分子生物学常用荧光核酸染料
hoechst33342染色原理
hoechst33342染色原理Hoechst 33,342是一种荧光染料，它常用于分子生物学、细胞生物学和基因工程技术中。
它是一种穿越膜的含钠荧光染料，用于标记细胞核和染色体，可以通过荧光显微镜观察细胞和大多数组织中的特定结构，如DNA合成、染色体成形和修饰以及其他重要标记。
Hoechst 33，342分子结构由三个环组成，其中包含一个异戊烯基和一个芳香环，并且连接在一起的末端拥有一个钠离子的载体。
此外，这种染料还具有一个氟化基团，有一个芳香胺基团，其中中和了由此产生的取代反应。
它也是一种比较不溶解度较高、比较低毒性和可分解性的染料。
染色过程非常简单，将Hoechst 33，342直接加入到细胞/组织样品的细胞培养液或琼脂糖溶液中，然后放置30分钟至2小时，使核内和核外的细胞得以被Hoechst 33，342染料荧光染色。
染料在低温条件下较快地通过细胞膜，然后被细胞内的某些酶吸收，尤其是核内的酶。
在细胞核中，组蛋白去氧核糖核酸（DNA）和染色体修饰酶会与染料结合，使它变得荧光发光。
然后，将干细胞样品放入荧光显微镜中，以获得特定细胞及其核内细胞机制的准确信息。
在荧光镜下，核膜、染色体和组蛋白/DNA混合物等都会闪耀出蓝色荧光。
染料标记的细胞和形成的染色体能够准确检测、定位和跟踪，以了解细胞的正常和病态的变化。
此外，Hoechst 33，342还可用于检测细胞核位点、细胞核定位和细胞染色体检测，以及细胞凋亡的定位和检测。
综上所述，Hoechst 33，342是一种非常有用的荧光染料，可用于分子生物学，细胞生物学和基因工程等研究。
它是一种穿越膜的含钠荧光染料，具有低溶解度，可分解性，低毒性等特点，可用于标记细胞核、染色体及其他至关重要的标记，从而提高了我们对细胞结构的观察。
荧光染料标记法
荧光染料标记法1. 简介荧光染料标记法是一种常用的生物学实验技术，通过使用荧光染料标记目标分子，可以实现对其在细胞或组织中的定位、追踪和可视化。
该技术广泛应用于细胞生物学、分子生物学、免疫学等领域，为研究者提供了重要的工具和手段。
2. 荧光染料的选择在荧光染料标记法中，选择合适的荧光染料是非常关键的。
常用的荧光染料包括荧光素、罗丹明B、偶氮苯等。
选择荧光染料时需要考虑以下因素： - 发射波长：根据实验需求选择适当的发射波长，以便将目标分子与其他背景信号区分开来。
- 共轭反应：荧光染料通常需要与其他官能团进行共轭反应才能与目标分子结合。
因此，需要考虑目标分子上是否有适合共轭反应的官能团。
- 共轭效率：不同荧光染料与目标分子的共轭效率可能不同，需要选择具有高共轭效率的荧光染料，以提高标记效果。
- 细胞渗透性：某些荧光染料可能无法穿透细胞膜，因此在选择荧光染料时需要考虑目标分子所在位置。
3. 标记方法荧光染料标记法有多种方法，常用的方法包括直接标记和间接标记。
直接标记直接标记是将荧光染料直接与目标分子进行共轭反应。
这种方法简单快捷，适用于一些小分子、抗体等。
具体步骤如下： 1. 准备目标分子：目标分子可以是蛋白质、核酸等。
如果目标分子上没有适合共轭反应的官能团，则需要通过化学修饰引入官能团。
2. 准备荧光染料：选择合适的荧光染料，并根据其特性进行激活和稀释。
3. 共轭反应：将准备好的荧光染料与目标分子进行共轭反应，在一定条件下使其结合。
4. 清除未反应的荧光染料：通过洗涤等方法去除未反应的荧光染料。
5. 检测标记效果：使用荧光显微镜等设备观察目标分子的标记效果。
间接标记间接标记是通过先与目标分子结合的一种中介物（例如抗体）进行染色，然后再用荧光染料标记该中介物。
这种方法适用于需要增强信号强度或者需要使用多个荧光染料进行多重标记的情况。
具体步骤如下： 1. 准备目标分子：同直接标记方法。
2. 准备中介物：选择合适的中介物，例如抗体，使其与目标分子特异性结合。
核酸染料文档
核酸染料简介核酸染料是一种用于染色核酸（DNA和RNA）的化合物，常用于分子生物学实验中的核酸检测、分离和可视化。
核酸染料通常具有高亲和力，能够与核酸分子特异性地结合，并在染色后发出荧光信号，以便观察和测量核酸的存在和定量。
核酸染料在分子生物学领域中具有广泛的应用。
它们可以在凝胶电泳实验中用于可视化和分离DNA，也可用于定量PCR、蛋白质-核酸相互作用研究、细胞核酸染色和细胞核型分析等实验中。
常见的核酸染料1. 基于暗电荷色团的核酸染料基于暗电荷色团的核酸染料是最常见的核酸染料之一。
它们的分子结构中含有芳香环和氮碱基，能够与DNA或RNA 的磷酸二酯链发生静电吸引力作用。
常见的基于暗电荷色团的核酸染料有乙溴铵溴化物（EB）、溴化乙啶（EtBr）等。
这类染料通常呈现橙色到红色的荧光，可以与DNA或RNA 的碱基配对形成稳定的络合物。
它们在紫外-可见光谱中显示出特定的吸收峰，并能够发出强烈的荧光信号，使核酸在凝胶电泳实验中可视化。
然而，这些染料具有一定的毒性，对人体和环境有潜在危害。
2. 基于亮电荷色团的核酸染料基于亮电荷色团的核酸染料是近年来发展起来的一类新型核酸染料。
它们的分子结构中含有多个亮电荷基团，能够与DNA或RNA的排斥性电荷相互作用，实现与核酸的高亲和力结合。
常见的基于亮电荷色团的核酸染料有SYBR Green、SYBR Safe等。
这类染料通常呈现绿色的荧光，能够与DNA或RNA形成稳定的复合物，并显示出荧光增强效应。
相比基于暗电荷色团的染料，这些染料毒性较低，对人体和环境的危害较小。
它们在核酸检测、定量PCR等实验中得到了广泛应用。
3. 其他类型的核酸染料除了基于暗电荷色团和亮电荷色团的核酸染料，还存在其他类型的核酸染料。
例如，环形染料是一类由多环芳香烃环组成的染料，可用于核酸检测和荧光原位杂交实验。
还有一些特殊的核酸染料，如GelRed、GelGreen等，它们能够与DNA 或RNA的双链结合，在凝胶中呈现高亮度的荧光。
核酸染料的显色原理是
核酸染料的显色原理是核酸染料在分子生物学领域中扮演着重要的角色，它们作为一种可见光下的荧光染料，广泛应用于蛋白质电泳、DNA序列检测、荧光显微镜观察等实验中。
核酸染料的显色原理是通过与DNA中的核苷酸结合，使得DNA分子在紫外线或蓝光下发出荧光，从而实现对DNA分子的检测和分析。
