成年人都曾经感染过HCMV。
尽管大多数感染者没有症状，但在免疫功能受损的患者中，HCMV感染会引起严重的并发症，包括肺炎、脑炎、视网膜炎等。
对于免疫功能受损的患者来说，及时准确地检测HCMV感染非常重要。
实时荧光定量PCR技术已经成为检测HCMV感染的主要方法之一，本文将对其临床意义进行分析。
一、实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术是一种高灵敏度和高特异性的核酸检测方法，通过扩增目标DNA序列并实时监测PCR反应过程中的荧光信号来进行定量分析。
相比传统的PCR方法，实时荧光定量PCR技术具有检测快速、准确性高、可靠性强等优点，已经在临床诊断中得到广泛应用。
二、实时荧光定量PCR检测HCMV感染的临床意义1. 提高早期诊断率HCMV感染在免疫功能受损的患者中容易引起严重的并发症，因此早期诊断对于及时采取治疗措施非常重要。
实时荧光定量PCR技术具有高灵敏度和特异性，可以检测到病毒感染的早期病毒载量，有助于提高早期诊断率，为及时治疗提供重要的依据。
2. 监测治疗效果对于HCMV感染的治疗过程中，实时荧光定量PCR技术可以实时监测病毒载量的变化，评估治疗效果。
通过定期检测HCMV病毒载量的变化，可以及时调整治疗方案，提高治疗效果，减少治疗过程中的并发症和副作用。
3. 提高预后评估的准确性HCMV感染在免疫功能受损的患者中往往会导致严重的并发症，严重影响患者的预后。
实时荧光定量PCR技术可以对HCMV病毒载量进行定量分析，为预后评估提供更为准确的依据。
通过监测病毒载量的变化，可以及时发现预后不良的患者，采取更加积极有效的治疗措施。
4. 指导预防措施的实施对于接受器官移植、造血干细胞移植等免疫抑制治疗的患者，预防HCMV感染尤为重要。
实时荧光定量PCR技术可以对HCMV感染进行早期监测，及时发现感染者，以指导预防措施的实施。
实时荧光定量pcr技术原理与应用
实时荧光定量pcr技术原理与应用
实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR）是一种可以快速、准确测量靶基因拷贝
数目的分子生物学技术。
它结合了传统的PCR技术与荧光探
针技术，利用荧光信号的强弱来反映目标基因的表达水平。
实时荧光定量PCR的原理是，首先通过PCR技术对目标基因
进行放大，然后在PCR反应过程中添加一种含有荧光探针的
试剂。
荧光探针通常由两个部分组成，一个是与目标基因特异性结合的引物，另一个是带有荧光染料与荧光信号猝灭基团的探针序列。
当荧光探针与目标基因的引物结合时，荧光信号被猝灭；当探针与目标基因的模板序列结合并被PCR酶依次截
断时，荧光信号被释放出来。
荧光信号的强弱正比于目标基因在PCR过程中的拷贝数目。
实时荧光定量PCR广泛用于基因表达分析、疾病诊断、基因
突变检测等领域。
通过该技术可以定量测量目标基因的表达水平，比较不同条件下基因表达的差异，研究基因调控机制。
此外，实时荧光定量PCR还可以应用于微生物检测，如检测细菌、病毒、真菌等的数量和变异情况。
这项技术具有快速、高灵敏度、高特异性、高重复性等优点，因此在生命科学研究和临床应用中得到广泛应用。
总之，实时荧光定量PCR技术通过结合PCR和荧光探针技术，可以实现对目标基因拷贝数目的快速、准确测量。
它在基因表达研究、疾病诊断和微生物检测等领域发挥着重要作用。
实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展
实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展实时荧光定量PCR技术（Real-time quantitative PCR，qPCR）是一种快速、精确、灵敏、特异的基因检测技本，广泛应用于医学、生物学、农业和环境学等领域。
