植物组织培养的培养基配制实验设计

合集下载

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验一：培养基的配制学院：风景园林院学号：131001226 姓名：张晟菓一、实验目的1. 掌握植物组织培养实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、实验原理鉴于微生物种类及代谢类型的多样性，用于培养微生物的培养基的种类也很多。

培养基的配置的程序有器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，以及培养基的无菌检查等。

此次配制400mL MS培养基。

三、实验材料1.药品：激素：BA 1.0L（200mg/L）NAA 0.2L（200mg/L）母液：MS1（大量元素）20mL——浓缩20倍MS2（微量元素）2mL——浓缩200倍MS3（铁盐）2mL——浓缩200倍；MS4（维生素和氨基酸）2mL——浓缩200倍琼脂：2.2g蔗糖：12g（3%）无菌水2.玻璃器皿：移液管、试管、烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿3.仪器设备：电子天平4.其他物品：药匙、滤纸、称量纸、pH计、记号笔、棉花等四、实验步骤1.玻璃器皿清洗：将试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水和蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。

晾干后备用。

2.量取母液：MS1（20mL），MS2（2mL），MS3（2mL），MS4（2mL）；加激素：BA（1.0mL），NAA（0.2mL）；加蔗糖：12g。

3.加水定容至400mL。

4.搅匀后用pH计、烧碱溶液及硫酸溶液调pH值至5.8。

5.加琼脂2.2g，用电磁炉加热溶解并搅拌5-6分钟，冒泡即可拿出。

6.趁热分装，包扎，贴标签。

五、实验结果培养基配置完成。

培养基配制

（2）无机微量(100倍液，配制500ml）无机微量(100倍液，配制500ml）倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。蒸馏水中。每升培养基吸此液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等；接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒，倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞；无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上，吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签（时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养，温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁，掌握利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水三、实验材料：植物茎段（月季）

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告学院：生命科学技术学院班级：11生物技术(制品)学号：**********姓名：**植物组织培养实验报告实验一植物组织培养母液的配制一、实验目的1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。

2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。

二、实验原理培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。

大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。

无机盐类由大量元素和微量元素组成。

大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。

微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。

培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。

有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。

培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。

培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。

蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。

在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。

一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。

肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。

常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。

③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。

培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。

其中最为常见的为酵母提取物。

琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。

植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。

实验二.培养基的配制及灭菌

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

第五章植物组织培养技术实验方案

第五章植物组织培养技术实验方案一、实验目的：1.了解植物组织培养的基本原理和方法。

2.掌握植物组织培养的实验操作技巧。

3.培养植物组织并观察其生长和发育情况。

二、实验材料和设备：材料：麦芽糖、琼脂、植物激素（如IAA、ABA、GA3等）、幼绿豆胚轴组织。

设备：平板培养器、显微镜、高压锅、移液器、无菌操作器具等。

三、实验步骤：1.制备琼脂培养基a）称取适量琼脂加入适量蒸馏水中，搅拌均匀。

b）高压锅加热至沸腾，放入琼脂溶液，保持沸腾10-15分钟，使琼脂充分溶解。

c）将高压锅冷却后取出，倒入洁净的培养器中，晾凉并凝固。

2.准备植物组织a）将绿豆种子浸泡于水中，待种子发芽至一定程度。

b）取出绿豆胚轴组织，用刀切割成适当大小的组织片段。

3.制备植物组织培养基a）取适量砂糖和植物激素（如IAA、ABA、GA3等），溶解于蒸馏水中。

b）加入适量制备好的琼脂培养基，搅拌均匀。

4.进行组织培养a）将准备好的植物组织片段放入培养器中，倒入制备好的植物组织培养基，使组织片段完全浸没其中。

b）盖上培养器盖子，用透明胶带密封，防止细菌浸入。

c）将培养器置于适当的温度和光照条件下，进行培养。

5.观察和记录a）每天观察组织的生长和发育情况，记录变化。

b）使用显微镜观察细胞结构和细胞分裂情况。

c）观察是否有细菌感染或其他异常情况。

d）记录实验数据，如生长速率、生长周期等。

四、实验要点：1.所有实验操作都要在无菌环境下进行，避免细菌和其他微生物的污染。

2.组织培养基的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。

3.培养条件也根据不同植物种类的要求进行调整，如温度、光照等。

4.实验中要注意观察并记录实验数据，对结果进行分析和总结。

五、预期结果：通过植物组织培养技术，可以观察到植物组织的生长和发育情况，研究不同因素对植物生长的影响，培养出健康的植物组织，为其他相关研究提供基础数据和实验材料。