下面就详细介绍一下核酸染料的显色原理。
首先，核酸染料的组成是由非对称的芳香铵类化合物组成的，这些化合物能够与DNA中的核苷酸发生静电作用，从而将核酸染料吸附到DNA分子表面。
核酸染料中最常见的化合物是乙溴绿（ethidium bromide，简写为EtBr），它是一种可溶于水的阳离子化合物，通过分子内的紫外吸收，从而实现对DNA的染色。
当EtBr与DNA结合后，EtBr分子会插入DNA链中的两个相邻核苷酸之间，从而形成一个EtBr-DNA复合物。
在复合物中，EtBr的芳香环会扭曲地进入DNA 链中的碱基间隙。
这样一来，EtBr分子与DNA分子之间就形成了离子对，从而实现了DNA的染色。
在这个过程中，EtBr的分子构造发生了转变，从向外圆浑球形结构变为向内略弯曲的线型结构，从而使得分子变得更加柔软。
在紫外线或蓝光激发下，EtBr-DNA复合物会发出独特的荧光信号。
紫外线或蓝光的确是EtBr-DNA复合物的“催化剂”，当紫外线或蓝光照射到这个复合物时，EtBr分子会从构型上发生变化，并在此过程中释放出能量。
这个能量被吸收到DNA分子中，从而引发荧光现象的发生。
荧光现象的发生使得DNA分子在紫外线或蓝光下发出强烈的荧光信号，并能够被检测到。
总的来说，核酸染料的显色原理就是通过与DNA中的核苷酸结合，形成EtBr-DNA复合物，并在紫外线或蓝光激发下发出荧光信号，从而实现对DNA 分子的检测和分析。
这个显色原理在分子生物学领域中广泛应用，不仅能够帮助科研人员快速准确地检测DNA分子，还能够使科研人员更加深入地了解DNA 的构成和特性，为生物学研究提供了有力的工具和支持。
常见荧光染料及用途
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光，并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛，涵盖了许多领域，例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR)：墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料，常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号，从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB)：罗丹明B是一种红色荧光染料，广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合，以显示细胞和组织的结构，帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG)：草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料，主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用，可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110)：罗丹明110是一种黄绿色荧光染料，常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合，罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况，特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC)：荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料，常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合，在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种，它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步，新型的荧光染料不断问世，为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用，科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境，进一步推动科学的发展。
常见核酸染料选择浅析
常见核酸染料选择浅析（李路军河南农业职业学院植物科学系河南郑州450000）摘要：由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料。
除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂。
下面比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
关键词：核酸染料、EB、GeneFinder、Goldview、SYBER greenI、GelRed、GelGreen引言：作为生物体内的重要的大分子，核酸是研究生命现象与本质的物质基础，通过对它们的理化性质、复制与转录、表达与调控等的研究，可以了解生命有关的本质规律。
因此，对核酸的研究具有及其重要的意义。
但核酸肉眼不可见，对其的研究主要是借助一定的仪器来观察它的形态、大小、表达量，其中最常见的也是最简单的是琼脂糖凝胶电泳。
EB(溴化乙锭)是实验室最常用的核酸染料，有着简单、快速、灵敏度高的特点，但是由于其有着强烈的致突变能力和中度致癌性，对实验者和周围环境都有着较大的危害。
溴化乙锭(EB)是分子生物学实验室常用的一种核酸荧光染料。
但是，由于EB是一种强烈的致癌物，因此，如何消除EB对实验室的污染，是分子生物学实验室安全所必须面对的一个难题。