本文将介绍实时荧光定量PCR技术及其原理、应用研究进展。
一、实时荧光定量PCR技术原理实时荧光定量PCR技术是通过荧光探针标记的PCR产物进行实时监测，利用荧光信号的强度反映靶基因的数量。
其基本原理是将荧光信号的增加与反应过程中的PCR产物数量成正比。
实时PCR技术相比于传统PCR技术具有以下优势：1. 高灵敏度：实时PCR技术可以检测到非常低浓度的DNA或RNA，通常可以达到几十个分子的水平。
2. 高特异性：通过设计特异性的引物和探针，可以避免非特异性扩增产生。
3. 快速性：实时PCR技术可以在几小时内完成PCR反应，相比于传统PCR技术更快速。
4. 定量性：实时PCR技术可以准确地测量靶基因的数量，比较不同样本中的基因表达量或拷贝数。
二、实时荧光定量PCR技术应用研究进展1. 医学领域在医学领域，实时PCR技术被广泛应用于病原微生物的检测与鉴定，包括细菌、病毒、真菌等。
利用实时PCR技术可以快速准确地检测到呼吸道病毒、肠道病毒、HIV等病原微生物，为临床诊断和治疗提供了重要依据。
实时PCR技术还可以用于检测肿瘤标志物、基因突变和表达水平的变化，为肿瘤的早期诊断和预后评估提供了重要手段。
2. 生物学领域在生物学领域，实时PCR技术被广泛应用于基因表达分析、基因型分析、基因突变检测等研究。
利用实时PCR技术可以快速准确地测量基因的表达水平，在研究基因调控、信号转导、分子途径等方面发挥了重要作用。
实时PCR技术还可以进行单细胞PCR分析，研究细胞在不同状态下基因表达的动态变化。
实时荧光定量PCR技术具有快速、精确、灵敏、特异的特点，广泛应用于医学、生物学、农业和环境学等领域。
随着PCR技术的不断发展和改进，相信实时PCR技术在基因检测领域将发挥越来越重要的作用，为人类健康、生物科学研究和环境保护等方面做出更大的贡献。
一种检测肠道病毒的五重荧光定量试剂盒[发明专利]
![一种检测肠道病毒的五重荧光定量试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/347f0c9e31b765ce04081450.png)
专利名称：一种检测肠道病毒的五重荧光定量试剂盒专利类型：发明专利
发明人：陈瑜,谢国良,崔大伟,楼滨,郑书发
申请号：CN201710875664.6
申请日：20170925
公开号：CN107513584A
公开日：
20171226
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本提供一种检测肠道病毒的五重荧光定量试剂盒，肠道病毒的四个亚型为EV71、CVAl6、CVA6、CVA10。
本发明运用一步法实时荧光定量RT‐PCR技术，采用EV及EV71、CVAl6、CVA6、CVA10病毒高度特异的引物和荧光标记探针，通过一个PCR反应即从粪便标本中同时检测出肠道病毒的存在，并同时进行病毒分型鉴定，比单重荧光定量PCR方法更便捷迅速、节约成本。
本发明对检测的病毒进行实时准确定量，根据病毒感染的滴度，为临床早期诊断提供工具，为临床治疗方案的制定提供参考依据。
可应用于肠道病毒引起暴发疫情的实验室应急诊断、肠道病毒快速筛查分型、临床诊断及手足口病的流行病学的研究。
申请人：浙江大学
地址：310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
国籍：CN
代理机构：杭州求是专利事务所有限公司
代理人：赵杭丽