六、安全注意事项：1.操作时要小心使用实验器具，避免切伤或烫伤等事故发生。

植物组织培养培养基的配制与灭菌

★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。

植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。

2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。

二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。

2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。

各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。

2. MS0培养基。

3. 1/2MS培养基。

4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。

7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。

8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。

（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。

2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。

3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。

4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。

5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。

（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。

2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。

3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。

四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。

2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。

植物组织培养实验(2)

（二）实验原理
在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤组织。
（三）实验材料和用具
实验材料：黄瓜无菌苗实验药品： MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、
1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯用酒精、70％酒精、无菌水。灭菌培养基：MS1 （MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA）
实验用具：
天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。
无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号实验步骤
1. 配制以下培养基各100ml ： MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAA MS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAA MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA ① 取200ml烧杯3只，标记，各加入4g MS培养基和
4. 接种 ① 进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒
精灯。 ② 解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。 ③ 再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润
湿。 ④ 在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊
子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。 ⑤ 剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后
剪成50mm2左右的小片），每平皿接种3～5段（片）。每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。 ⑥ 光照培养箱25℃暗培养。
作业
1. 1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。

菊花的组织培养实验设计

菊花的组织培养实验设计引言概述菊花是一种常见的欣赏植物，其花朵色采丰富，形态优美，深受人们爱慕。

为了研究菊花的生长发育规律以及促进其繁殖，进行菊花的组织培养实验是一种有效的方法。

本文将详细介绍菊花组织培养实验的设计。

一、实验材料准备1.1 选择适宜的菊花组织在进行菊花组织培养实验时，需要选择健康、无病虫害的菊花植株作为实验材料。

可以选择嫩芽、叶片或者花蕾等组织进行培养。

1.2 准备无菌工作环境在进行组织培养实验时，需要准备无菌工作环境，包括无菌培养室、无菌操作台、无菌培养器具等，以确保实验的无菌条件。

1.3 配制培养基根据菊花组织培养的需要，可以选择适宜的培养基，如MS培养基、B5培养基等，并添加适当的植物生长调节剂，如激素等。

二、组织切割和接种2.1 组织切割将选取的菊花组织进行切割，保持组织的完整性，避免受损，以提高组织培养的成功率。

2.2 组织接种将切割好的菊花组织放入含有培养基的培养器具中，进行组织接种，确保组织与培养基充分接触，促进组织生长。

2.3 培养条件控制在组织接种后，需要控制培养条件，如光照、温度、湿度等，以促进组织生长和分化。

三、培养过程管理3.1 培养器具清洁在培养过程中，需要定期清洁培养器具，避免细菌和真菌的污染，影响组织的生长。

3.2 培养基更换随着培养时间的推移，培养基中的营养物质会逐渐耗尽，需要定期更换新的培养基，以维持组织生长所需的营养。

3.3 组织生长监测在培养过程中，需要定期观察和记录组织的生长情况，包括组织的形态、颜色、生长速度等，以及时调整培养条件。

四、组织分化和再生4.1 组织分化诱导通过调节培养基中植物生长调节剂的浓度和种类，可以诱导菊花组织进行分化，形成新的器官或者植株。

4.2 再生植株培养对分化成功的组织进行再生培养，培养出新的植株，为菊花的繁殖提供新的途径。

4.3 植株移栽将再生的植株移栽到适宜的生长环境中，进行后续的生长观察和繁殖。

五、实验结果分析5.1 记录实验数据在实验过程中，需要详细记录实验数据，包括组织的生长情况、分化情况、再生植株数量等，以便后续的结果分析。

植物组织培养基配制

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

植物组织培养基的配制—母液的配制

• 大量2：2水氯化钙）
•
2、配制铁盐母液250mL，母液倍数100倍
• 三、实训材料：1、实训设备
•
2、实训药品
• 四、实验步骤
• 五、注意事项
• 3、MS培养基配制有机物母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为 2000ml，则有机物中，烟酸、肌醇的称取量分别为多少克？
计算：
• 1、MS培养基配制大量元素母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为 500ml，则大量中，KNO3、NH4NO3、MgSO4•7H2O的称取量分别为多少克？
（2）称量电子天平注意事项：干净、干燥、水平、校正、量程、归零、读数电子天平使用方法：
开机-检查-放烧杯-归零-放药品-读数-关机
• （3）溶解 • 将蒸馏水或去离子水倒入烧杯中，用玻璃棒轻轻搅动使其溶解，使其沉淀后
将上清液倒入容量瓶，反复操作，直至全部药品完全溶解。
• 注意事项： • 用温水、酸、碱或醇等助溶 • 加水宜少不宜多 • 多次反复溶解
配置体积根据生产产量来定。计算时带单位如：七水硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)称取量=27.8mg/L*100*1L
=2780mg =2.78g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的称取量=37.3mg/L*100*1L
=3730mg 3.73g
计算：母液各成分称取量=培养基配方用量（mg/L）*浓缩倍数*所配制母液体积(L)
• （4）定容： • 将已完全溶解的药品倒入容量瓶定容至所配制母液的体积（1L）。 • 母液成分比较多时要注意顺序， • 容量瓶定容后要充分摇匀再倒入广口瓶内保存 • 注意容量瓶的使用：干净、平视凹液面
• （5）保存：
• 将定容好的母液充分摇匀后倒入干净棕色瓶或无色试剂瓶内，贴上标签放入试剂柜或冰箱内保存。

