鲤IGF2b基因内含子的克隆、基因组序列分析及慢病毒载体构建

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鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备

鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备

鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备商汉桥;罗晓松;邹世平;伍晓雄;吴小平;龙良启【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2007(37)6【摘要】从鲤(Cyprinus carpio)肝脏总RNA中成功地克隆和诱导表达了胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因,并用间接ELISA法和Western-blot对其融合蛋白的多克隆抗体的效价和特异性进行了分析.结果表明,克隆的鲤IGF-Ⅱ基因与已报道的序列相比,有1个位点发生同义突变;经SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总量的35%.经ELISA测定,制备的抗体效价为6400.Western blot分析表明,抗血清能与重组蛋白发生特异性反应【总页数】4页(P65-68)【作者】商汉桥;罗晓松;邹世平;伍晓雄;吴小平;龙良启【作者单位】华中农业大学,武汉,430070;华中农业大学,武汉,430070;中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州,434000;华中农业大学,武汉,430070;中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州,434000;华中农业大学,武汉,430070;华中农业大学,武汉,430070;华中农业大学,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.弓形虫沉默信号调节子2(TgSir2)的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 张芳菲;曹佳欣;王晨红;毛懿杰;华倩倩;刘淑贤;谭峰;胡昕2.Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备 [J], 刘芳; 卢婷; 蔡梦迪; 吴芳草; 陈相好; 王彩霞; 崔古贞; 陈峥宏3.Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备 [J], 刘芳; 卢婷; 蔡梦迪; 吴芳草; 陈相好; 王彩霞; 崔古贞; 陈峥宏4.罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布 [J], 苏国茂; 林蠡; 秦真东; 李嘉波; 周萌; 莫金凤; 张凯; 梁日深; 吴灶和; 赵丽娟5.草鱼Rab1A基因的克隆表达、抗体制备及对微囊藻毒素-LR的响应 [J], 何丽;刘林;阮记明;周颖;梁惜梅;林长高;隗黎丽因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

德国镜鲤基因组dna文库构建igf-ⅱ基因筛选鉴定

德国镜鲤基因组dna文库构建igf-ⅱ基因筛选鉴定

德国镜鲤基因组DNA文库的构建及IGF—II基因的筛选与鉴定摘要德国镜鲤(CyprinuscarpioL.mirror)原产于德国巴伐利亚州,为鲤亚科Cyprinae鲤属Cyprinus的鱼类,是欧洲各国池塘养殖的主要对象,以后又移植到以色列、日本及我国等亚洲国家。

尽管镜鲤是我国水产主要养殖品种,其分子生物学研究却远远滞后。

胰岛素样生长因子一il(IGF—II)是IGFs基因家族中的一员,它在促进生长,胚胎发育,脑部发育,肿瘤形成等方面都有重要作用。

建立一个完整的基因组DNA文库是开展分子生物学研究的一个基础工作,是分离特定基因的有效手段。

本论文构建了德国镜鲤基因组DNA文库,并利用DNA文库对德国镜鲤胰岛素样生长因子一il(IGF—il)基因进行了筛选与鉴定。

取镜鲤肝组织5克,提取基因组DNA。

取少量基因组DNA利用限制性内切酶Sau3AI进行酶消化预试验,确定得到9--23kb消化产物的最佳酶量和反应时间。

利用预试验获得的最佳条件,取100ug镜鲤基因组DNA进行大规模酶消化试验,产物经10%--40%蔗糖密度梯度离心分离,回收9--23kb片段DNA。

以噬菌体^DASHII为克隆载体,与回收片段进行连接、包装,将包装产物与宿主菌LE392混合培养,构建德国镜鲤基因组DNA文库,测试其滴度为lO"pfu/ml,根据公式N=In(卜P)/In(卜f),99%的镜鲤基因组包含在该基因组文库中。

随机选取5个独立的噬菌斑,提取DNA后用EcoRI与BamHI进行酶切分析,证明克隆重组率为100%,对文库进行扩增。

用sM对基因组文库进行适当稀释,与新鲜制备的宿主菌LE392混合培养,制备噬菌体平板。

将噬菌体DNA转移至硝酸纤维滤膜h利用已知的鲤鱼胰岛素样生长因子一II(IGF—II)cDNA设计探针,用”P标记IGF—II探针,在硝酸纤维滤膜上进行杂交,洗膜2次,放射自显影。

