产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定

吉林化工学院环境与生物工程学院

微生物学实验报告

产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定

学生学号：10350135

学生姓名：郭金洋

专业班级：生技1001

指导教师：谢莹

吉林化工学院

Jilin Institute of Chemical Technology

产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定

姜建平，荣荣，赵永红，赵楠，郭金洋

摘要：目的：筛选产淀粉酶菌株。方法：利用碘液显色法，从土壤中筛选产淀粉酶菌株；通过菌落形态、菌体特征观察和生理生化鉴定对菌种进行鉴定。

关键词：产淀粉酶菌株，鉴定生理生化性

1前言

淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类的总称，广泛存在于动植物和微生物中，是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种【1】淀粉酶种类繁多，特点各异，可应用于造纸、印染、酿造、果汁、和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域【2】本实验以土壤为原料，从中筛选出具有产淀粉酶能力的菌株，并对其进行生理生化鉴定，了解并熟悉淀粉酶的筛选及鉴定

2材料与药品

2.1材料

取自学校周围的蛋糕坊附近的土壤，高压灭菌锅，移液管，试管，三角瓶，培养皿，牙签，载玻片，接种针，电炉子

2.2药品

牛肉膏，蛋白胨，淀粉，琼脂，硫酸铵， K2HPO4， MgSO4·7H2O， CaCl2·2H2O，蔗糖，蒸馏水， NaCl ，硝酸氢二钾，葡萄糖， 0.04%溴甲酚紫，碘液。

3 实验方法

3.1 培养基的配制

3.1.1.淀粉培养基

3.1.1.1淀粉培养基配方

牛肉膏 0.3g 蛋白胨1g NaCl 0.5g 淀粉 1% 琼脂1.5g 蒸馏水100ml PH=7.2----7.4

3.1.1.2淀粉培养基配制方法

1）称取按照配方称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，加入蒸馏水溶于小烧杯中，若有不融物，可加热溶解。

2）称取淀粉于小烧杯中，加入蒸馏水煮沸溶解，直至澄清透明。倒入上述烧杯中。3）定容

4）在三角瓶中加入琼脂，将定容后的溶液倒入三角瓶，调节PH值。

5）高压灭菌。

3.1.2 基础培养基 (唯一碳源)

3.1.2.1基础培养基配方

硫酸铵 2.0g K2HPO4 0.2g MgSO4·7H2O 0.2g CaCl2·2H2O 0.1g 蒸馏水 1000ml

碳源：蔗糖 5g 葡萄糖 5g

PH=7.2----7.4

3.1.2.2基础培养基配制方法

按照配方称取药品，配置两个基础培养基。其一以葡萄糖为唯一碳源，其二以蔗糖为唯一碳源。分别定容，调节PH值。高压灭菌。

3.1.3葡萄糖酸化培养基

3.1.3.1葡萄糖酸化培养基配方

蛋白胨 0.2g NaCl 0.5g 硝酸氢二钾 0.02g 葡萄糖 1g 蒸馏水100ml (灭菌后加入0.04%溴甲酚紫 1ml PH 7.4

3.1.3.2葡萄糖酸化培养基配制方法

按照配方称取药品，配制培养基，定容、调节PH值后，高压灭菌。在接种前加入溴甲酚紫。

3.2细菌的分离

3.2.1初筛

在淀粉培养基表面涂布土样，培养24小时。取出培养基，加碘。菌落周围有无色透明圈的即为产淀粉酶的菌株。

3.2.2复筛

取有透明圈产生的菌株，点在两个相同的淀粉培养基表面的相应位置，做好标记，培养24小时，进行复筛，确定产淀粉酶的菌株。

3.2.3观察

记录菌落形态，测量菌落直径和透明圈直径，记录并计算透明圈直径与菌落直径的比值，得到高产菌的淀粉酶菌株。对其中三种进行生理生化鉴定。

3.3生理生化鉴定

3.3.1唯一碳源

将选出的产淀粉酶的细菌分别接种于以蔗糖或葡萄糖为唯一碳源的液体培养基内，培养24小时，确定唯一碳源。（三种）

3.3.2葡萄糖酸化

在葡萄糖酸化培养基内加入溴甲酚紫至呈蓝紫色，将菌株接种于葡萄糖酸化培养基，培养24小时，观察颜色变化。若变为黄色则说明该菌株能利用葡萄糖产酸（三种）

3.2.3过氧化氢酶的鉴定

载玻片表面滴一滴过氧化氢溶液，挑选三种产淀粉酶的细菌放于溶液中，察观有无气泡产生。

表二生理生化鉴定

参考文献

【1】谷军.α-淀粉酶的生产与应用【J】.生物技术，1994,4（3）：1-5.

【2】张丽萍，徐岩，金建中，酸性α-淀粉酶的研究与应用【J】.酿酒，2002,29（3）：4-15.