植物组织培养设计方案

植物组织培养设计方案植物组织培养是一种繁殖植物的方法，通过在无菌条件下培养植物的组织或细胞，可以获得大量的健康无病害的植株。

植物组织培养广泛应用于植物保护、育种、快速繁殖和基因转化等领域。

本文将重点介绍植物组织培养的设计方案。

1.实验材料准备：-植物种子或幼苗：选择优良品种的无病害种子或幼苗作为材料。

- 生长基质：常用的基质包括MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamely和Ribble培养基）等。

根据不同的植物种类和实验目的，选择适宜的培养基。

2.无菌操作：-实验室要保持高度的无菌操作环境，使用无菌操作台、无菌培养器等工具设备。

-使用无菌操作工具，如无菌钳、无菌刀片等进行操作。

-使用无菌材料：培养基、培养瓶、培养器等都要在高温高压下灭菌处理。

3.组织处理和培养：-种子处理：以浓度为0.1%的漂白水处理种子表面，去除外层的外壳，并在无菌条件下接种到培养基上。

-组织切割：从植株中选择新鲜、无病害的茎、叶、根等组织切取，注意避免外界微生物的污染。

-培养基配制：根据实验目的和植物种类，调整培养基的配方，添加适量的植物生长调节剂（如激素）。

-培养条件控制：控制培养瓶内温度、光照强度和光周期，以及湿度等因素，提供适宜的生长环境。

4.培养过程监测与处理：-观察细胞分裂和不定芽发生情况，根据需要进行不定芽分离和转移。

-监测培养器内的细菌和真菌污染，及时采取措施防止蔓延。

-过程中温度、光照等条件的调节，根据实验需要和细胞、组织的生长情况进行调整。

5.培养结束处理：-移除培养器中的植株，将其进行除菌处理，避免对环境产生影响。

-将培养基进行无菌处理，以免细菌或真菌残留造成二次污染。

-对根据实验结果分析，总结经验教训，为后续的实验提供参考。

总之，植物组织培养设计方案需要从材料选择、无菌操作、组织处理和培养、监测与处理以及培养结束处理等方面进行全面考虑。

只有在严格的无菌条件下进行操作，并根据实验需求和植物特性进行科学的调控和管理，才能获得高效的植物组织培养。

植物生物学试验有关试剂配制

组织培养实验有关试剂的配制：75%的酒精：75ml的95%的酒精加水定容至95ml。

0.2％的升汞溶液：称取HgCl2 20克，加蒸馏水至4000ml。

1N 盐酸：取8.25ml的浓盐酸，加蒸馏水定容至100ml。

1N NaOH：称8g NaOH，用蒸馏水定容至200ml。

0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH 溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

0.1mg/ml 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

遗传转化与GUS基因检测的试剂配制LB培养基的配制：将下列组分溶解在0.9L水中：1L10ml 的10mmol/l的AS（乙酰丁香酮）母液（100x）配制：称19.6mg的AS，先溶于少量甲醇中，然后慢慢加蒸馏水定容至10ml，过滤除菌，分装成200ul/管（每组1管），使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。

50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）：A液：取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。

B液：取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水，定溶100ml。

取A 液39ml与B 液61ml混合，定容至400ml，调PH至7.0。

50mmol/L铁氰化钾母液：称3.295g，用蒸馏水定容至200ml50mmol/l亚铁氰化钾母液：称4.224g ，用蒸馏水定容至200ml。

0.5mol/l EDTA母液（pH8.0）：药品分子量100ml 500mlEDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g双蒸H2O 80ml 400ml用NaOH调PH至8.0 6g 10gDdH2O定容至100ml 500mlGUS检测液的配制：100mgGluc，先溶于1ml的DMF。

取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0），加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA（PH 8.0），再加入已溶解的Gluc，再加20ml的甲醇，混匀。