挑取阳性克隆,与宿主菌混合培养,进行第二轮噬菌斑原位杂交,对阳性克隆进行纯化。

鲤鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ的克隆和原核表达研究的开题报告

鲤鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ的克隆和原核表达研究的开题报告

鲤鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ的克隆和原核表达研究的开题报告一、研究背景和意义胰岛素生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是一种多肽激素,在脊椎动物体内广泛存在,并参与多种生理过程的调节。

其中,鲤鱼是一种重要的淡水养殖鱼类,在养殖业中具有很高的经济价值。

因此,探究鲤鱼IGF-1的结构、生物学功能及其调控机制对于了解鲤鱼生长发育规律以及优化养殖管理具有重要意义。

在目前的研究中,已有部分报道了鲤鱼IGF-1的克隆和生物学特性。

然而,目前对于其分子结构和生长调控机制的了解还非常有限。

因此,本研究拟对鲤鱼IGF-1进行进一步的克隆和原核表达研究,以期进一步深入了解其分子特性和生长调控机制,并探索其在饲料添加、生长激素治疗等方面的应用前景。

二、主要研究内容和方法1. 鲤鱼IGF-1 cDNA片段的克隆利用已有的鲤鱼IGF-1序列信息,设计特异性引物进行PCR扩增,然后通过连接、克隆、测序等步骤进行序列验证。

2. 原核表达蛋白的构建将已经克隆成功的鲤鱼IGF-1 cDNA序列连接到表达载体上,构建重组表达质粒,并转化进入大肠杆菌中进行原核表达。

3. 蛋白纯化和功能鉴定利用亲和柱层析等方法对表达蛋白进行纯化,并通过 SDS-PAGE、Western blotting等方法进行鉴定。

4. 生物活性实验利用多种方法评估鲤鱼IGF-1蛋白的生物活性,包括细胞生长实验、核酸合成实验等。

三、研究预期结果1. 成功获得鲤鱼IGF-1 cDNA片段,并构建重组表达质粒。

2. 成功对鲤鱼IGF-1进行原核表达,并获得分子量符合预期的表达蛋白。

3. 成功对表达蛋白进行纯化和功能鉴定,证实其具有鲤鱼IGF-1的生物活性。

四、研究意义和应用前景本研究将系统地研究鲤鱼IGF-1的分子结构和生物学特性,深入探究其生长调控机制。

同时,该研究成果可为鲤鱼养殖业的优化提供科学依据,具有广泛的应用前景。

鲤胰岛素样生长因子的克隆与表达研究的开题报告

鲤胰岛素样生长因子的克隆与表达研究的开题报告

鲤胰岛素样生长因子的克隆与表达研究的开题报告1.选题的背景和意义胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)是体内一类由肝脏和其他细胞合成的重要激素,在很多生理过程中发挥着重要作用。

IGF呈现出类似胰岛素的结构,可促进细胞增殖、分化和代谢。

其中,IGF-1是临床应用最为广泛的一种,对于细胞增殖、代谢和细胞进程中的许多重要指标具有关键作用。

目前对于IGF-1的研究已经取得了一些进展,但对于鲤胰岛素样生长因子(carp insulin-like growth factor,CIGF)的研究还相对较少。

鲤是一种常见的淡水鱼类,其生长发育和生物学特性与人类有着许多相似之处,因而被广泛用于生物学研究中。

因此,对于CIGF的研究,将有助于深入了解其在鱼类生长发育和代谢中的作用,对于鱼类养殖业的发展也具有重要意义。

2.研究的目的和内容本研究的主要目的在于对鲤胰岛素样生长因子的基因进行克隆和表达分析。

具体内容包括以下方面:(1)根据已有文献报道,设计引物克隆鲤CIGF基因;(2)利用PCR技术从鲤脂肪组织中扩增出CIGF基因片段;(3)将CIGF基因克隆到表达载体上,进行表达试验;(4)对表达CIGF基因的蛋白进行纯化和鉴定;(5)对CIGF基因的表达量和时空分布进行分析。