A bstract：Because only needs the simple temperate physical method(illumination)to stimulate and the examination,the fluorescent dye studies the biology microcosm is when specially the nucleic acid one of most commonly used tracing tools.After DNA electrophoresis,examines the gelatin EB is the fluorescence nucleic acid dye which probably the most person knew very well. Except dyes the rubber,the fluorescence nucleic acid dye may also use in the fluorescence home position hybrid taking the common counterstain.Following compares in the molecular biology experiment and the cytology experiment the commonly used fluorescent dye.Key word:Nucleic acid dye,EB,GeneFinder,Goldview,SYBER greenI,GelRed,GelGreenIntroduction：In the achievement organism's important macro-molecule,the nucleic acid is studies the biological phenomena and the essential material base,through to their physics and chemistry nature,the duplication and the duplication,the expression and the regulation and so on research,may understand the life related essence rule.Therefore,has and the vital significance to the nucleic acid research.But the nucleic acid naked eye is not obvious,is mainly draws support from certain instrument to its research to observe its shape,the size,the expression quantity,what most common is also the simple is the agarose gel electrophoresis.EB(bromination second grade spindle)is the laboratory most commonly used nucleic acid dye,has simply,fast,the sensitivity high characteristic,but because it has intense sends the sudden change ability and the moderatecarcinogenicity,has the big harm to the laboratory technician and the environment.Bromination second grade spindle(EB)is the molecular biology laboratory commonly used one kind of nucleic acid fluorescent dye.But,because EB is one kind of intense careinogen,therefore,how to eliminate EB to the laboratory pollution,is a difficult problem which the molecular biology laboratory security must face.1.EB核酸染料溴化乙锭（EB）是一种常规核酸染料，被广泛应用于观察、检测琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中的DNA或RNA。
cy3 标准物质
cy3 标准物质
Cy3是一种荧光染料，也被称为Cyanine 3，其标准物质的主要信息如下：
1. 荧光性质：Cy3的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右，呈现橙红色荧光。
2. 应用：Cy3染料主要用于标记肽、蛋白质、核酸DNA/RNA，广泛用于分子生物学实验。
3. 检测：Cy3荧光肉眼观察很明亮，并且对pH不敏感，可以用共聚焦显微镜或普通荧光显微镜进行观察。
在共聚焦显微镜中可以用532nm或
556nm的激光束激发，在普通荧光显微镜中可以用TRITC (tetramethylrhodamine)的滤片观察。
4. 溶解性：Cy3是非磺化的，需要如DMF、DMSO或其他有机溶剂共溶剂来在水中进行标记。
5. 化学式：C33H43ClN6O。
此外，Cy3也可以作为Dil等细胞电位追踪剂的母核，所以它是在生物技术中非常有用的荧光染料。
在荧光成像时，Cy3的背景荧光一般认为比TAMRA等TRITC系列的染料低。
以上信息仅供参考，如需更多信息，建议咨询专业化学人员或查阅化学类书籍。
荧光染料用途
荧光染料用途
荧光染料是一种特殊的染料，可以发出明亮的荧光光线，因此广泛用于各种领域。
以下是荧光染料的几种主要用途：
1. 生物医学：荧光染料可以用于生物医学研究中的细胞成像、分子生物学、药物筛选等方面。
比如，在细胞成像中，荧光染料可以标记细胞内的蛋白质、核酸等分子，便于观察它们的运动、交互、分布等。
2. 材料科学：荧光染料可以用于制备荧光材料，如荧光纳米材料、荧光聚合物等。
这些材料可以应用于光电子学、荧光传感等领域。