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Bio-Rad荧光定量PCR-iQ5说明书
1. iQ™5多重实时荧光定量PCR仪简介在现代分子生物学的发展过程中，核酸放大技术的出现及与之相关的检测技术的成熟起到了至关重要的作用，而实时荧光定量PCR技术可以说是两者完美的结晶。
它通过加入能与DNA结合的荧光染料或在引物/探针上标记荧光基团等方法，在PCR过程中，随着产物的量不断增加，荧光信号也随之发生相关性的变化，再通过数学处理，算出原始靶DNA的含量。
实时荧光定量PCR技术可以在较大的动力学范围内实现精确定量，其灵敏度也达到相当高的程度。
随着这项技术的发展，其专用的实时荧光定量PCR仪也应运而生。
我们伯乐公司这次推出的iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪是在iCycler荧光定量PCR仪的基础上强化而成，以求性能达到最优。
iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪所装配的光源（钨卤素灯）拥有更宽的光谱范围，给予用户在其选择上最大限度的灵活性。
经过优化的激发/发射透镜组可以显著提高多重PCR的灵敏度，减少多重荧光之间的干扰。
它的CCD检测器可以同时监测96个反应孔的荧光数据。
在热循环过程中，当前完整的实验数R据会被软件实时地以图解的形式表现出来。
实时的数据显示可以大大提高反应孔与孔之间数据比较的可靠性，iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪则可以方便地实现数据实时显示，有利于及时反馈试验状况。
以上介绍的各项特性保证了iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪在使用过程中具有更强的可靠性和灵活性。
iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪所配备的运行、分析软件设计得十分人性化，且功能强大。
其功能模块的界面模式可使用户可以快速地完成各种操作。
当用户把光标放在软件的功能键上时，其下方还会出现相应说明文字。
此外，按键盘的“F1”键还可以启动在线帮助指南。
当用户设定完结果分析参数后，点一键即可得到最终分析结果。
2. iQ™5使用快速指南2.1 如何用iQ™5运行一次实验2.1.1 综述1. 创建、选择或修改一个反应程序文件（Protocol file）2. 创建、选择或修改一个反应板设置文件（Plate Setup file）。
荧光定量pcr仪
荧光定量PCR仪简介荧光定量PCR仪是一种常用的实验仪器，用于检测和量化DNA、RNA或蛋白质等生物分子的浓度，以及进行细胞分析和基因表达分析。
该仪器利用荧光探针与靶标分子结合后的荧光信号来测量样品中目标分子的含量，并通过实时监测PCR 反应的进行实时定量分析。
工作原理荧光定量PCR仪与传统PCR仪器相似，都是通过PCR技术进行DNA复制。
而与传统PCR仪仅能显示反应终点所不同的是，荧光定量PCR仪具备实时监测PCR反应的能力。
在荧光定量PCR中，PCR体系中加入了一种荧光探针。
荧光探针通常包含一个与靶标DNA序列互补的引物和一个与靶标DNA序列相邻的荧光染料。
当PCR反应开始，引物与靶标DNA序列结合，然后荧光染料与荧光探针结合。
当双链DNA 被DNA聚合酶酶解时，荧光探针分离，导致荧光信号减弱。
PCR仪会以特定的时间间隔检测PCR体系中的荧光强度，从而实时监测PCR反应的进行情况。
优势和应用优势荧光定量PCR仪相比传统PCR仪具有以下优势： 1. 实时监测：荧光定量PCR仪能够实时监测PCR反应的进行情况，得到更精确和准确的分析结果。