3.研究的方法和步骤(1)设计引物并克隆:根据鲤CIGF基因序列设计引物,用RT-PCR 技术从鲤脂肪组织中扩增出目的基因片段,进行酶切、克隆和测序。

(2)表达试验:将CIGF基因克隆到表达载体上,转化大肠杆菌E.coli BL21,并对表达条件进行优化,如诱导剂浓度和诱导时间。

利用SDS-PAGE和Western blot检测表达CIGF基因的蛋白。

(3)纯化和鉴定:通过Ni2+-NTA柱和FPLC进行蛋白纯化;利用MALDI-TOF-MS技术对蛋白质进行鉴定。

(4)表达量和时空分布的分析:利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,对CIGF基因表达的时空分布与调控进行研究。

鲤胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3基因启动子克隆与序列分析

鲤胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3基因启动子克隆与序列分析

鲤胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3基因启动子克隆与序列分析陈文波;李文笙;林浩然【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2010(034)010【摘要】胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)系统对鱼类的生长和繁殖有着重要的作用.利用PCR方法克隆获得了鲤胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)-2和-3基因的上游启动子部分序列,长度分别是1 142 bp和1 067 bp.Igfbp-2启动子区域没有TATA框和CAAT框.同时,Igfbp-3中只含有TATA框,但没有CAAT框.研究结果表明,二者启动子不具备典型的启动子特征,同时,在二者启动子上还发现了cAMP应答元件和肝细胞核因子结合位点,以及Pit-1、Oct-1、RXR和GR等结合位点.研究认为,鲤Igfbp-2和-3基因的表达受到潜在的多因子调控.【总页数】9页(P1469-1477)【作者】陈文波;李文笙;林浩然【作者单位】中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275;河南理工大学资源环境学院,河南,焦作,454000;中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275;中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275【正文语种】中文【中图分类】Q785;S917【相关文献】1.小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白-7真核表达载体的构建及序列分析 [J], 陈勇;赵雪花;王海燕;朱汉荣;夏瑞明;成彩莲2.胰岛素样生长因子结合蛋白-1启动子的克隆与序列分析 [J], 吴志香;邵敬伟;袁凤山3.鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备 [J], 商汉桥;罗晓松;邹世平;伍晓雄;吴小平;龙良启4.奶山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)基因启动子的克隆及活性分析 [J], 姚大为;赵欣;赵淑颖;杨春蕾;李玉鹏;马毅5.玉米乙烯应答元件结合蛋白基因启动子克隆与功能验证 [J], 刘鑫;邹郁陶;牟巍;李晚忱;付凤玲因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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不同倍性鲤科鱼Cyclin B基因内含子克隆与进化分析