3. 环境监测：荧光染料可以作为环境监测中的标记物，用于追踪水、空气、土壤等中的污染物。
比如，在水污染监测中，荧光染料可以标记水中的重金属、有机污染物等，便于跟踪它们的扩散和排放。
4. 安防领域：荧光染料在安防领域有广泛应用，如防伪标记、水印、指纹检测等。
荧光染料可以做成无法直接肉眼观察到的标记物，只能通过特定的荧光检测器或显微镜观察到。
总之，荧光染料是一种具有特殊荧光性质的染料，有着广泛的应用前景。
随着科技的不断发展，它在各个领域的应用也将越来越广泛。
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常用的核酸染料有哪些
常用的核酸染料有哪些EB（溴化乙锭）：溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，为强致癌诱变剂，但价格便宜。
它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。
EB的这种特性使其成为一种核酸染料，常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。
溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰，在紫外光的照射下，溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光（590nm）。
结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍，因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带，非常灵敏。
Gel Green和Gel Red：GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其特点有：高灵敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一；稳定性极好：可以使用微波炉加热，可以在室温下保存；更安全：艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB）；广泛的适应性：适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色；染色过程简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗；对DNA 和RNA 的迁移影响小：对核酸迁移的影响小于SYBR Green 。
与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时，GelRed 可以完美的替代EB；使用254nm 激发的UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时，GelGreen 足以替代任意一种SYB染料。
但该染料会使小片段DNA迁移慢一些（与EB相比).Gold View I型/II型：Goldview对于大片段DNA的染色效果良好，但是在对于500bp 以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
生物荧光染料波长
生物荧光染料波长荧光染料是一种能够吸收特定波长的光并发射出不同波长的光的化合物。
它们在生物科学研究、医学诊断、药物开发等领域中起着重要作用。
本文将介绍几种常见的生物荧光染料及其波长特性。
一、荧光染料的波长定义荧光染料的波长通常由其吸收峰和发射峰决定。
吸收峰是指荧光染料能够吸收的最大波长，而发射峰则是指荧光染料在受到激发后发射的最大波长。
二、常见的荧光染料及其波长特性1. Alexa Fluor 488（波长：495 nm/519 nm）Alexa Fluor 488是一种常用的荧光染料，其吸收峰位于495 nm，发射峰位于519 nm。
它在细胞免疫荧光染色、蛋白质定位研究等方面广泛应用。
2. Cy3（波长：550 nm/570 nm）Cy3是一种红色荧光染料，其吸收峰位于550 nm，发射峰位于570 nm。
它常用于DNA、RNA等核酸的荧光标记，也可用于蛋白质荧光标记。
3. Texas Red（波长：595 nm/615 nm）Texas Red是一种红色荧光染料，其吸收峰位于595 nm，发射峰位于615 nm。
它在细胞荧光染色、分子探针等方面有广泛应用，常用于免疫荧光标记和显微镜观察。
4. FITC（波长：492 nm/520 nm）FITC是一种绿色荧光染料，其吸收峰位于492 nm，发射峰位于520 nm。
它常用于细胞免疫荧光染色、蛋白质标记等研究中。
5. Rhodamine B（波长：554 nm/576 nm）Rhodamine B是一种橙红色荧光染料，其吸收峰位于554 nm，发射峰位于576 nm。
它在细胞荧光染色、荧光显微镜观察等方面有广泛应用。
6. DAPI（波长：358 nm/461 nm）DAPI是一种蓝色荧光染料，其吸收峰位于358 nm，发射峰位于461 nm。
它可用于染色体核型分析、细胞核染色等。
三、荧光染料的应用领域荧光染料在生物科学领域中有着广泛的应用。
它们可以被用于细胞荧光染色、蛋白质定位、基因表达分析、药物荧光标记等方面。
核酸染色剂
电泳后，核酸需经染色才能显色出带型，常用以下核酸染色剂：1. 溴化乙锭(ethidium bromide, EB)最常用的核酸荧光染料，这种扁平分子可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。
激发荧光的能量来源于两个方面，一是核酸吸收波长为 260nm的紫外线后能将能量传送给溴化乙锭，二是结合在DNA分子中的EB本身，主要吸收波长为 300nm和360nm的紫外线的能量，来源于这两方面的能量，最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。
EB-DNA 复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。