培养基制备 — 植物组织培养实验方案

培养基制备 — 植物组织培养实验方案•从包装粉末制备•从基础盐溶液制备•香蕉粉的制备和使用•椰子水的制备和使用从包装粉末制备粉末极易吸湿，必须防止空气中的水分对其潮解。

单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。

不建议以浓缩形式制备培养基，否则一些盐复合物可能会沉淀。

添加到培养基中的补充剂可能会影响其保质期和储存条件。

制备培养基的基本步骤如下：1. 量出组织培养级纯水（产品编号：W3500）最终所需体积的90％左右，举例来说，如果最终体积为1000 mL，则量出900 mL。

选用两倍于最终体积大小的容器。

2. 在搅拌水的同时加入粉末状培养基并搅拌直至完全溶解。

某些情况下可能需要加热将粉末溶解。

3. 用少量组织培养级纯水冲洗原始容器，以去除痕量的粉末。

添加到步骤2的溶液中。

4. 加入所需的热稳定补剂（例如蔗糖、胶凝剂、维生素、生长素、细胞分裂素等）。

5. 添加额外的组织培养级纯水，使培养基达到最终体积。

6. 一边搅拌，一边添加NaOH、HCl或KOH，以将培养基调节至所需pH。

7. 如果加入胶凝试剂，则加热直至溶液澄清。

8. 根据需要，在高压灭菌之前（或之后）将培养基加样到培养皿中。

高压灭菌后加入热不稳定的组分。

9. 在经过验证的杀菌釜中，以1 kg/cm2（15 psi）、121°C对培养基进行灭菌，持续时间为培养基灭菌实验方案所述时间长度。

10. 待培养基冷却后使用。

粉末状培养基和碱性盐混合物仅供实验室使用。

不适用于医用、家用或其他用途。

未提供的材料•去离子组织培养级水（货号W3500）• 1 N盐酸(HCl)（货号H9892）• 1 N氢氧化钠(NaOH)（货号S2770）储存将干燥培养基储存于0-5°C的干燥器中。

粉末培养基变质可以通过以下方式识别：1）颜色变化；2）粉末中的颗粒化、结块或颗粒物；3）不溶性；4）pH变化；或5）正确使用时无法促进生长。

培养基中的沉淀植物组织培养基中随着时间推移会产生沉淀。

植物组织培养实验

植物组织培养实验植物组织培养是指将植物的一些组织细胞分离出来，在特殊的培养基中进行培养和生长，目的是繁殖和获取大量的纯种植物。

本次实验通过试验实现相应的目标。

实验材料及器械：1. 培养基：MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamborg培养基）、N6培养基（Chu培养基）、KN培养基（Knudson培养基）等；2. 植物组织：初代愈伤组织，生长点、芽，小叶片；3. 水平台，无菌工作台，培养箱，显微镜，中性纸，平板培养瓶，筛网，剪刀，酒精灯，卷尺，移液枪，枪头等。