不同倍性鲤科鱼Cyclin B基因内含子克隆与进化分析

不同倍性鲤科鱼Cyclin B基因内含子克隆与进化分析刘良国;尤翠平;刘少军;刘东;钟欢;刘筠【期刊名称】《自然科学进展》【年(卷),期】2009(019)006【摘要】运用PCR扩增、克隆、测序等技术,分别获得三倍体鲫鲂、四倍体鲫鲂、五倍体鲫鲂和团头鲂、草鱼、鲢鱼、鳙鱼等鲤科鱼Cyclin B基因部分DNA序列.结合异源四倍体鲫鲤及其原始亲本红鲫和鲤鱼cyclin B基因对应DNA序列,对不同倍性鲤科鱼类cyclin B基因DNA片段序列进行比较分析.结果表明:由相同引物扩增的染色体数为48的鲂、草、鲢、鳙鱼,只扩增出1条DNA片段,片段长度分别为750 bp,950 bp,720 bp和720 bp,而染色体数目加倍的红鲫、鲤鱼、异源四倍体鲫鲤、异源四倍体鲫鲂,扩增出2条DNA片段(1200 bp和900 bp),三倍体和五倍体鲫鲂扩增出3条DNA片段(1200 bp,900 bp和750 bp),每个DNA片段均含Cyclin B基因第2,3内含子和第2,3,4外显子.序列分析表明,四倍体鲫鲤、三倍体鲫鲂、四倍体鲫鲂和五倍体鲫鲂与其母本1200 bp片段同源性分别为99.5%,98.9%,99.5%和88.7%,与母本900 bp片段同源性分别为97.5%,94.6%,94.2%和89.9%,说明四倍体鲫鲤与多倍体鲫鲂1200 bp和900 bpCyclin B基因片段与母本红鲫同源性高,在进化上具有偏母性遗传特性.而三倍体和五倍体鲫鲂的750 bp Cyclin B基因片段与父本同源性分别高达98.6%和98.2%,说明其来自父本团头鲂.在两性可育的异源四倍体鲫鲤和异源四倍体鲫鲂中存在各自父本Cyclin B基因片段序列消除现象.此外,用Cyclin B基因内含子3序列构建不同倍性鲤科鱼的系统进化树,结果表明,由Cyclin B基因内含子序列构建的系统进化树可以正确反映亲缘关系较近的鲤亚科属间鱼类系统进化关系,而不适合亲缘关系较远的亚科间杂交鱼类系统进化分析.【总页数】8页(P611-618)【作者】刘良国;尤翠平;刘少军;刘东;钟欢;刘筠【作者单位】湖南师范大学生命科学学院,教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室,长沙,410081;湖南师范大学生命科学学院,教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室,长沙,410081;湖南师范大学生命科学学院,教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室,长沙,410081;湖南师范大学生命科学学院,教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室,长沙,410081;湖南师范大学生命科学学院,教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室,长沙,410081;湖南师范大学生命科学学院,教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室,长沙,410081【正文语种】中文【中图分类】S9【相关文献】1.鲤IGF2b基因内含子的克隆、基因组序列分析及慢病毒载体构建 [J], 苏胜彦;董在杰;袁新华;梁政远;曲疆奇;张建桥;刘伟;马良骁;徐跑2.不同倍性鱼cdc2基因cDNA部分序列的克隆及其在卵巢中的表达分析 [J], 曾琛;陶敏;刘少军;刘季芳3.不同倍性鲫鲤MeCP2基因分子克隆及时空表达分析 [J], 周蓉;伍艳红;姚潇;凌欣;刘文彬;刘少军4.不同倍性鲫鲤性腺型芳香化酶cyp19a1a基因cDNA的克隆及表达 [J], 陶敏;刘少军;张卓慧;陈婕;刘文彬;刘筠5.雌核发育二倍体鲫鲤及其他倍性鱼cdc2基因cDNA全序列克隆及表达 [J], 陶敏;刘少军;钟欢;周毅;宋灿;张纯;刘筠因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

鲤IGF2a基因内含子3的单核苷酸多态性与福瑞鲤生长性状的相关性

鲤IGF2a基因内含子3的单核苷酸多态性与福瑞鲤生长性状的相关性

鲤IGF2a基因内含子3的单核苷酸多态性与福瑞鲤生长性状的相关性苏胜彦;董在杰;朱文彬;袁新华【期刊名称】《浙江大学学报(农业与生命科学版)》【年(卷),期】2014(000)005【摘要】为了解鲤IGF2a 基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与福瑞鲤(FFRC strain carp)生长性状的相关性,以福瑞鲤为实验材料,设计用于分析IGF2a 基因内含子3的SNP引物,分析其SNP,再结合福瑞鲤的生长性状,探讨两者之间的相关性.研究发现:杂合子 A/G 基因型使福瑞鲤体质量、体长2个生长指标减小,体质量的降低幅度高于体长,但是两者差异均无统计学意义(P>0.05);而杂合子 A/G基因型和纯合子 G/G基因型的体长与体质量的比值差异有统计学意义(P<0.05).这表明IGF2a 基因可影响福瑞鲤的体质量、体长,且其SNP可能与福瑞鲤内脏质量增加有关.同时,研究发现这个多态位点与性别在对鲤的生长性能的影响上存在互作.这些结果将为基于内含子3的IGF2a 基因分子辅助育种奠定基础.【总页数】6页(P489-494)【作者】苏胜彦;董在杰;朱文彬;袁新华【作者单位】中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室,江苏无锡 214081;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室,江苏无锡 214081; 南京农业大学动物科技学院,南京 210095;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室,江苏无锡 214081;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室,江苏无锡 214081【正文语种】中文【中图分类】Q346+.5【相关文献】1.福瑞鲤与黄河鲤、建鲤鱼肉品质的比较及影响肉质的主成分分析 [J], 吕帆;朱文彬;王兰梅;董在杰2.福瑞鲤与豫选黄河鲤选育群体的遗传结构及亲本间遗传距离分布 [J], 鲁翠云;张晓丽;顾颖;李超;董在杰;冯建新;程磊;孙效文3.镜鲤与建鲤生长性状共享QTL标记及优势基因型 [J], 鲁翠云;顾颖;李超;郑先虎;程磊;曹顶臣;俞菊华;何立川;孙效文4.金边鲤、建鲤和福瑞鲤肌肉品质比较 [J], 黄杰;邹辉;文衍红;韦玲静;张桂姣;张盛;叶香尘5."福瑞鲤2号"和乌克兰鳞鲤在天津地区池塘养殖综合效益对比分析 [J], 孟一耕;缴建华;杨冬芳;吴会民;张韦;戴媛媛;宋立民;李楠;杨峻;王健因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