若EB背景太深，可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO仲1h或10mmol/L MgCI2中5min,使非结合的 EB褪色，这样可检查到 10ng的DNA羊品， EB也可用于检测单链 DNA或 RNA但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。
在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5卩g/ml的EB,染色可在电泳过程中进行，能随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。
但EB带正电荷，嵌入碱基后增加了核酸分子的刚性，使迁移率减慢，故不宜用于测定核酸分子量的大小，这时应在电泳后将凝胶浸入0.5卩g/ml的EB水溶液中10min进行染色。
EB见光易分解，应于4 C避光保存。
2. 吖丫啶橙(acridine orange,AO ):吖丫啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发下产生640nm的红色荧光。
因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1卩g 和0.05卩g。
但吖丫啶橙的染色操作要求严格，应在22 C, 0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.0 )中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂 4 C脱色过夜或22 C脱色1~2 小时。
核酸荧光染色原理的品牌
核酸荧光染色原理的品牌核酸荧光染色是分子生物学实验中常用的一种技术，它可以用于检测和定量分析DNA或RNA等核酸的存在和数量。
核酸荧光染色的原理是利用染色剂与核酸结合后发生荧光现象，通过荧光测量仪器可以测定荧光信号的强度和发射波长，从而得出样品中核酸的浓度和纯度等信息。
在核酸荧光染色实验中，常用的品牌有以下几种：1. SYBR Green：SYBR Green是Invitrogen公司的核酸荧光染料，广泛应用于核酸定量、PCR实时定量和凝胶电泳等分子生物学实验中。
SYBR Green可以与双链DNA结合形成复合物，发射荧光信号，其荧光强度与DNA量成正比。
2. GelRed：GelRed是Biotium公司开发的一种新型核酸荧光染料。
与传统的核酸染料相比，GelRed具有更低的毒性和更高的荧光增强效果。
GelRed可以用于凝胶电泳中直接染色DNA，也可以在PCR实时定量中应用。
3. GelGreen：GelGreen也是Biotium公司推出的一种核酸染料，与GelRed 类似，GelGreen也具有低毒性和高荧光增强效果。
GelGreen可以与双链DNA 结合，发出荧光信号，常用于凝胶电泳和PCR实时定量中。
4. EtBr：Ethidium Bromide（EtBr）是最早用于核酸染色的荧光染料之一。
EtBr 可以与DNA分子间的孔结合，发射荧光信号。
EtBr具有易致突变和致癌的潜在风险，因此使用EtBr时需要采取相应的安全措施。
5. EvaGreen：EvaGreen是美国Biotium公司开发的一种高亲和性核酸染料。
EvaGreen与DNA结合后，可发射强烈的荧光信号，且无毒性。
EvaGreen常用于PCR实时定量反应和其他核酸检测实验中。
6. PicoGreen：PicoGreen是Thermo Fisher Scientific公司推出的一种核酸荧光染料。
PicoGreen可以与DNA结合形成复合物，发射荧光信号，其荧光强度与DNA浓度成正比。
荧光素钾盐使用说明
荧光素钾盐使用说明
荧光素钾盐是一种常用的荧光染料，常用于生化实验、分子生物学等领域中检测蛋白质、核酸等分子的含量和轨迹。
以下是荧光素钾盐的使用说明：
1. 荧光素钾盐为粉末状，应在阴凉干燥处存储，避免阳光直射和潮湿。
2. 使用荧光素钾盐前需将其溶解于适当的缓冲溶液中，如Tris-EDTA缓冲液、PBS缓冲液等。
3. 荧光素钾盐的最大激发波长为约350nm，最大发射波长为约510nm。
4. 荧光素钾盐可通过荧光显微镜、流式细胞仪等设备进行检测和观察。
5. 在使用荧光素钾盐时，应注意安全防护，避免直接接触和吸入粉末，应戴手套、口罩等防护用品。
6. 使用结束后，应将荧光素钾盐及相关实验物品彻底清洗干净并妥善处理，避免对环境造成污染。
以上为荧光素钾盐的使用说明，使用时需按照实验要求进行合理使用。
上海常用的核酸染料的使用方法
上海常用的核酸染料的使用方法
核酸染料在细胞学、免疫学、分子生物学研究以及临床检测等方面都有重要应
用价值。
上海常用的核酸染料有几种，它们在实验室研究样本的各种特性时扮演着重要的角色，如同悬挂灯笼般确定样本当前的活性和分子形态。
下面将介绍上海常用核酸染料在实验室使用时的几种方法。
首先，互补核酸染料可用于核酸的检测，因此很适合检测单链DNA或双链DNA
以及各类核酸杂质。
它可以实现荧光发射或发射的检测，简便的实验方法让许多研究人员受益。
其次，荧光增强剂将普通和低荧光强度红色染料的荧光强度提升10
倍以上，它的覆盖面比吸收染料覆盖的面更广，能检测更少量核酸，在实验室使用时操作起来具有便利性。
再者，序列确定染料用于核酸定位。
它可以识别序列突变，快速检测基因变体，被广泛应用于DNA序列确定，基因组研究、基因诊断，遗传检测等多种研究领域。
最后，荧光寡核苷酸染料可用于克隆验证，它可以测定用于PCR扩增的目的克隆的真实性，从而准确判断是哪个克隆是有进行修饰的。
上海常用的核酸染料的使用方法介绍完毕，总之，核酸染料使用实验室仪器检
测核酸的效果更佳，但更重要的是要根据样本的情况选择合适的染料进行检测，以获取更加准确的实验结果。
另外，掌握正确的染料使用方法也是制定检测流程中不可或缺的一部分，应根据实验规程进行操作，并定期进行染料检测，以确保实验结果准确可靠。
核酸染料的作用原理