实验步骤：1. 资料准备：对不同材料的特点、培养基的制备方法及组成、实验的目的等进行归纳、总结和分析。

2. 组织处理：先将绿色植物的各种组织根据类型进行分离，选取具有分化能力的愈伤组织或生长点进行培养。

去除杂质后，取少量组织接种到平板培养瓶中，有的需要进行酶解，提高细胞分裂能力。

3. 培养基准备：按照MS、B5、N6、KN等培养基制备方法，称取培养基粉末，加入适量的蔗糖、植物激素等，将pH调整到5.8-6.2。

接种前对制备的培养基冷藏保存。

4. 组织接种：取出平板培养瓶，用无菌水加热消毒后，将组织以均匀的分布覆盖于培养基表面。

将试管装入培养箱中，控制温度、湿度、光照等条件进行培养。

5. 观察记录：每隔一段时间拿出培养样本，进行显微镜观察。

观察组织细胞的形态、颜色、大小、分化程度、生长情况等。

根据实验进程记录主要观察的实验数据。

实验结果及分析：1. 愈伤组织培养：初始培养时，愈伤组织的生长状况不同，在不同的培养条件下，细胞分化能力、再生器官的形成也有所不同。

初步培养的愈伤组织有不同的再生能力和生长状态：生长状况下降、枯死、增殖等。

愈伤组织需要在适宜温度、适宜光照的情况下进行培养，严格执行无菌操作，才能获得大量高质量的细胞。

在不同的培养环境下，诱导他们进行特定细胞分化，从而提高愈伤组织再生的成功率。

2. 生长点培养：生长点培养时，需要先将其消毒，以免污染飞溅到培养基上。

植物组织培养基的配制

植物组织培养基的配制一、母液的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。

为简便起见，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。

所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的精确性及配制时的迅速移取，而且还便于低温收藏。

普通母液配成比所需浓度高10～100倍。

母液配制时可分离配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

配制时注重一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。

配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。

药品应选职等级较高的化学纯或分析纯。

药品的称量及定容都要精确。

各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。

普通配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分离配制，也可以混在一起。

母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。

下面以MS培养基制备为例，概述其制备办法，为MS基本培养基4种母液成分配制。

(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。

用分析天平按表25称取药品，分离加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。

注重Ca2+和PO3-4易发生沉淀。

然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。

(2)微量元素母液可配成100倍的母液。

用分析天平按表精确称取药品后，分离溶解，混合后加水定容至1000mL。

(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。

(4)有机物母液可配成l00倍的母液。

按表分离称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。

(5)激素母液每种激素必需单独配成母液，浓度普通配成1mg／mL。

用时按照需要取用。

由于激素用量较少，一次可配成50mL或100mL。

另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才干加水定容。

激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定浓度。

组培实验方案

组培实验方案一、实验目的本实验旨在通过组织培养技术，观察不同生长因子及生长环境对植物生长的影响，了解植物发育的基本过程和规律。

二、实验原理组织培养技术是一种利用高分子基质负责支持和保护植物细胞体的组合细胞培养方法，常用于植物生长和发育的研究。

本实验以豆科代表植物——草履菜为实验材料，采用MS(g)+6-BA、MS(g)+NAA、MS(g)+6-BA+NAA三组处理与对照组，观察不同生长因子及生长环境对植物生长的影响。

三、实验步骤1.培养环境准备：洗涤无菌器、洗手间、超净台、塑料夹子、菌种、MS培养基、琼粉、平板；2.实验前准备：检查装备是否需要消毒，准备组织培养所需物品；3.实验操作步骤：a)将草履菜的种子放置在MS培养基上，放置条件为25±1℃，光照16h/8h黑暗；b)昼夜光周期：草履菜的种子苗维持每日光照12小时和黑暗12小时，温度为25±1℃；c)处理组：将MS(g)+6-BA、MS(g)+NAA、MS(g)+6-BA+NAA均匀滴在琼粉带菌器平板上（除对照组），半透明装入不同的草履菜苗上，放置在培养箱中；d)对照组：将简单培养基MS涂在层面带菌装置上，放置在培养箱中。

4.实验后处理：观测组织生长情况，记录草履菜苗高度及芽数量；四、实验注意事项1.操作前必须穿戴干净的实验服，并洗手消毒；2.操作过程中尽可能避免造成细菌的传播；3.实验室内为严密环境，减小人员出入次数；4.实验后务必清理完毕，保持实验室环境清洁卫生。

五、实验结果分析根据实验结果表明，添加6-BA及NAA处理的草履菜显著高于对照组，且MS(g)+6-BA+NAA的处理效果更佳。

说明在特定的生长因子及环境下，能够改变植物生长与发育进程。

六、实验结论本实验说明了组织培养技术的基本原理和操作方法，通过评估实验结果证明了豆科代表植物——草履菜在不同的生长因子及环境下，对其生长和发育有显著影响。

本实验为今后相关领域开展研究提供了理论和实践基础。

实验一 MS培养基的配制

当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。
2021/10/10
4
三、实验材料与器具
1、用具器材
灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。
2、药品试剂
蒸馏水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。
5、混合
将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到1000mL。
6、调pH
用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH 或HCl
溶液调pH 为6.0。
2021/10/10
13
分组情况
共分4组，每组配750mL培养基，每瓶倒2530mL，共接种28瓶左右
每瓶编号1（1/2/3/4）n号
配制成200倍1 L有机母液：
肌醇
20.0 g
（6）配制MS有机母液③
配制成200倍1 L有机母液：
甘氨酸 0.4 g
2021/10/10
10
（7）植物激素的配制
➢ 0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。
➢ 0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。
实验一MS培养基的配制
2021/10/10
1
一、实验目的
1. 了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。
2. 初步掌握培养基母液配制方法。
2021/10/10
2
二、实验原理
植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。

植物组织培养基母液的配制

植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。

配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。

这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。

2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。

搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。

3. 调节pH值。

使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。

4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。

溶解并搅拌直
到完全溶解。

5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。

使用无菌滤纸或滤器进行过滤。

6. 灭菌。

将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。

7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。

以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。

为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。

母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。

基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。

表1大量元素母液（配1L20倍的母液）2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。

由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。

配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存注意配制时，应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。

混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中4、有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶中备用，贴好标签于4℃冰箱中低温保存。