鲤鱼干扰素γ-2β全长cDNA的克隆及序列分析(英文)

鲤鱼干扰素γ-2β全长cDNA的克隆及序列分析(英文)

鲤鱼干扰素γ-2β全长cDNA的克隆及序列分析(英文)陈义龙;冯祥汝;赵晓;王文东;张俊辉;杨振国;孙真;贾生美;卢强【期刊名称】《农业科学与技术(英文版)》【年(卷),期】2012(013)006【摘要】目的是探讨鲤鱼干扰素γ-2β(IFNγ-2β)全长cDNA的克隆,鉴定和序列分析。

[方法]用挖掘标记的探针筛选与鲤鱼分离的外周血白细胞的cDNA文库并用丝裂原刺激探针。

从外周血白细胞的构建的cDNA文库中挑出IFNγ-2β0序列,克隆了全长的鲤鱼干扰素γ-2β。

此外,进行序列分析。

[结果]获得三种阳性克隆。

序列分析表明该序列具有119bp 5'-UTR和218bp 3'-UTR,该基因的开放阅读框(ORF)是537bp,其借助于178个氨基酸,并且有几个不动的主题3'-未经翻译的区域mRNA(ATTTA)。

与IFN的同源性来自Genbank的同源性高达97%。

蛋白质序列和结构分析表明,预测的蛋白质序列被鉴定为IFN家族签名。

[结论]研究奠定了进一步研究体内IFNγ-2β的表达方式,功能特征和调控机理的基础,以及炎症反应中的动作机制,急诊反应和免疫应答。

%[不合]进行鲤鱼γ -2β(IFNγ-2β)全长cDNA的克兰,鉴定鉴定及分子。

[方法]以以外周血白细胞γγ-2β(干扰素γ-2β,IFNγ-2β)EST为基因,以地高辛标记作为探针对有丝丝原的鲤鱼外周血白细胞cDNA文章进行核酸筛选筛选,克兰鲤鱼ifnγ-2β的cDNA,并进行序列分子。

[结果]获得了3夜阳离。

对其序列分享显示,该序列包含119bp的5'非编码区,218bp的3'非编码区,开放阅读框orf长537bp,共编码178个氨基,在其3'非编码区在几个attta不少基础。