核酸染料的作用原理核酸染料是一种广泛应用于细胞生物学、分子生物学、生物医学等领域的化学物质。
它可用于定位核酸的位置，检测细胞的基因表达和研究染色体结构等方面。
那么，核酸染料的作用原理是什么呢？1. 分子构造核酸染料主要有两种，一种是荧光素，如乙酰氧基甲基苯并咪唑（Acridine Orange）和伊诺拉丁（Ethidium Bromide），另一种是荧光染料，如SYBR Green和SYTO 9等。
虽然它们的分子构造各不相同，但都具有荧光性质，可以在荧光显微镜下观测到。
2. 与DNA结合核酸染料能够与DNA结合，从而使DNA发生荧光。
荧光酶或荧光探针可用于引发荧光反应。
在荧光显微镜下，核酸染料与DNA的结合部位会发出荧光信号，被观测到的细胞或组织中，核酸染料的荧光强度反映了细胞中DNA含量的多少。
3. 与RNA结合除了与DNA结合外，核酸染料还可以与RNA结合。
核酸染料会与RNA的尿氮基团结合，使RNA分子产生荧光，从而诱导荧光信号。
相比于DNA的含量，RNA的含量在细胞的代谢活动中也扮演着极为重要的角色。
因此，通过核酸染料检测RNA含量，可以了解细胞的繁殖能力、分化潜能以及活跃程度等方面的内容。
总之，核酸染料的作用原理来源于其与DNA和RNA的特定结合使其在荧光显微镜下能够发出荧光信号。
通过观察荧光信号的强弱以及荧光信号的颜色，我们不仅能够获得有关DNA和RNA的信息，也能够进一步研究细胞的生理功能、代谢活动等方面的问题。
因此，核酸染料在细胞和分子生物学领域具有广泛而重要的应用前景。
广东常用的核酸染料染色原理
广东常用的核酸染料染色原理广东常用的核酸染料主要有EB（乙溴化乙锭）、SYBR Green I（绿色核酸染料I型）、SYBR Safe（安全型核酸染料）、Ethidium Homodimer-1（荧光双聚物1）等。
这些核酸染料在分子生物学领域应用广泛，特别是在核酸凝胶电泳、实时荧光定量PCR等实验中。
核酸染料的染色原理是利用核酸的性质，通过特定的化学反应，使染料与核酸分子结合并发生荧光发射。
核酸染色分为胶下染色和胶前染色两种方式，胶下染色是直接将染料加入凝胶中进行染色，胶前染色则是处理完核酸样品后加入染料。
EB是传统的核酸染色剂，可以通过与DNA分子中的磷酸根结合变成荧光绿色，在紫外光下有很好的荧光发射。
但是EB有致癌性，使用时需要注意安全，另外EB染色后需要紫外透射灯照射才能观察到荧光。
SYBR Green I是一种广泛应用的核酸染色剂，具有低毒性和高亲和力，可用于胶下染色和胶前染色。
它可以与DNA的双螺旋结构结合，产生荧光信号，不需要紫外光激发就能在荧光检测仪上获得强烈的荧光信号。
SYBR Safe是SYBR Green I的一种安全型染料，它能够与DNA分子中的碱基结合，形成荧光复合物。
SYBR Safe在使用时无需特殊安全措施，只需要紫外光启动系统，可以被常规的荧光检测仪所检测到。
Ethidium Homodimer-1是一种双聚物核酸染料，可以用于胶下染色和胶前染色。
它可以与双链DNA的内部结合并形成稳定的荧光复合物，具有较高的亲和力和特异性。
与其他核酸染料相比，它对样品的浓度和纯度要求较高。
总之，核酸染料是分子生物学实验中不可或缺的工具，各种染色剂的特性和适用范围不同，科学家们需要根据实验需求选择合适的染色剂进行实验。
荧光定量pcr的应用及其常用的荧光探针和荧光染料
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常用的核酸染料
常用的核酸染料
核酸染料是用于检测DNA和RNA分子的荧光染料。
在生物医学研究和诊断中，常用的核酸染料包括以下几种：
1. 基于亚甲基蓝的染料：如Ethidium bromide（EB）和SYBR Green。
EB进入DNA分子中，使其发生荧光，SYBR Green则可以与DNA结合形成荧光复合物。
这些染料广泛应用于凝胶电泳，PCR检测和细胞成像等领域。
2. 基于Cy系列染料的染料：如Cy3和Cy5。
这些染料具有较高的荧光强度和稳定性，广泛应用于荧光原位杂交和蛋白质-核酸相互作用研究等领域。
3. 基于蓝莓素的染料：如Hoechst 33258。
这些染料可以与DNA 结合形成荧光复合物，常用于染色体染色和细胞核染色等领域。
4. 基于荧光素的染料：如Fluorescein和Tetramethylrhodamine（TMR）。
这些染料具有高荧光强度和较短的激发波长，广泛应用于DNA测序和细胞成像等领域。
总的来说，选择合适的核酸染料要根据实验需要和染料的特性进行考虑。
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荧光染料标记法
荧光染料标记法1. 介绍荧光染料标记法是一种常用的生物化学实验技术，用于研究细胞、蛋白质、核酸等生物分子的定位、追踪和可视化。
通过将荧光染料与目标分子结合，可以利用荧光显微镜观察和记录目标分子在细胞或组织中的位置和运动。
2. 荧光染料的选择选择合适的荧光染料对于实现有效的标记至关重要。
常用的荧光染料包括荧光素、罗丹明、偶氮染料等。
选择荧光染料时需要考虑以下要素：•发射波长：根据实验需求选择适当的发射波长，以便在显微镜下观察到目标分子。
•激发波长：激发波长应与显微镜所配备的激发源相匹配，以确保荧光信号的最大强度。
•荧光稳定性：选择具有较高稳定性的荧光染料，以减少信号衰减或消失。
•细胞渗透性：某些荧光染料可以穿透细胞膜直接染色，而其他染料则需要使用特殊方法使其进入细胞。
3. 荧光染料的标记方法3.1 直接标记法直接标记法是将荧光染料直接与目标分子结合。
这种方法简单快捷，适用于一些较小的分子和化合物。
一般步骤如下：1.准备目标分子：根据实验需求，提取或合成目标分子。
2.染色剂激活：将荧光染料与激活剂反应，使其具有反应性。
3.染色剂与目标分子结合：将激活后的荧光染料与目标分子反应，形成共价键。
4.去除未反应的荧光染料：通过洗涤等方法去除未结合的荧光染料。
3.2 间接标记法间接标记法是利用特定的抗体或亲和素与目标分子结合，再通过与荧光染料结合来实现对目标分子的检测。
这种方法常用于检测蛋白质或细胞表面分子。
一般步骤如下：1.准备目标分子：根据实验需求，提取或合成目标分子。