2. 高通量分析：荧光定量PCR仪可以同时分析多个样品，提高实验效率。
3. 定量分析：荧光定量PCR仪能够准确地定量分析目标分子的浓度，使实验结果更可靠。
应用荧光定量PCR仪广泛应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域：1. 基因表达分析：荧光定量PCR仪可以快速、准确地定量分析基因的表达水平，帮助研究人员了解基因在不同组织或条件下的表达差异。
2. 突变检测：荧光定量PCR仪可以检测基因中的突变或多态性位点，用于遗传病的早期诊断和风险评估。
3. 病原体检测：荧光定量PCR仪可以检测病原体的DNA或RNA，用于疾病的早期诊断和治疗监测。
4. 转基因分析：荧光定量PCR仪可用于转基因作物或转基因动物的鉴定和定量分析。
5. 药物研发：荧光定量PCR仪可用于评估药物对基因表达的影响，帮助药物研发过程中的药效和安全性评估。
浅谈荧光定量快速检测系统的意义及作用
浅谈荧光定量快速检测系统的意义及作用作者：齐刚，陈静，李静，张济明，刘世才，李慧来源：《现代畜牧科技》 2017年第9期1 快速检测技术的意义和作用近些年，频繁曝光的食品安全问题事件，使得食品安全日益成为全社会关注的焦点，不断引起社会对畜产品质量安全的担忧。
截止目前，食品中有害化合物主要来源于兽药、农药、激素、霉菌毒素和非法添加物等的残留和滥用，这些有害化合物通过食物链的生物富集作用，最终进入人体，进而引起人类发生急性食物中毒或慢性中毒，以及细菌耐药性增强等危害。
然而，现有的食品安全检测确证检测方法，仅限于仪器分析方法。
价格昂贵、前处理复杂、技术人员要求高、检测耗费时长、时效性差、距离全方位满足食品安全检测的需求尚有较大的差距。
随着国家对畜产品质量安全的把控力度的增强、筛选样本量的加大，对快检产品的市场需求量也越来越大。
食品安全检测方法也开始朝着小型化、数据化、便携式、智能化的方向发展，使其能够更加符合基层及现场检测的需求。
北京维德维康生物技术有限公司与北镇市畜产品安全监察所共同研发的荧光定量检测系统，能够有效地解决胶体金等快检方法信号局限性的问题，进一步实现食品中有害物质浓度的准确定量检测，凭借准确度高、时效性强、操作便捷、可定量检测、低成本等优势，能够最大限度地减少甚至避免各类食品安全事件导致的伤害．实现了提高食品安全监管工作效率的目的。
食品质量安全可溯源、可追源，提升了食品安全监管系统的完善水平，对确保大流通环境下的食品安全具有积极作用。
2互联网的核心作用荧光定量检测系统，配备实时监测监管平台和个性化数据分析软件，能和荧光定量检测仪器上传的数据进行同步交互，利用互联网技术保证检测数据实时上传，对检测数据进行第一时间处理分析。
通过对检测数据进行网络传输，可实现食品安全关键信息的监控，更有效、客观、真实地记录和保存食品质量安全信息，实现食品质量安全风险可管控，顺向可追踪、逆向可溯源。
发生畜产品质量安全问题时，原因可查清、责任可追究。
RNA定量技术在基因研究中的应用
RNA定量技术在基因研究中的应用随着基因研究的深入，人们对RNA的定量技术需求也越来越高，因此RNA定量技术逐渐成为研究基因调控的重要工具。
RNA 定量技术是指对RNA分子进行测量和定量分析的一种方法。
目前RNA定量技术的方法有多种，下面将从不同角度探讨RNA定量技术在基因研究中的应用。
一、实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术（qPCR）是目前RNA定量技术的一种主要方法，该技术可以对RNA分子进行定量测定，同时能够检测出RNA分子的多态性。