序列同源性比较结果表明,所获序列与genbank上登录的鲤鱼ifn基因的同源性达97%;蛋白质序列和结构分类发作,该序列其有没有ifn家居的典型特征。

鲤JAK2基因分子克隆及组织表达分析

鲤JAK2基因分子克隆及组织表达分析

鲤JAK2基因分子克隆及组织表达分析付友;高谦;文春根;吴平;刘德立【摘要】The full-length cDNA sequence of JAK2 gene from common carp, Cyprinus carpio is obtained by using homology cloning and RACE (rapid amplification of cDNA ends) PCR. The full cDNA sequence of common carp JAK2 in length is 4 639 bp, containing a 3 378 bp complete open reading frame (ORF) which encodes 1 125 amino acids, a 732 bp 5'-untranslated region (5'-UTR), and a 529 bp 3'-UTR, with corresponding molecular mass of 129.33 ku and the theoretical isoelectric point of 6.99. The identity and similarity of its amino acid sequence with the corresponding sequence of zebrafish are 89% and 95%, respectively. Bioinformatics analysis indicated that common carp JAK2 had a FERM domain, an SH2 domain, a pseudokinase domain, and a tyrosine kinase domain. These functional domains are conservative among JAKs from fish, amphibians and mammals, showing that&nbsp;they share similar functional mechanism. The spatial structural elements of carp JAK2 are predicted to includeα-helixes,β-sheets, and loops. Based on the phylogenetic tree of JAK2 generated by neighbor joining method in MEGA 4.0, it shows that each kind of JAKs forms a large monophyletic group, and that the JAK2 main-clade is a sister group to the JAK3 one, which means JAK2 is more closely related to JAK3. Moreover, all JAK2s from the teleost species, including common carp JAK2 in the present study, cluster together, then form the sister group with the second cluster consisting of all from amphibians andmammals. Thus, it is suggested that they should share a common ancestral gene of JAK2 and have remarkable orthologous relationships. The results of real-time quantitive PCR reveal that JAK2 and JAK3 genes are differentially expressed in various tissues of common carp at the level of mRNA. JAK2 is expressed in skin with the highest level, secondly in intestine, blood and brain, and expressed lowly in muscle, head kidney, heart, liver, gill and spleen.The expression level of carp JAK3 in spleen is particularly high, but relatively lower in other tissues. The results in this study have provided a basis for further evaluation on the regulation role of carp JAK2 in the JAK-STAT signaling pathway.%采用同源克隆策略和RACE-PCR技术,克隆得到可能的鲤(Cyprinus carpio)两面神激酶2(JAK2)基因的cDNA全长序列,包括3378 bp的开放阅读框,732 bp的5'-非编码区,529 bp 的3'-非编码区,总长度达4639 bp。

鲤鱼(Cyprinus Carpio) 促性腺激素基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

鲤鱼(Cyprinus Carpio) 促性腺激素基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

鲤鱼(Cyprinus Carpio) 促性腺激素基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备王蕴;胡炜;汤斌;戴军;汪亚平;朱作言【期刊名称】《高技术通讯》【年(卷),期】2006(16)6【摘要】采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从鲤鱼脑垂体获得了两种GtH β亚基的cDNA, 克隆在pMD18-T载体.经测序确证后,将这两个基因克隆到原核表达载体pET -32(a)中,转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导融合蛋白的高效表达.利用初步纯化后的抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.应用制备的兔抗血清与抽提的鲤鱼脑垂体的总蛋白分别进行Western-blot及ELISA分析,结果显示获得的多抗能特异识别各自的天然蛋白.该结果为纯化天然GtH蛋白提供了有效的检测手段,为进一步制备GtH单克隆抗体奠定了基础.【总页数】5页(P633-637)【作者】王蕴;胡炜;汤斌;戴军;汪亚平;朱作言【作者单位】中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072;中国科学院研究生院,北京,100049;中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072;中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072;中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072;中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072;中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072【正文语种】中文【中图分类】TN91【相关文献】1.鲤鱼CD74同源基因的原核表达及多克隆抗体制备 [J], 陶乐;蔡国平2.草鱼促性腺激素基因的原核表达及多克隆抗体的制备 [J], 王艳杰;刘琼;陈文娟;周毅;刘少军;李建中3.鲤鱼(Cyprinus carpio)外异蛋白A受体Edar基因的克隆及表达定位 [J], 蒋丽;王阳阳;程安达;张保勇;马龙;王书;刘永新;孙效文4.鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达 [J], 白俊杰;马进;简清;李新辉;罗建仁5.鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因的亚克隆及其序列分析 [J], 赵晓祥;杨学成;李晶;李莹;张淑梅;杨志兴因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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I F bi o mo ap( yr u a i G 2 cm ncr C p n scr o)m sl a da a s s hrc r.F r e r , h nii n i p uce n nl i i aat s ut r e tel t - y stc e h mo e v
第5 1卷
21 0 2年
第 2期
3月
中山大学学报 (自然科学版 )
A T S I N I R M N T R L U U I E ST T S S N A S N C A CE TA U A U A I M N V R I A I U Y T E I
V0. l No 2 15 .
rl et a vco L ni G 2 I E — G r( e tI F - SE F)w sc nt c d a d i c v y w sa o rsac e .T e rsl — R a o s ut n t at i a l eerh d h eut r e s it s s
F e h t rF s e e n r ls Re o r e iia in, n sr fAg iu t r Wu i21 08 Ch n r s wae ih r s a d Ge mp a m s u c s Utl t i z o Mi it o rc lu e, x 4 1, i a; y
S hn y n , N a e' ,Y A Xn u LA h n y a Q in q , U S eg a DO G Z i i f U N i a一, INGZ eg u n , U J g i h a
ZH NG Ja qa 。LI We , A L a g i o A in io Pa , U i M i n x a ,X U o。
Absr c t a t: Toe plr h eai n h p b t e heI x o e t e r lto s i e we n t GF2b g n n rwt r is e e a d g o h ta t ,we c o e h n r n f l n d t e i to so