2.制备抗体或亲和素：通过免疫技术制备与目标分子结合的抗体或亲和素。
3.抗体或亲和素与目标分子结合：将抗体或亲和素与目标分子反应，形成特异性的结合。
4.荧光染料与抗体或亲和素结合：将荧光染料与抗体或亲和素反应，形成共价键。
5.检测目标分子：通过荧光显微镜等方法观察和记录目标分子的位置和运动。
4. 荧光显微镜观察荧光染料标记法的最终目的是通过荧光显微镜观察目标分子在细胞或组织中的位置和运动。
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由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物，DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。
除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂，它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。
根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内，还可分为两大类：通透性核酸染料和非通透性核酸染料。
生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
分子生物学常用荧光核酸染料荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色，以及定量PCR。
EBEB（溴化乙锭）本身在紫外下不发光，能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。
因其廉价且灵敏度高，一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。
EB的使用非常简单方便，电泳结束后染色可获得最佳效果，也可以在制胶时加入进行前染。
前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题。
EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。
虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉，行为可怕”的家伙，一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶，但大多数人对EB还是“敬而远之”的，没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。
偏偏对于搞分子生物学的人来说，跑胶就像吃饭一样平常，于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道，盼望EB的替代品早点出现在实验室。
生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。
SYBR系列染料说到EB的替代物，首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。
自1993年SYBR核酸染料推出以来，就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎，成为明星产品之一。
这一系列包括4种染料：SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。
赫赫有名的SYBR Green I荧光染料是最早上市的EB替代品，这种致畸性低而相对安全得多的新染料在标准300 nm的紫外透射光下，能检测低至60 pg的dsDNA，比EB至少高了一个数量级。
同时，SYBR Green I染料-DNA复合物的荧光量子产率约为0.8，相当于EB的5倍。
SYBR Green I的使用和EB同样简单，而具有比EB更高的灵敏度，致变性也低得多（有个别宣传称之为几乎无毒），使之迅速成为替代EB的好选择----如果不是贵得多的话就更好了。
色如其名，结合DNA后会发出美丽的绿色荧光，在拍照时需要配套的滤光片。
SYBR Green I亦即是定量PCR荧光染料法中广泛使用的荧光染料。
为什么选择它，而不是灵敏度更高的SYBR Gold呢？那是因为SYBR Green I具有双链DNA的专一选择性。
SYBR Green II与SYBR Green I则刚好相反，它是检测RNA或单链DNA的高灵敏染料。
尽管它不是RNA特异的，但SYBR Green II与RNA结合的荧光量子产率（~0.54）高于DNA（~0.36）。
这个性质很特别，因为大部分染料都是与双链DNA结合时量子产率和荧光强度更高。
与SYBR Green I相似，SYBR Green II也是在254 nm透射光下灵敏度最高。
如果在300 nm透射光下，RNA检测的金牌恐怕还要颁给SYBR Gold。
此外，SYBR Green II染料-RNA复合物的荧光不会被尿素或甲醛淬灭，因此在染色之前不必将变性剂洗脱。
SYBR Green II可检测凝胶中低至100pg的ssDNA或者2ng RNA条带，特别适合SSCP分析和RNA分析。
SYBR Gold是这一系列中灵敏度最高的。
它一旦结合核酸，荧光会增强1000倍以上，量子产率约为0.6。
而EB仅为30倍，量子产量大约在0.15。
因此，利用300 nm紫外透射仪和黑白成像，SYBR Gold检测凝胶中DNA和RNA的灵敏度比EB高10倍以上。
色如其名，可以观察到金色的条带。
SYBR Gold染料可用于检测包括双链DNA，单链DNA和RNA，适用于琼脂糖凝胶电泳、变性梯度凝胶电泳（DGGE）、单链构象多态性（SSCP）研究，以及其他常规的分析。
SYBR Safe既然名为safe，自然是安全第一。
它的诱变性比EB要低得多，但检测灵敏度与EB 相当。
使用方法也相同，既可以在制胶的时候加入，也可以在电泳后进行染色。
SYBR Safe的激发峰在280和502 nm，发射峰在530 nm。
