胶原诱导性关节炎动物模型制作的步骤及方法

胶原诱导性关节炎动物模型制作的步骤及方法
自20世纪70年代次建立胶原诱导性关节炎动物模型以来，已有研究证实，类风湿关节炎患者血清及滑液中存在抗胶原抗体，且这种对胶原组织的自身免疫反应，可以解释类风湿关节炎所具有的系统性和慢性持续性发展的特点。

(1)复制方法将Ⅱ型胶原(是一种与免疫系统隔绝的蛋白质，大量存在于关节软骨中)溶于0.1mol/L的醋酸中，在4℃下搅拌充分溶解，浓度为2g/L，置4℃冰箱过夜，再将灭活卡介苗(BCG)置于液体石蜡中，配成2g/L的弗氏佐剂，将二者等体积混合、乳化，制成Ⅱ型胶原乳剂。

将该乳剂于小鼠的尾根部皮内注射0.1ml致炎，第21日腹腔注射乳剂0.1ml 作为激发注射。

(2)模型特点次免疫注射后，可在皮内注射部位形成多处小溃疡，此为局部炎症刺激反应，一般1周左右可自行结痂愈合；关节炎体征：致炎后24d，小鼠出现关节肿胀，先两个后足，然后蔓延到前足和尾部，并日渐加重，36d达高峰；用足爪仪测足爪变化，再致炎28d，足爪明显大于正常对照组。

在发病过程中，动物的毛色失去光泽，轻微脱毛，体重减轻，伴有耳及尾部的炎症病灶。

肉眼可见单个或多个关节红、肿，动物行动不便；光镜下，早期滑膜组织有中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润，继之滑膜细胞增生、排列紊
乱，纤维素渗出，胶原纤维沉着，纤维素样坏死，即滑膜炎表现；电镜下，滑膜细胞线粒体减少，溶酶体增多，细胞间隙增大；关节腔内渗出液细菌培养阴性，提示CIA为非感染性炎症。

CIA的骨质破坏与破骨细胞的异常表达关系密切，利用组织形态测定CIA小鼠近端胫骨及腰椎骨的骨质丢失，发现早期有大量破骨细胞和暂时性骨质构建，致炎后4周，在近端胫骨接近关节炎症部位，破骨细胞及骨小梁的数量比对照组增加4倍，腰椎部位未显示关节炎症状，破骨细胞募集较晚，随着时间的推进，在近端胫骨和腰椎有骨的吸收。

(3)比较医学 CIA作为RA的动物实验模型，表现为多发性外周关节炎，关节局部红肿，严重致关节畸形。

病理变化为增生性滑膜炎，关节软骨破坏、骨侵蚀，关节腔内有炎性细胞浸润。

体内可检出针对自身Ⅱ型胶原的高滴度的IgG抗体。

这些临床表现及实验室指标与人RA密切相关，是筛选和研究治疗RA药物的较理想模型。

不同品系的小鼠存在对CIA的遗传易感性，B10RⅢ系与R Ⅲs/J系小鼠第17号染色体上有共同的主要组织相溶性复合体，对CIA很有意义。

另外，也发现控制CIA的主要位点(Mcial；Lod 4.12)，位于3号染色体，与控制实验性变应性脑脊髓炎(EAE)的主要位点在同一区域；在13号染色体上也鉴定出一个控制CIA的位点，说明在MHC区以外存在有控
制CIA的新位点，也说明CIA受多基因控制。

BB大鼠对CIA 有易感性，在其MHC等位基因上存在易感基因。