( .Wu i i eyC l g , aj gA r utrl nvri ,Wui 1 0 , hn ; 1 x Fs r o ee N ni gi l a U ie t h l n c u sy x 2 4 8 C ia 1
2 Feh a r i e e R s r et , h ee cdm i e c ne/K yLbr o . r w t s r s ee c C n r C i s A ae yo Fs r Si cs e ao t o s e F h i a h e n f hy e / ar f y
江 苏 无锡 24 8 ; 10 1
3 南京农 业大 学动 物科技 学院 ,江 苏 南京 2 0 9 ) . 1 0 5
摘 要 :为了了解鲤 IF b G 2 基因与鲤生长性状之间的关系,以建鲤为试验材料,克隆了 IF b G 2 基因内含子,分
析其基 因组序列 的特点 ,构建了 IF G 2基因的慢病毒 载体 ,同时观 察其在 2 3 9 T细胞 中 的表 达活性 。结果 获得鲤 IF b513b G 2 7 p长度 的基 因组 D A序列 ( M 5 89 ,共有 3个 内含子 ,4个外 显子 ;在 3非 翻译 区存在 2个 N H 759 ) C G岛 ,在 5端非翻译 区存在 ( ) n重复 序列 ;除 此之外 ,成功构 建 了慢病 毒载体 质粒 L niG 2 - E — G p T etI F bI SE — — R F ,转染 2 3 P 9 T细胞后 ,产生 的重 组慢 病 毒 颗粒 出现高 表达 绿 色荧 光 ,荧光 定量 P R检测 发 现 I F b基 因在i c n eh ooy N nigA r utr nvrt , aj g2 0 9 , hn ) .C l g f nm l ce ea dT cn l , aj gi l a U i sy N ni 10 5 C i l n g n c ul ei n a
Mar . 2 2 01
鲤 I F b 因 内含 子 的克 隆 、 G2 基 基 因组序列分析及 慢病毒载体构 建
苏胜 彦 ,董在 杰 ,袁 新华 ,梁政 远 ,曲疆奇 , 张 建桥 伟 ,刘 ,马 良骁 ,徐 跑 l ’
( .南京农 业 大学无锡 渔 业 学院 , 江苏 无锡 24 8 ; 1 10 1 2 .中国水产科学研究院淡水渔业研 究中心 ∥农业部 淡水渔业和种质资源利用重点实验 室,
Cl n fI o e o GF2 n r n b I t o s,An l sso t n m i q n e a d a y i fIs Ge o c Se ue c n
Co sr cin o e t ia co ( e t I 2I ES E n tu t fL ni r l tr L ni GF -R - GF) o v Ve - i mmo r ( y r u apo L ) n Co n Ca p C p i sc ri . n
23 9 T细胞 中高表达。这些结果将为研究 I F b 因在 多态 性 、表达方面与鲤生长性状之 间的关联 奠定 基础。 G2 基
关键 词 :鲤;IF b G 2 ;内含子;慢病毒载体
中图分 类号 :Q 8 7
文献标 志 码 :A 文 章编 号 : 59— 59(02 2 07 — 9 02 67 2 1)0 — 07 0
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