在基因研究中，qPCR技术可以用来检测具有多种生物学功能的RNA，如miRNA、siRNA、piRNA等。
miRNA是一种重要的RNA类别，它在人类中广泛参与基因表达、器官发育和疾病的发生等过程。
因此，利用qPCR技术对miRNA进行定量测定，可以为研究miRNA在基因调控中的作用提供重要的实验依据。
另外，qPCR技术还可以被用来鉴定转录因子和细胞周期调控的基因，为基因调控网络的构建提供实验数据支持。
二、Nanopore定量技术Nanopore技术是一种新型的RNA定量技术，它基于一种利用单一分子技术，能够准确地检测和分析RNA分子的方法。
Nanopore技术可以快速、高效地检测RNA分子的序列、长度和转录启动位点等信息，其分辨率甚至可以达到核苷酸级别。
因此，Nanopore技术被广泛应用于RNA测序和RNA剪切异构体的分析中，可以大大提高RNA分子的检测速度和检测精度。
三、Fluorescence in situ hybridization技术Fluorescence in situ hybridization技术（FISH技术）是一种经典的RNA定量技术，它可以直接观察RNA分子在细胞中的位置和数量。
FISH技术可以用来检测RNA分子在组织和细胞水平的表达，同时还可以详细描述RNA分子在细胞中的分布情况。
FISH 技术在检测基因剪切异构体和基因的表达模式中具有很好的应用前景。
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田 中华 内科杂志 ，９９ ３ （ ： — ７ １９ ，８１ １ １． ）４
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医学信息 ２ １ 年 ｌ ０１ ２月第 ２ ４卷第 １ ２期 Ｍｅｉａ Ｉｆｒ ｔ ｎ Ｄ ｃ ２ １． ｏ． ４ Ｎ ． ２ ｄｃｌ ｎｏ ｉ ． ｅ． ０ １ Ｖ １２ ． ｏ １ ｍａ ｏ
血管壁 。 毛细血管基底膜增厚 、 变性 ， 内皮细胞的肥大和增生 。 内脂肪 血管 管壁 及糖蛋 白沉积 ， 管腔狭 窄， 从而导致微循 环障碍。缺 血、 缺氧 ， 使依据 ， 并对手足 口病 患儿的病情分析 、 治疗及预后观 察起 到指导作 用。 关 键 词 ：手 足 口病 ； 时 荧 光定 量 Ｐ 实 ＣＲ： 道 病 毒 肠
手足 口病（ ａｄｆ ｔａｄｍ ｕ ｉａｅ是由肠道病毒引起 的传 染病 ， Ｈ ｎ— ｏ ｎ— ｏｔｄｓ ｓ） ｏ— ｈ ｅ 多 发生于 ３ 以下儿童ｌ 可引起手 、 、 岁 】 】 ， 足 口腔等部位的疱疹 ， 少数患儿可引起心 肌炎 、 肺水肿 、 菌性脑膜脑炎等并发症 。个别重症 患Ｊ￣果病情发展快 ， 无 ＬＩ １ 会 导致死亡 。引发手足 口病的肠道病毒有 ２ 多种（ ， 萨奇病毒 Ａ组的 ｌ、 ０ 型）柯 ６ ４ ５ ９ １ ， 的 ２ ５型 ， 、 、 、０型 Ｂ组 、 以及肠道病 毒 ７ 型均为手 足 口病较常见的病原 ｌ 体， 其中以柯萨奇病毒 Ａ ６ （ ｏ １ ） １ 型 Ｃ ｘＡ ６ 和肠道病毒 ７ 型（ Ｖ １ 最为常见 １ Ｅ７） 。 手足 口病近年来呈爆发趋势 ， 严重影响婴幼儿的生活和学习 ， 且在一定程度上 给社会造成不稳定的因素 。如何对手足 口病的病原学进行快速检测 ， 对手足 口病 的早期诊断 、治疗和预后观察 显得尤为重要 。本文应 用实时荧 光定量 Ｐ Ｒ检测 了 ３２份手足 口病患儿粪便 、 子标本 。分别测定肠道病毒 （Ｖ） Ｃ ３ 咽拭 Ｅ 通用型（ 以下简称 Ｅ 、 Ｖ）柯萨奇病毒 Ａ组 １ （ Ａ ６ 和 Ｅ ７ 型核酸 ， ６Ｃ １） Ｖ １ 现报道如