因此，核酸被染色后，可通过标准的紫外透射仪、可见光透射仪或激光扫描仪来查看。
大家都知道，紫外光对DNA片段是有损伤的，Invitrogen 曾做过实验，让1.25 kb的基因片段在紫外光下暴露2分钟，再切胶回收、连接、转化，结果发现平板上的克隆数几乎为零。
如果你用SYBR Safe搭配蓝光透射仪，就不会有这种问题，也无需担心紫外线对眼睛的损伤。
生物通小贴士：SYBR染料虽是EB的替代，但用法和EB不尽相同，染色时也有一些需要特别注意的地方。
首先是pH值。
Invitrogen的专家发现pH是影响染色效率的重要因素。
如果它高于8.3或低于7.5，你会发现灵敏度显著下降。
另外一点也很容易忽视，Tris缓冲液的pH值在4°C 会比室温下明显升高。
如果在室温时你的缓冲液配制成pH 8.0，那么在4°C pH将会升高到8.5。
因此如果你要冷藏染色液，那么它在室温下的pH值应是7.5。
其次，很多研究人员习惯于制备含有溴化乙锭染料的凝胶。
SYBR Green染料也能如此使用，不过核酸的迁移率会受到影响，灵敏度也会稍有下降，因为背景荧光增加。
在预制胶时，染料应该在临灌胶之前，液体足够冷却时加入熔化的凝胶中。
沸腾和接近沸腾的温度会破坏SYBR Green染料染核酸的能力。
注意：不要在微波炉中加热SYBR Green染料。
Lonza公司也有一种久负盛名的类似SYBR Gold的GelStar核酸荧光染料，可高灵敏的检测凝胶中低至20pg的dsDNA或者3ng的RNA，使用起来和EB一样可以前染或者后染且无需脱色，可让你更清晰地观察实验结果。
UltraPower核酸染料百泰克公司最近也推出了一种取代EB的无毒花菁染料- UltraPower核酸染料。
利用紫外凝胶透射仪来观测，它的灵敏度比EB染色法高5-10倍，如果配合百泰克UltraPower™可见光透射仪，则比EB染色法高8-20倍。
样品荧光信号强，无背景信号。
操作也很简单，可以采用胶染法（同EB）、点染法、泡染法等染色方法，无须脱色或冲洗。
琼脂糖凝胶电泳和PAGE电泳均可使用，价钱当然比进口试剂要便宜很多。
目前，百泰克还提供试用装，欢迎大家申请。
GelRed & GelGreen由中国留学生创立的美国Biotium公司提供的GelRed和GelGreen也是EB替代品。
根据独立的测试服务公司的标准艾姆斯氏测试结果，在18.5 μg /mL （该浓度远高于推荐用于电泳后染色的约 4 μg/mL 的3X 染色液）浓度下，GelGreen 没有诱变性，而GelRed 也仅在S9 代谢活化时有微弱的诱变性。
GelRed 和GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。
如果您使用的是紫外成像仪，可选择GelRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，可选择GelGreen。
插曲：争议网络上关于EB替代品安全性的问题一直争论不休，虽然各品牌都有五花八门的证据，但EB替代品究竟安不安全？虽然EB为活细胞排斥，但还有具有一定的细胞膜通透性，EB的致变性通常被认为来自于能稳定地插入到核酸中而导致核酸复制过程出错。
每种荧光核酸染料都因其能稳定插入核酸内部从而改变荧光特性才得以成为可用的荧光染料，从理论上都是不安全的，新出的EB替代物的安全性恐怕还需要更长时间来验证。
其实长期在实验室里工作真可谓“冒着生命危险”的，常常需要与EB啊，同位素啊，细菌病毒啊等各种致癌致畸的试剂打交道。
2007年生物通曾经联手赛默飞世尔公司发起过实验室安全调查，正是有感于短期内多次听到同领域多位人士患可怕重症的消息，调查结果也确实触目惊心。
因此，无论用什么，请大家还是牢记----珍爱生命，请带手套。
一时半会儿看不出问题，可年轻的你们，来日方长呢……实验室安全的问题，我们一直不够重视，但有关自己的健康，你还能忽视吗？还有各种染料染色后继的废弃试剂，请尽可能的规范处理，请做个负责任的实验人----通常的处理是活性炭吸附后焚化，就算没有条件也尽可能处理一下（比如强碱处理，多数荧光染料会变性）再废弃，我们的环境污染实在不需要我们雪上加霜了。
言归正传，荧光染料在分子生物学中另一个广泛应用就是定量PCR。
关于荧光探针和荧光引物的选择及优缺点比较，那又是一门大学问，详情请看《定量PCR选择之：荧光探针和荧光引物》。
细胞生物学常用荧光染料固定细胞的染色PIPI（碘化丙锭）与EB结构相似，PI在水中的溶解度更高，而膜通透性比EB低，不过两种染料都会被活细胞排斥。
PI则常用于检测死亡或即将死亡的细胞数量，或了解细胞内染色体局部状况、DNA结构和膜完整性。
PI作为红色荧光复染剂的首选，可与绿色荧光探针或二抗共同使用。
DAPI荧光染料DAPI大家应该也不陌生。
它的学名为4',6-二脒基-2-苯基吲哚，与DNA结合后发出蓝色荧光，与其他结构的绿色、黄色和红色荧光形成鲜明的对比。
与Hoechst相似，DAPI也是与双链DNA 的小沟结合，特别是AT簇。
当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合无荧光的增强。
它的荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。
不过，DAPI在结合去污剂、磷酸盐及其他多聚阴离子之后，荧光并不会显著增强。
DAPI是一种极佳的核酸复染剂，能显示出染色体的清晰带型。
DAPI易溶于水，在PBS中溶解度有限。
SYTOX系列染料Invitrogen的SYTOX系列染料也很受欢迎，它们是非通透性的花菁染料，尤其适合于死细胞的染色。
使用起来也比较简单，只需要加到细胞，然后观察即可，不需要额外的洗涤，因为它们在水溶液中没有荧光。
SYTOX染料适用于多个平台，包括荧光显微镜、流式细胞仪和酶标仪。
整个系列目前有红、橙、黄、绿四种颜色。
SYTOX绿色染料与核酸的亲和力是整个系列中最高的。
一旦与核酸结合，荧光会增强500倍以上。
哇，立马把PI比了下去。
且它的碱基选择性最小，不像DAPI和PI那么挑剔，只认AT。
SYTOX绿色染料可由常用的488 nm激光或其他的450-490 nm光源激发。