２ ０ ３ ４４ ）１ ６—１ ６ ． ０ ４，６ （６：６ ４ ６ ５ 『１ 京 弥可 保 临床 观 察 协 作 组 ． 可 保 治 疗 糖 尿 病 周 围神 经 病 变 的 临床 观 察 ６北 弥
成 的作用 ， 有效地改善了微循环后 的微代谢 ， 为促进末 梢神经纤维 的修复增加 供血供氧 ， 从而有效 的改善皮肤感觉异常症状 。二者联合既能改善神经组织 的微循 环 ， 又促进 了神经纤 维的修复 ， 治疗组 两药联合治疗 临床症状 明显改 善 ，且 与对照组 比较 有显著差异 。在临床观察 中 ，药物不 良反应发 生率低 （． ， ５２ 患者也能耐 受。说 明两药联用效果更好安全可靠 ， ％） 口服方便 ， 长期使 用， 患者依从性好 ， 目前治疗 Ｄ Ｐ 是 Ｎ 有效手段 ， 值得推广。
摘 要 ：目的 应 用 实 时 荧 光 定 量 法 快速 检 测 肠 道 病 毒 ＲＮＡ， 手 足 口病 的 早 期 诊 断提 供 临 床 依 据 。方 法 采 用 实 时 荧 光 Ｐ 为 ＣＲ 法检 测 手 足 口病 患 儿 粪便 、 拭 子 中 咽 肠 道病 毒通用型、 萨奇病毒 Ａ组 １ （ Ａ ６ 和肠道病毒 ７ 型（ ｖ １ＲＮ 柯 ６Ｃ １） １ Ｅ ７ ） ＿Ａ。结果 ３ ２ ３ 份标本 中肠道病毒通 用型阳性 ３ ４ ． 出率为 ９ ７ Ｃ １ ０例 检 １ ％； Ａ ６阳性 １２ ５ ３ 例 ， 性 率 为 ３ ６ ；Ｖ７ 阳 ９７％ Ｅ １阳性 １ ５例 ， ３ 阳性 率 ４ ．６ 其 中有 ２例 同 时捡 出 ＣＡ１ ０６ ％， ６和 Ｅ １ ｖ７ 。结 论 实 时 荧光 定 量 Ｐ ＣＲ 能 对 肠道 病 毒 ＲＮＡ 进 行 快 速 检 测 ， 手 为
［ 韦秀英， １ 】 邹颈涛 糖尿病神 经病变的药物 治疗现状 Ⅱ． ］ 医师进修 杂志，０ ０ ２ ２０ ，３
（ ）５ ． ５ ：４
［］ 祖 植 ． 尿 病【 ／． 任 高 内科 ． 京 ： 民 卫 生 出版 社 ，０ １７ ５ ２ ２傅 糖 Ｍ】／叶 北 人 ２ ０ ：８—８ ５ ［】 曼 音 ． 尿 病 学［ 上 海 ： 海 科 学 枝 术 出版 社 ，０ ３ ４９ ４ ３ ３许 糖 Ｍ】 上 ２ ０ ：３ — ５． ［ Ｄｙｋ珂 Ｄｅｅｔ ｎ ｃ ａ ｔｆ ａ ｏ ｎ ｔｇｍｇｏ ｏｙ ｕｏｔｙａｓｓ ｄｉ ４ ｃ ］ ｔｃ ｏ ， ｈｍｃｅ ｚｔ ｎａ ｄｓ ｉ ｆ ｌｍｅｒｐｈ ｓ ｓ ｎ ｉ ｉ ｉ ａ ｐ ｅｅ
伤， 血小板涪 陛增加、 聚集 ， 微血管栓形成 ， 导致神经失 去营养 弥可保将维生素 Ｂ： 。 甲基转化反应 ， 促进神经组织 内的核酸 、 白质及脂 蛋 肪 的新 陈代谢 ， 从而使轴 素结构蛋 白的运输及轴索 的再 生 。但是从 对照组 看， 单用有一定效果 ， 但不是特别令人满 意。贝前 列素钠片 ， 主要成份为脂化 的前列腺素 Ｅ 具有 扩张血管 ， 增加神 经内膜中血流抗血小板凝集 ， 抗血栓形
编辑， 杨倩
Ｉ 多重实时荧光 定量 Ｐ Ｒ 仪快速检测肠道病毒 Ｒ Ｑ田 Ｃ ＮＡ及其临床意义
樊旭成 ， 张凯伦 ， 杨璐 鹭
（． 疆 乌 鲁 木 齐 市 疾病 预 防控 制 中心 ， 疆 乌 鲁 木 齐 １ 新 新 ８ ００ ；． 疆卫 生 厅 ， 疆 乌 鲁木 齐 ３ ０ ２２新 新 ８０ ０ ） ３ ００
ａｏ ｄ ｐ ｐ ｖ ｒ ｅ ａ ｄ ｐ ｏｔ ｇ ｎ ｉ ｎ ｏ ｐ ｒｔｄ ｉ ｉｉ ｉ ｏｐ ｅ ｅ ｉ ａ ｒ ｔ ａ ａ ｅｉ ｎ ｒ ｓ ｌ ｄｎ Ｅｔ ｃ ｒ ｏａｅ ｎ ｌ ｄ ｍ ｃ ｓ ｈ ｒ ｎ ｐ － ｉ ｎ ａａ ｉ ｐ ｒ
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